α-硫辛酸對2型糖尿病患者尿podocalyxin及MCP-1排泄的影響

鮑溪荷，徐 將，葉山東，楊春林

（安徽醫科大學附屬省立醫院1.內分泌科、2.生化實驗室，安徽合肥 230001）

α-硫辛酸（alpha-lipoic acid，ALA）是一種存在于線粒體的酵素，通過清除氧自由基、還原體內抗氧化系統、螯合金屬離子等發揮強抗氧化作用［1］。臨床上已被廣泛用于治療糖尿病相關并發癥，但有關其對糖尿病腎臟足細胞的保護和抗炎作用的研究尚少。糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）發病機制復雜，現研究認為炎癥反應及足細胞損傷參與了DN發生發展的全過程［2］。足細胞損傷也已被證明［3］與DN蛋白尿及腎小球硬化密切相關。podocalyxin（PCX）正常表達于足細胞，是足細胞標志蛋白之一，對維持腎小球正常結構及濾過屏障起重要作用。本研究通過觀察正常人和2型糖尿病（type 2 diabetesmellitus，T2DM）患者PCX和 MCP-1濃度的差異，以及ALA治療前后排泄水平的變化，探討ALA對T2DM患者腎小球足細胞的保護作用及其與抗炎之間的可能關系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象 糖尿病組（DM組）36例，均為2011全年我院內分泌科門診隨訪的T2DM患者，年齡34～66（51.50±10.40）歲，男22例，女14例。DM組依照1999年世界衛生組織糖尿病診斷標準：糖尿病癥狀＋任意時間血漿葡萄糖水平≥11.1 mmol·L－1或空腹血漿葡萄糖（FPG）水平≥7.0 mmol·L－1或口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）試驗中，2 h血漿葡萄糖（2hPG）水平≥11.1 mmol·L－1，重復一次確認。排除標準如下：①有嚴重心腦血管、肝、腎等疾病者；②有泌尿系統自身疾病或除糖尿病外引起的繼發性腎臟疾病者；③有感染、腫瘤及免疫性疾病者；④近期發生過糖尿病急性并發癥（如酮癥酸中毒、高滲性昏迷及乳酸酸中毒等）和嚴重的慢性并發癥者；⑤近期有服用腎毒性藥物史者；⑥1周內服用過利尿劑、醛固酮受體拮抗劑、血管緊張素轉化酶抑制劑、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑及血管活性藥物者。6個月結束后，受試對象共計34例（1例主動退出，1例出現酮癥退出）。同期選擇我院體檢中心30名健康體檢人員作為正常對照組（NC組），年齡32～68（51.37±9.69）歲。

1.1.2 藥物和試劑 硫辛酸分散片（煙臺只楚藥業公司生產，批號2007L01107，100 mg／片）；PCX、MCP-1 ELISA試劑盒（R＆D Systems公司提供）；肌酐測定試劑盒（上海榮盛生物藥業有限公司提供）；尿白蛋白及葡萄糖測定試劑盒（北京北方生物技術研究所提供）。

1.1.3 儀器 Biocell HT-1酶標儀（奧地利）；Ultra2全自動糖化血紅蛋白分析儀（Primus公司，美國）；BNII全自動血漿蛋白分析儀（Behring公司，德國）；7600-020全自動生化分析儀 （日立公司，日本）。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 DM組在原有糖尿病治療方案的基礎上加用硫辛酸分散片（煙臺只楚藥業公司生產，批號2007L01107，100 mg／片，每天 3次，每次 2片），連續口服 6個月，受試期間控制飲食和運動，根據血糖情況調整降糖藥用量，維持血糖濃度相對穩定（FPG：5.1～9.3 mmol·L－1，2hPG：10 mmol·L－1以下）。記錄所有受試人員的性別、年齡、病程、SCr、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP），計算 BMI。

1.2.2 標本收集 受試者隔夜空腹8 h以上，清晨取空腹靜脈血，檢測糖化血紅蛋白（HbA1c）、FPG及SCr，同時用無菌培養杯，收集清晨第1次中段尿4 m l，－40℃保存，待測尿ALB、Cr、PCX和MCP-1，治療6個月后，復測上述指標。

1.2.3 檢測指標 尿PCX、MCP-1采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定，并嚴格按照試劑盒說明書操作；尿ALB測定采用免疫比濁法；血、尿Cr測定采用酶法；FPG檢測采用己糖激酶法；HbA1c測定采用高壓液相色譜法。為減少受試者尿量及濃度變化對測定結果的影響，尿PCX、MCP-1和ALB濃度分別采用尿 PCX／Cr（UPCR）、MCP-1／Cr（UMCR）、和ALB／Cr（UACR）表示。

1.3 統計學分析 數據運用統計軟件SPSS 16.0進行統計分析，計量資料以表示，治療前后組內差異分析采用配對t檢驗，組間比較采用兩獨立樣本資料的t檢驗，數據的相關分析采用直線相關分析。

2 結果

2.1 兩組基線資料比較 DM組與NC組相比，性別、年齡、病程、血肌酐（SCr）、血壓、體質指數（BMI）差異無統計學意義，均具可比性，見Tab 1。DM組FPG、HbA1c及UACR、UPCR、UMCR水平較NC組明顯升高（P＜0.01）。

