多囊卵巢綜合征大鼠模型建立及其血清25羥基維生素D3水平關聯性分析

謝博超 陳忠東

（湖南省衡陽市南華大學附屬第一醫院，湖南 衡陽 421001）

多囊卵巢綜合征大鼠模型建立及其血清25羥基維生素D3水平關聯性分析

謝博超 陳忠東

（湖南省衡陽市南華大學附屬第一醫院，湖南 衡陽 421001）

目的 運用來曲唑誘導建立多囊卵巢綜合征（PCOS）大鼠模型，并分析維生素D干預對PCOS大鼠相關血清指標的關聯性。方法 運用來曲唑誘導SD大鼠建立PCOS大鼠模型30只，與相同SD常規飼養大鼠15只比較分析兩組大鼠血清LH、FSH、E2、P、T以及LH/FSH比值，并觀察卵巢組織學變化。剩余15只實驗組大鼠模型進行維生素D干預飼養，比較分析上述血清指標，并進行相關性分析。結果 實驗組與對照組比較，血清E2無差異（P＞0.05）；實驗組LH升高、FSH升高、LH/FSH比值增大、P降低，兩組比較有統計學意義（P＜0.05）；實驗組大鼠血清T顯著升高，與對照組比較有顯著統計學意義（P＜0.01）；維生素D干預后血清激素水平與干預前比較，血清LH、FSH、T以及LH/FSH均減低，差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；血清E2輕微升高，干預前后差異無統計學意義（P＞0.05）；血清P升高，干預前后差異有統計學意義（P＜0.05）。維生素D干預后大鼠BMI、HOMA-IR、T以及FPG呈負相關關系（P＜0.05）；與E2呈正相關關系（P＜0.05）；此外，大鼠血清PRL、FSH、LH、TC與血清25-（OH）D3無相關性。結論 來曲唑誘導建立的PCOS大鼠血清激素水平和卵巢形態改變于人體接近，符合要求。維生素D缺乏與PCOS發生有密切關系，其預防和治療PCOS有潛在價值。

來曲唑；多囊卵巢綜合征；25羥基維生素D3；相關性

目前，多囊卵巢綜合征在婦科生殖疾病中越來月常見，據統計，該病占育齡婦女的5%～10%[1]。PCOS的主要臨床特征為患者雄激素水平過高以及持續性不排卵狀態。目前該病的具體發病機制尚無統一的定論。為有效的研究PCOS發病后機體相關激素的變化情況以及治療方案，本研究以來曲唑誘導大鼠建立PCOS模型，并進行維生素D干預研究，分析其相關性。

1 材料與方法

1.1 材料

來曲唑片為江蘇瑞恒醫藥股份有限公司生產，批號20130811；放射免疫試劑盒為武漢博士德生物工程公司生產，批號SA1020；所用45只6周齡清潔級雌性SD大鼠購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，產品型號：12910371116。

1.2 方法

將45只6周齡清潔級雌性SD大鼠隨機分為實驗組30只與對照組15只。實驗組大鼠運用來曲唑1 mg/（kg·d）溶于1%羧甲基纖維素10 mL，連續灌服21 d。在最后一次灌服藥物后12 h，隨機選取15只實驗組大鼠麻醉后心臟采血，以2000 r/min離心20 min后抽取血清進行檢測，然后取出大鼠卵巢和子宮，隨后進行稱重，并將卵巢石蠟包埋HE然后后顯微鏡下觀察。對照組15只大鼠進行灌服1%羧甲基纖維素，其余飼養與實驗組相同，共計21天。用相同的方法采取大鼠血液進行檢測，并稱重卵巢與子宮，并用相同方法對卵巢進行制片觀察。實驗組剩余15只大鼠在運用來曲唑1 mg/（kg·d）溶于1%羧甲基纖維素10 mL，連續灌服21 d后接受維生素D灌服，連續3周。然后進行心臟采血，離心后取血清分析，并稱重卵巢與子宮，也相同方法對卵巢進行制片觀察。多有大鼠實驗前按照實驗動物3R原則進行關懷。

表1 來曲唑造模對大鼠血清激素水平的影響分析（）

表1 來曲唑造模對大鼠血清激素水平的影響分析（）

組別 LH(IU/L) FSH(IU/L) E2(pmol/L) P(nmol/L) T(nmol/L) LH/FSH實驗組 15.89±5.13 5.25±2.31 23.18±9.73 57.38±20.72 10.38±2.67 3.13±0.67對照組 8.31±3.76 3.92±1.89 25.07±8.31 97.32±21.38 2.03±1.82 2.07±0.54 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.05

表2 維生素D干預后大鼠血清激素水平影響分析（）

表2 維生素D干預后大鼠血清激素水平影響分析（）

項目 LH(IU/L) FSH(IU/L) E2(pmol/L) P(nmol/L) T(nmol/L) LH/FSH干預前 15.89±5.13 5.25±2.31 23.18±9.73 57.38±20.72 10.38±2.67 3.13±0.67干預后 10.72±4.16 3.98±2.11 24.12±9.18 73.14±19.26 4.36±2.27 2.23±0.59 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.05

1.3 觀察指標

主要觀察指標包括：促黃體生成素（LH），促卵泡生成素（FSH），雌二醇（E2），孕激素（P），睪酮（T），催乳素（PRL），體制指數（BMI），胰島素抵抗（HOMA-IR），空腹胰島素（FPG），總膽固醇（TC）。

