復方血栓通膠囊改善小鼠腦缺血與耐缺氧作用

邵夢茹,文思,劉靜,朱厚曦

(1.廣州中醫藥大學中藥學院,廣州 510006;2.廣東眾生藥業股份有限公司,東莞 523325)

復方血栓通膠囊改善小鼠腦缺血與耐缺氧作用

邵夢茹1,文思1,劉靜1,朱厚曦2

(1.廣州中醫藥大學中藥學院,廣州 510006;2.廣東眾生藥業股份有限公司,東莞 523325)

目的 觀察復方血栓通膠囊改善腦缺血與耐缺氧的作用。方法將昆明小鼠隨機分為假手術組(正常對照組),模型對照組,復方血栓通膠囊低、中、高(0.75,1.50,2.25 g·kg-1)劑量組,尼莫地平片組和腦安膠囊組,均連續灌胃給藥7 d。結扎單側頸總動脈制備小鼠實驗性腦缺血模型,觀察其腦含水量、腦卒中指數;耐缺氧實驗觀察小鼠常壓耐缺氧、亞硝酸鈉中毒、急性腦缺氧存活時間。結果復方血栓通膠囊低、中、高劑量組均能不同程度地降低單側頸總動脈結扎小鼠腦含水量,減小腦卒中指數(P＜0.05,P＜0.01);均能不同程度地延長小鼠常壓耐缺氧、亞硝酸鈉中毒、急性腦缺氧存活時間(P＜0.05,P＜0.01)。結論復方血栓通膠囊具有改善小鼠腦缺血和耐缺氧的作用。

血栓通膠囊,復方;缺血,腦;耐缺氧;小鼠

復方血栓通膠囊由三七、黃芪、丹參、玄參組成,具有活血化瘀、益氣養陰的功效,臨床適用于血瘀兼氣陰兩虛引起的視網膜靜脈阻塞和穩定性勞累型心絞痛。筆者在本實驗中對復方血栓通膠囊防治缺血性腦卒中的藥效學進行研究,通過制備小鼠腦缺血、缺氧模型,觀察其抗腦缺血、缺氧的作用,以增加其適應證。

1 材料

1.1 動物 昆明小鼠,SPF級,雌雄各半,體質量18～22 g,購自廣州中醫藥大學實驗動物中心,生產許可證號:SCXK(粵)2008-0020,實驗許可證號:SYXK(粵) 2008-0001,飼養在廣州中醫藥大學實驗動物中心,SPF級實驗動物房,室溫(25±1)℃,自由飲水,采用12 h∶12 h晝夜間斷照明,每周換水3次,換墊料2次。

1.2 試藥 復方血栓通膠囊,廣東眾生藥業股份有限公司,批號:111219。尼莫地平片,廣東華南藥業集團有限公司,批號:120202。腦安膠囊,遼源譽隆亞東藥業有限責任公司,批號:111264。水合氯醛,天津市科密歐化學試劑有限公司,批號:20111114;硫酸慶大霉素,天津藥業焦作有限公司,批號:10092022;鹽酸異丙腎上腺素注射液,上海禾豐制藥有限公司,批號:110204;亞硝酸鈉,天津市大茂化學試劑廠,批號:2011092;鈉石灰,天津市福晨化學試劑廠,批號:20110712。

1.3 儀器 DGX-924513-2烘箱,上海福瑪實驗設備有限公司,J0020037;EL204電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司,20082163。

1.4 統計學方法 實驗數據采用SPSS17.0版統計軟件處理。計量資料求均數±標準差(±s),在方差齊性基礎上,多組間均數比較采用ANOVA,組間兩兩比較采用最小顯著差法。