Tab 1 Comparison of clinical indexes between diabetic and normal control group

Tab 1 Comparison of clinical indexes between diabetic and normal control group

Group Age（yr） n（M／F）BMI／kg·m－2 SBP／kPa DBP／kPa SCr／μmol·L－1 NC 51.37±9.69 30（16／14）25.39±2.55 15.05±4.92 9.04±3.43 58.66±9.49 DM 51.50±10.40 34（21／13） 25.37±2.50 16.63±1.62 10.19±0.95 70.96±12.58

2．2 治療前后 FPG、HbA1c及 UACR、UPCR、UMCR水平比較 經ALA治療6個月后，UACR、UPCR和UMCR水平較治療前明顯下降，差異有統計學意義（P＜0.01），FPG和HbA1c較治療前比較差異無統計學意義，見Tab 2。

Tab 2 Comparison of FBG，HbA1c，UACR，UPCR and UMCR levels between the groups before and after therapy

Tab 2 Comparison of FBG，HbA1c，UACR，UPCR and UMCR levels between the groups before and after therapy

＃＃P＜0.01 vs NCgroup；*P＜0.05，**P＜0.01 vs DM group of pre-treatment

FPG／mmol·L－1 5.02±0.57 6.92±1.14＃＃6.97±1.49 HbA1c／% 5.65±0.41 6.92±0.82＃＃ 6.90±0.78 UACR／mg·g－1·Cr 8.97±3.98 52.65±29.56＃＃ 26.77±21.46**UPCR／μg·g－1·Cr 46.18±29.53 423.78±98.05＃＃ 246.71±77.15**UMCR／μg·g－1·Cr 3.64±1.13 7.77±0.79＃＃ 7.05±1.70*

2.3 相關性分析 以UPCR水平作為應變量，分別以UACR、UMCR為自變量進行直線相關性分析，顯示UPCR與UACR、UMCR分別呈正相關（r＝0.720，P＜0.01）、（r＝0.516，P＜0.01）。

3 討論

尿白蛋白（urinary albumin，UALB）排泄增加是反映腎臟疾病及腎小球功能受損的敏感指標，而足細胞結構和功能的改變是導致腎小球濾過膜通透性增高和蛋白尿產生的重要原因［4］。Okamura等［4］發現，DN患者的腎小球足細胞功能及結構均有不同程度損傷。PCX作為一種帶負電荷的唾液粘蛋白分子，是足突頂端質膜的主要構成部分［5］。Habara等［6］研究證實，幾乎所有的腎小球疾病患者尿液中均能檢測到PCX。已有研究報道［7］，尿PCX排泄的變化可作為足細胞損傷的早期標志物，并能監測足細胞損傷程度。本研究結果顯示，T2DM患者尿PCX排泄增加，并與UALB水平呈正相關，提示T2DM患者存在足細胞損害并參與蛋白尿的形成，與文獻報道一致［3－8］。

近期研究發現［5］，ALA對糖尿病腎臟損害也具有較好的保護作用，但其機制不十分明確。本實驗顯示，ALA治療6個月后，T2DM患者UALB和PCX排泄均明顯降低，提示ALA可保護糖尿病腎小球足細胞，且作用可能與其減少UALB排泄部分有關。Tarabra等［7］發現，腎小球足細胞是MCP-1基因表達的主要部位。MCP-1與受體結合后能夠刺激足細胞，增強其遷移能力，增加腎小球濾過膜通透性，引起白蛋白漏出。本實驗結果顯示，T2DM患者經ALA治療后MCP-1排泄明顯減少，且與UPCR水平呈正相關，提示ALA可能通過抗炎作用減輕足細胞損傷。

總之，本研究初步證實，ALA可減輕T2DM患者腎臟局部增強的炎癥反應，減輕足細胞損傷、減少尿蛋白漏出，對腎臟提供一定的保護作用，確切機制值得進一步探討。

參考文獻：

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［2］ 李桂林，梁尚棟.趨化因子5及其受體CCR5與糖尿病并發癥［J］.中國藥理學通報，2011，27（10）：1333－7.

［2］ Li G L，Liang SD.Chemokines5 with its receptors CCR5 and diabetes complications［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27（10）：1333－7.

［3］ Lee H S.Mechanisms and consequences of TGF-βoverexpression by podocytes in progressive podocyte disease［J］.Cell Tissue Res，2012，347（1）：129－40.

［4］ Okamura K，Dummer P，Kopp J，etal.Endocytosis ofalbumin by podocytes elicits an inflammatory response and induces apoptotic cell death［J］.PLoSOne，2013，8（1）：e54817.

［5］ Skoberne A，Konieczny A，Schiffer M.Glomerular epithelial cells in the urine：whathas to be done tomake them worthwhile［J］.Am JPhysiol Renal Physiol，2009，296（2）：F230－41.

［6］ Habara P，MareckováH，SopkováZ，et al.A novelmethod for the estimation of podocyte injury：podocalyxin－positive elements in urine［J］.Folia Biol（Praha），2008，54（5）：162－7.

［7］ Tarabra E，Giunti S，Barutta F，etal.Effectof themonocyte chemoattractant protein-1／CC chemokine receptor2 system on nephrin expression in streptozotocin-treated mice and human cultured podocytes［J］.Diabetes，2009，58（9）：2109－18.

［8］ Hara M，Yamagata K，Tomino Y，etal.Urinary podocalyxin is an earlymarker for podocyte injury in patients with diabetes：establishment of a highly sensitive ELISA to detect urinary podocalyxin［J］.Diabetologia，2012，55（11）：2913－9.