1.4 統計學方法

將實驗所得數據錄入統計學分析軟件SPSS19.0進行統計學處理、分析。計量資料采用均數±標準差（）表示，運用t檢驗進行統計學分析，檢驗水準為α=0.05，P＞0.05為差異無統計學意義，P＜0.05為差異具有統計學意義，P＜0.01為差異具有顯著統計學意義。并采用SPSS19.0進行相關性分析。

2 結 果

2.1 卵巢切片觀察發現實驗組大鼠卵巢質量增加，鏡下見早期發育的卵泡，其囊狀擴張卵泡也明顯增加，但泡內卵母細胞消失，黃體也消失或隱見。對照組無明顯變化。

2.2 實驗組與對照組大鼠血清激素水平分析：實驗組大鼠經過來曲唑用藥后，與對照組比較，血清E2無差異（P＞0.05）；此外，兩組大鼠血清比較，實驗組LH升高、FSH升高、LH/FSH比值增大、P降低，兩組比較差異均有統計學意義（P＜0.05）；并且實驗組大鼠血清T顯著升高，與對照組比較差異具有顯著統計學意義（P＜0.01）。具體結果見表1。

2.3 實驗組大鼠維生素D干預后血清激素水平分析：實驗組POCS模型大鼠進行維生素D干預后血清激素水平分析結果顯示，干預后與干預前比較，大鼠血清LH、FSH、T以及LH/FSH均減低，差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；血清E2輕微升高，干預前后差異無統計學意義（P＞0.05）；血清P升高，干預前后差異有統計學意義（P＜0.05）。具體結果見表2。

2.4 血清25-（OH）D3水平與血清指標相關性分析 維生素D干預后血清相關指標相關性分析結果顯示，大鼠BMI、HOMA-IR、T以及FPG呈負相關關系（P＜0.05）；與E2呈正相關關系（P＜0.05）；此外，大鼠血清PRL、FSH、LH、TC與血清25-（OH）D3無相關性。

3 討 論

表3 血清25-（OH）D3水平與血清指標相關性分析

3.1 來曲唑建立PCOS大鼠模型的理論依據和評價

芳香化酶是雌激素形成的限速酶，存在于人體的各組織中，卵巢內該酶的活性下降或水平過低便可導致雄激素水平升高，從而可引發多囊卵巢綜合征[2]。Kafali等[3,4]以來曲唑誘導雌性大鼠建立PCOS 動物模型，取得滿意效果。本研究運用來曲唑誘導后發現，實驗組LH升高、FSH升高、P降低，實驗組大鼠血清T顯著升高，LH/FSH比值也增大。結果提示來曲唑誘導PCOS大鼠模型的建立有效。但是，單純雄激素造模使得大鼠卵巢無明顯白膜增厚，重量也只有一般的1/2，這就與人POCS有較大不同[5]。但本研究通過來曲唑誘導建立PCOS大鼠模型基本符合人體的特性，有研究基礎和價值。

3.2 維生素D對PCOS的干預

目前，對PCOS的確切發病機制尚不明確，但能肯定的是其發病與機體過量雄激素有關，而雌性個體雄激素過高是一系列內分泌功能紊亂造成的，目前認為主要與肥胖和糖尿病有關。本研究顯示，實驗組大鼠進行維生素D干預后，大鼠血清LH、FSH、T以及LH/FSH均減低，血清P升高。相關性分析發現，25-（OH）D3水平與大鼠BMI、HOMA-IR、T以及FPG呈負相關關系；與E2呈正相關關系。表明血清25-（OH）D3水平對PCOS有明顯相關性，對PCOS病情有治療性緩解作用。Panidis等[6]研究也顯示，調節維生素D有利減輕PCOS相關代謝和生殖問題。

總之，來曲唑誘導大鼠建立PCOS與人體情況基本符合，有較佳的實驗價值。研究結果顯示，體內25-（OH）D3水平能反應機體內分泌情況，PCOS大鼠體內25-（OH）D3水平較低，通過維生素D干預后，PCOS大鼠體內激素有較大改變，趨向對照組大鼠的激素水平。從而可以推測人體25-（OH）D3水平檢測可作為PCOS患者的檢測指標，并對人體進行維生素D干預可能具有治療作用。因目前缺乏較多的臨床治療病例和體會的報道，也缺乏較多的研究，故本研究只能提供一定的研究基礎，具體機制尚待進一步研究，臨床治療也需更多實驗和研究。

[1] 楊正望,周芳,談珍瑜,等.不同造模方法對大鼠多囊卵巢綜合征模型的影響[J].中國實驗動物學報,2010,18(1):13-17.

[2] Auvray P,Nativelle C,Bureau R,et al.Study of substrate specificity of human aromatase by site directed mutagenesis[J].Eur J Biochem, 2002,269(5):1393-1405.

[3] Kafali H,Iriadam M,Ozardl I,et al.Letrozole-Induced Polycystic Ovaries in the Rat: A New Model for Cystic Ovarian Disease[J]. Arch Med Res,2004,35(10):103.

[4] Li XD,Strauss L,Makela S,et al.Multiple Structural and Functionaol Abnormalities in the P450 A rom atase Expressing Transgenic Male Mice Are Ameliorated by a P450 A rom atase Inhibitor[J]. Am J Pathol,2004,164(12):1039.

[5] Archer JS,Chang IL.Hirsutism and acne in polycystic ovary syndrome[J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol,2004,18(5):737-754.

[6] Panidis D,Balaris C,Farmakiotis D,et al.Serum parathyroid hormone concentrations are increased in women with polycystic ovary syndrome[J].Clin Chem,2005,51(9):1691.

R711.75

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：1671-8194（2014）05-0056-03