慢性胃炎病人血清CagA抗體和胃黏膜炎癥活動性及Hp密度檢測

謝兆蘭，周立云，王明林，郭遂懷

（武漢市武昌醫院消化內科，湖北 武漢 430016）

幽門螺桿菌（Hp）相關性疾病主要包括慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關淋巴樣組織淋巴瘤、胃癌等［1－2］。其中，慢性胃炎是最常見的消化系統疾病。目前認為，Hp感染是慢性胃炎發生的最常見原因，但并非每次Hp感染均會產生明顯癥狀。流行病學資料顯示，全世界約有一半人感染Hp，但其中僅有10%的感染者可發展為明顯的臨床疾病，其原因與不同Hp菌株的毒力差異有關。細胞毒素相關基因A（CagA）是Hp重要的毒力基因，編碼細胞毒素相關蛋白，與胃黏膜炎癥改變甚至胃癌發生有密切關系。但是目前國內較少有CagA對慢性胃炎病人胃黏膜炎性活動度、Hp密度作用的研究，CagA和慢性胃炎胃黏膜萎縮、腸上皮化生關系也鮮有報道。本文對慢性胃炎病人進行血清CagA抗體檢測和胃黏膜組織病理學檢查，探討CagA與慢性胃炎病人胃黏膜炎癥活動度之間的關系，以及CagA對慢性胃炎病人Hp密度、胃黏膜萎縮和腸上皮化生的影響，以期為慢性胃炎的臨床治療提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年4—8月，選擇在我院經胃鏡檢查診斷為慢性胃炎，C14呼氣試驗陽性病人80例，男49例，女31例；年齡24～60歲，平均（46.25±4.51）歲。慢性胃炎胃鏡診斷符合悉尼系統及2000年國內慢性胃炎研討會標準［3］。排除標準：①對胃部存在影響的器質性疾病如心力衰竭、嚴重肝衰竭、腎衰竭者；②于4周內使用過對Hp有影響的藥物，如質子泵抑制劑、H2受體拮抗劑、抗生素、鉍劑等；③孕婦、腫瘤病人。所有受檢者均簽署知情同意書。所有入選病人行胃鏡檢查時于距幽門前3～5cm 處鉗取胃竇組織3塊用于檢查。

1.2 檢測指標及方法

1.2.1 血清CagA抗體檢測 采集病人空腹靜脈血2mL，離心10min（6 000～8 000r／min），取上清液，置于－20℃冰箱中保存。應用CagA ELISA試劑盒（深圳欣康基因數碼科技有限公司），酶免疫技術測定血清CagA抗體，按試劑盒說明操作。

1.2.2 胃黏膜病理學檢查 將胃黏膜組織標本置于40g／L甲醛溶液中固定，常規石蠟包埋、切片，顯微鏡下觀察。參照文獻［3］的標準，由病理科醫師觀察以下指標：黏膜炎癥活動性，萎縮、腸上皮化生情況，Hp密度。炎癥活動性程度分級為：輕度，黏膜固有層少數中性粒細胞浸潤；中度，中性粒細胞較多存在于黏膜層，并在表面上皮細胞間、小凹上皮細胞間或腺管上皮間等均可見；重度，中性粒細胞較密集，或除中度所見外還見小凹膿腫。在蘇木精－伊紅和GIEMSA染色切片上，應用高倍鏡（100倍）觀察，Hp主要分布于胃黏膜黏液層、胃小凹和腺管上皮表面、腔內，呈稍彎曲的桿狀或棒狀。Hp密度分級：輕度，偶見或小于標本全長1／3有少數Hp；中度，Hp分布超過標本全長1／3而未達2／3，或連續性、薄而稀疏地存在于上皮表面；重度，Hp成堆存在，基本分布于標本全長。

1.3 統計學處理

應用SPSS 11.5軟件進行統計分析，計數資料比較采用Fisher確切概率或卡方檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗。P＜0.05為差異有顯著性。

2 結 果

2.1 慢性胃炎病人血清CagA抗體陽性情況

本文研究結果顯示，80例慢性胃炎病人血清CagA抗體陽性52例（65.0%），陰性28例（35.0%）。CagA抗體陽性病人中男33例（41.2%），女19例（23.7%）；CagA抗體陰性病人中男16 例（20.0%），女12例（15.0%）。

2.2 慢性胃炎病人血清CagA抗體與胃黏膜病理改變的關系

慢性胃炎CagA抗體陽性組病人胃黏膜炎癥活動性程度顯著高于同性別的CagA抗體陰性組，差異有顯著性（χ2＝12.161、6.111，P＜0.05）。CagA抗體陽性組胃黏膜腸上皮化生、萎縮情況與同性別CagA抗體陰性組相比較，差異均無顯著意義（P＞0.05）。不同性別間各指標差異均無顯著性（P＞0.05）。見表1～3。