2 方法與結果

2.1 對小鼠腦缺血的影響 取昆明小鼠82只,按隨機數字表法分為假手術組,模型對照組,腦安膠囊組,尼莫地平片組,復方血栓通膠囊低、中、高劑量組。灌胃給藥,每天1次,連續7 d,于末次給藥后1 h,乙醚麻醉,從頸部正中切口,分離并用絲線結扎右側頸總動脈,假手術組只穿線不結扎。造模后分別于2,12 h給藥,連續動態觀察缺血不同時間點(1,3,6,9,12 h)的腦卒中指數,并測定計算腦含水量,腦含水量(%)= (濕腦質量-干腦質量)/濕腦質量×100%。腦卒中指數判斷標準:毛蓬亂豎起計為1分,動作緩慢或活動減少計為1分,觸耳反應加強計為1分,眼瞼下垂計為1分,頭翹起計為3分,不閉眼計為3分,后肢向外向后伸展計為3分,轉圈計為3分,抽搐或陣攣計為3分,四肢無力計為6分,總分25分[1-2]。結果見表1,2。

由表1可知,與假手術組比較,模型對照組小鼠腦含水量顯著增加(P＜0.05);與模型對照組比較,尼莫地平片組、腦安膠囊組和復方血栓通膠囊低、中、高劑量組小鼠腦含水量均顯著減少(P＜0.05或P＜0.01)。

由表2可知,與假手術組比較,模型對照組小鼠腦卒中指數在缺血1,3,6,9,12 h均顯著增加(P＜0.01);與模型對照組比較,給藥組缺血后腦卒中指數,復方血栓通膠囊低劑量組在9 h,復方血栓通膠囊高劑量組在1,3,6,9 h,尼莫地平片組在3,6,9,12 h,腦安膠囊組在3,9 h顯著降低(P＜0.05,P＜0.01)。

2.2 耐缺氧實驗

2.2.1 常壓耐缺氧實驗 昆明小鼠70只,按隨機數字表法分為正常對照組,模型對照組,腦安膠囊組,尼莫地平組,復方血栓通低、中、高劑量組。灌胃級藥,每天1次,連續7 d。最后一次給藥前禁食不禁水12 h,給藥30 min后,除正常對照組外其余各組按15 mg·kg-1劑量腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素,換算注射量為0.1 mL·(10 g)-1,注射后30 min,將小鼠放入盛有8 g鈉石灰的容積為250 mL的廣口瓶內,每次1只,將瓶口用塞子封住,立即計時,以停止呼吸為指標觀察小鼠存活時間[1-2]。結果見表3。

表1 7組小鼠腦含水量測定結果Tab.1 Results of cerebral water content in seven groups of mice ±s

表1 7組小鼠腦含水量測定結果Tab.1 Results of cerebral water content in seven groups of mice ±s

與假手術組比較,*1P＜0.05;與模型對照組比較,*2P＜0.01,*3P＜0.05Compared with shamoperation group,*1P＜0.05;compared with model control group,*2P＜0.01,*3P＜0.05

組別小鼠/只劑量/ (g·kg-1)腦含水量/ %假手術組10…77.97±0.23模型對照組12…78.37±0.40*1尼莫地平片組120.0477.83±0.24*2腦安膠囊組110.5377.97±0.37*3復方血栓通低劑量組120.7577.87±0.13*2中劑量組121.5078.08±0.17*3高劑量組122.2577.90±0.29*2

表3顯示,與正常對照組比較,模型對照組小鼠存活時間顯著縮短(P＜0.01);與模型對照組比較,尼莫地平片組、腦安膠囊組、復方血栓通膠囊中劑量組小鼠存活時間顯著延長(P＜0.05,P＜0.01)。

2.2.2 亞硝酸鈉中毒實驗 昆明小鼠60只,按隨機數字表法分為正常對照組,腦安膠囊組,尼莫地平組,復方血栓通低、中、高劑量組。灌胃給藥,每天1次,連續7 d。最后一次給藥前禁食不禁水12 h,給藥30 min后,每只小鼠按240 mg·kg-1腹腔注射亞硝酸鈉,注射量為0.1 mL·(10 g)-1,注射完畢立即計時,記錄小鼠從注射完畢至死亡的時間。結果見表4。由表4可知,與正常對照組比較,尼莫地平片組、復方血栓通中劑量組小鼠存活時間顯著延長(P＜0.01)。