2.3 慢性胃炎血清CagA抗體與Hp密度的關系

CagA抗體陽性組胃黏膜Hp密度與同性別CagA抗體陰性組相比，差異無顯著性（P＞0.05）。不同性別間比較差異無顯著性（P＞0.05）。見表4。

表1 CagA抗體反應與胃黏膜炎癥程度關系（例）

表2 CagA抗體反應與胃黏膜腸上皮化生關系（例）

表3 CagA抗體反應與胃黏膜萎縮關系（例）

表4 CagA抗體反應與Hp密度的關系（例）

3 討 論

Hp于1983年首先由澳大利亞學者WARREN和WARSHALL從胃黏膜活檢組織中分離出來，是一種微需氧、革蘭陰性螺旋形細菌。Hp與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關淋巴樣組織淋巴瘤甚至胃癌等疾病密切相關，已被國際癌癥研究機構（IARC）列為Ⅰ類致癌物之一。Hp為一種寄生于人體的條件致病菌，可以在胃黏膜中長期定植，其CagA毒力基因的表達與B型胃炎的發生與發展密切相關［4］。CagA是位于細胞表面的親水性免疫顯性蛋白，血清學檢測約60%的Hp含有此蛋白。CagA是Hp的重要毒力因子之一，存在于所有具有空泡毒素活性的Hp菌株中，雖不直接介導毒素活性，但與空泡毒素的表達密切相關，因此稱為細胞毒素相關蛋白。

本研究80例慢性胃炎病人血清CagA抗體陽性率為65.0%，慢性胃炎CagA抗體陽性組胃黏膜炎癥活動性程度顯著高于CagA抗體陰性組，差異有顯著性。與文獻［5］結果基本相符，提示CagA與慢性胃炎的炎癥活動性程度相關，是引起慢性胃炎的重要致病因子［6］。本文結果顯示，CagA抗體陽性組與陰性組間Hp密度及胃黏膜腸上皮化生、萎縮情況比較，差異無顯著性。提示CagA并非致胃黏膜萎縮、腸上皮化生的特異性因子；同時，性別對以上指標結果無影響。本實驗將性別區分開來對各項數據進行分析，排除了性別可能對分析結果產生的干擾。

既往研究結果已證實，在與Hp感染相關的B型胃炎中，CagA陽性的Hp可通過Ⅳ型分泌系統將CagA蛋白注入到胃上皮細胞中，并誘導IL－8轉錄及蛋白水平表達上調，從而導致中性粒細胞的募集和胃黏膜組織的炎性損傷［7－8］，有利于人體對Hp進行清除。本文結果顯示，CagA抗體陽性的慢性胃炎病人胃黏膜中炎癥活動性程度顯著強于CagA抗體陰性組，推測這一現象可能與上述機制密切相關。然而，與未攜帶CagA基因的Hp相比，CagA蛋白表達陽性的Hp在胃黏膜層中的密度未見顯著降低。該結果提示，盡管CagA基因的表達會誘導中性粒細胞在胃黏膜組織的浸潤和炎性損傷的加重，人體卻無法有效清除Hp在胃黏膜中的定植，導致慢性胃炎反復發作，遷延不愈，增加了癌變的潛在危險。其原因可能為CagA并非Hp感染致病的單一因素，人體的細胞免疫應答功能可能在清除Hp感染的過程中起著關鍵性作用［9］，具體機制還有待進一步深入研究。

綜上所述，CagA作為Hp的毒力蛋白，可誘導中性粒細胞在胃黏膜的募集，加重局部胃黏膜的炎癥活動性；人體無法有效清除Hp在胃黏膜中的定植。同時，CagA對胃黏膜的腸上皮化生、萎縮影響不大。

［1］董麗麗，項鋒鋼，高建青.胃癌組織Survivin蛋白表達及其與Hp感染關系［J］.齊魯醫學雜志，2008，23（6）：489－491.

［2］朱淑珍，項鋒鋼，李宏.胃癌組織FHIT蛋白表達及其與幽門螺桿菌感染關系［J］.青島大學醫學院學報，2009，45（2）：119－121.

［3］中華醫學會消化病學分會.全國慢性胃炎研討會共識意見［J］.中華消化雜志，2000，6（20）：199－201.

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［5］MOLAEI M，FOROUQHI F，MASHAYEKHI R，et al.CagA status and VacA subtypes of Helicobacter pylori in relation to histopathologic findings in Iranian population［J］.Indian J Pathol Microbiol，2010，53（1）：24－27.

［6］NESE K K，KIVANC C K.Significance of cagA status and vacA subtypes of Helicobacter pylori in determining gastric histopathology：Virulence markers of H.pylori and histopathology［J］.Gastroenterology，2006，10：1440－1746.

［7］MIZUNO T，ANDO T，NOBATA K，et al.Interleukin－17 levels in Helicobacter pylori－infected gastric mucosa and pathologic sequelae of colonization ［J］.World J Gastroenterol，2005，11：6305－6311.

［8］HARRINGTON L E，MANGAN P R，WEAVER C T.Expanding the effector CD4T－cell repertoire：the Th17lineage［J］.Curr Opin Immunol，2006，18：349－356.

［9］YUAN Z，YUN S.Helicobacter pylori－infected macrophages induce Th17cell differentiation［J］.Immunobiology，2011，216：200－207.