表2 7組小鼠不同時間腦卒中指數測定結果Tab.2 Results of stroke index in seven groups of mice at different time points ±s

表2 7組小鼠不同時間腦卒中指數測定結果Tab.2 Results of stroke index in seven groups of mice at different time points ±s

與正常對照組比較,*1P＜0.01;與模型對照組比較,*2P＜0.01,*3P＜0.05Compared with normal control group,*1P＜0.01;compared with model control group,*2P＜0.01,*3P＜0.05

組別劑量/ (g·kg-1)1 h3 h6 h9 h12 h正常對照組…0.00±0.000.00±0.000.00±0.000.00±0.000.00±0.00模型對照組…13.08±1.98*113.58±1.68*113.08±1.83*112.83±1.85*110.27±1.79*1尼莫地平片組0.0412.83±2.2511.17±1.59*210.92±2.23*310.00±1.13*28.75±1.71*3腦安膠囊組0.5312.45±1.8611.64±2.46*311.36±2.429.27±2.69*29.36±2.66復方血栓通低劑量組0.7513.00±2.1312.67±1.8311.50±2.0711.08±2.15*38.67±2.81中劑量組1.5012.83±1.9512.83±1.8511.58±1.9812.00±1.769.67±2.02高劑量組2.2511.25±2.18*310.67±1.67*210.25±2.22*29.83±1.95*28.33±2.64

表3 7組小鼠存活時間測定結果Tab.3 Results of survival time in seven groups of mice ±s

表3 7組小鼠存活時間測定結果Tab.3 Results of survival time in seven groups of mice ±s

與正常對照組比較,*1P＜0.01;與模型對照組比較,*2P＜0.01,*3P＜0.05Compared with normal control group,*1P＜0.01;compared with model control group,*2P＜0.01,*3P＜0.05

組別小鼠/只劑量/ (g·kg-1)存活時間/ min正常對照組10…11.01±1.08模型對照組10…7.28±0.52*1尼莫地平片組100.049.11±1.36*2腦安膠囊組100.538.36±1.64*3復方血栓通低劑量組100.757.81±0.92中劑量組101.508.36±0.47*2高劑量組102.257.98±0.85

表4 6組小鼠存活時間測定結果Tab.4 Results of survival time in six groups of mice ±s

表4 6組小鼠存活時間測定結果Tab.4 Results of survival time in six groups of mice ±s

與正常對照組比較,*1P＜0.01Compared with normal control group,*1P＜0.01

組別小鼠/只劑量/ (g·kg-1)存活時間/ min正常對照組10…16.58±1.75尼莫地平片組100.0421.07±1.80*1腦安膠囊組100.5317.67±2.07復方血栓通低劑量組100.7516.96±1.49中劑量組101.5019.15±1.62*1高劑量組102.2517.29±1.37

2.2.3 急性腦缺氧實驗 昆明小鼠60只,分組和給藥方法同“2.2.2項。最后一次給藥前禁食不禁水12 h,給藥30 min后,各組動物快速自頸部斷頭,記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時間[1-2]。結果見表5。

表5顯示,與正常對照組比較,尼莫地平片組、腦安膠囊組、復方血栓通膠囊低、中、高劑量組小鼠喘息時間均顯著延長(P＜0.05,P＜0.01)。

3 討論

缺血性腦卒中發病機制多為動脈血栓形成及腦梗死[3]。腦動脈一旦栓塞,腦組織得不到足夠的血液灌注而發生缺血、缺氧,即開始了缺血性腦卒中的病理、生理演變過程[4]。

表5 6組小鼠喘息時間測定結果Tab.5 Results of gasping time in six groups of mice ±s

表5 6組小鼠喘息時間測定結果Tab.5 Results of gasping time in six groups of mice ±s

與正常對照組比較,*1P＜0.01,*2P＜0.05Compared with normal control group,*1P＜0.01,*2P＜0.05

組別劑量/ (g·kg-1)小鼠數喘息時間/ s正常對照組…1021.00±2.31尼莫地平片組0.041025.10±2.13*1腦安膠囊組0.531024.30±3.34*2復方血栓通低劑量組0.751025.70±2.06*1中劑量組1.51026.10±2.47*1高劑量組2.251027.00±3.33*1

復方血栓通膠囊主要成分三七、丹參活血化瘀,黃芪益氣,玄參養陰、清熱涼血。有研究表明復方血栓通可以降低血小板活性,抑制血小板聚集,提高纖維蛋白溶解酶的活性,增強血管舒縮調節功能,減少缺血血管的進一步損傷[5],此外復方血栓通膠囊還具有調整血脂水平、降低血液黏滯度及鈣通道阻斷作用,并加速神經功能的恢復。上述研究成果提示復方血栓通膠囊防治缺血性腦卒中的可行性。

研究表明,與模型對照組相比,復方血栓通膠囊能顯著降低單側頸總動脈結扎小鼠腦含水量,減小腦卒中指數(P＜0.01);能顯著延長小鼠常壓耐缺氧、亞硝酸鈉中毒、急性腦缺氧存活時間(P＜0.01)。結果提示,復方血栓通膠囊具有改善小鼠腦缺血、耐缺氧的作用,為其進一步防治缺血性腦卒中的研究提供了一定的依據。

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[2] 徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].3版.北京:人民衛生出版社,2003:1060-1068.

[3] 汪鐘,鄭植荃.現代血栓病學[M].北京:北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社,1997:3,385.

[4] 邢成名.缺血性腦血管病[M].北京:人民衛生出版社, 2003:110.

[5] 徐國海,吳照華.三七總苷片與洛丁新治療早期糖尿病腎病的對比研究[J].現代中西醫結合雜志,2000,23(29): 2330.

DOI 10.3870/yydb.2014.07.007

Effects of Compound Xueshuantong Capsule Against Cerebral Ischemia and Hypoxia in Mice

SHAO Meng-ru1,WEN Si1,LIU Jing1,ZHU Hou-xi2
(1.School of Chinese Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China;2.Guangdong Zhongsheng Pharmaceutical Co.,Ltd.Dongguan 523325,China)

ObjectiveTo study the effects of the compoundxueshuantongcapsule(FXC)against cerebral ischemia and hypoxia in mice.MethodsKMmice were randomly divided into the shamoperation group(normal control group),model control group,positive control group and FXC at high-,medium-and low-dose(0.75,1.50,and 2.25 g·kg-1)groups.After intragastric administration for 7consecutive days,cerebral ischemia model was established by unilateral carotid arteries ligation. The cerebral water content and stroke index were recorded.The viability of the mice was determined by testing atmospheric hypoxia,sodiumnitrite poisoning and acute cerebral anoxia.ResultsFXC decreased water content and stroke index of the mice suffered fromunilateral carotid artery ligation dose-dependently(P＜0.05,P＜0.01).It also prolonged the survival of mice by tolerating absence of oxygen,sodiumnitrite poisoning and acute cerebral anoxia(P＜0.05,P＜0.01).ConclusionFXC has a protective effect on cerebral ischemia and hypoxia in mice.

Xueshuantongcapsule,compound;Ischemia,cerebral;Tolerating absence of oxygen;Mice

R286;R965

A

1004-0781(2014)07-0866-03

2013-08-18

2013-09-15

邵夢茹(1989-),女,浙江溫州人,在讀碩士,研究方向:中藥新藥與保健品開發。E-mail:shaomengrukiking@ 163.com。

朱厚曦,男,工程師,研究方向:新藥研究與開發。E-mail:zhuhouxi@126.com。