慢性宮頸炎患者自然殺傷T T細胞與炎癥分度的關系

麥艷芬，吳葉歡，周瑞芳，麥雪鸝，游玉卿

臨床研究

慢性宮頸炎患者自然殺傷T T細胞與炎癥分度的關系

麥艷芬1，吳葉歡2，周瑞芳1，麥雪鸝1，游玉卿1

1佛山市第五人民醫院婦科，廣東佛山528211；2佛山市南海區婦幼保健院婦科，廣東佛山528200

目的研究自然殺傷T細胞（NKTs）在慢性宮頸炎（CCV）發病及治療轉歸的作用及其與炎癥分度的關系。方法入選70例CCV患者，采用流式細胞術檢測其外周血NKTs及其細胞因子γ干擾素（IFN-γ）及白介素10（IL-10）含量。將CCV患者隨機分為觀察組及對照組，后者給予常規治療，觀察組在對照組基礎上加用保婦康栓治療，比較治療前后NKTs及其細胞因子變化，并分析其與炎癥分度的相關性。結果與對照組比較，慢性宮頸炎患者NKTs及IFN-γ均顯著降低（P=0.016、0.019），而IL-6顯著高于對照組（P=0.001）。治療后兩組患者NKTs及IFN-γ較治療前明顯回升，而IL-6均較治療前明顯下降，兩組治療前后差異均有顯著性（P＜0.05）。治療后觀察組NKTs及IFN-γ顯著高于對照組，而IL-6顯著低于對照組（P＜0.05）。相關性分析顯示NKTs及IFN-γ與炎癥分度呈負相關性，而IL-6與炎癥分度呈正相關性相關性（P＜0.05）。結論NKTs及IFN-γ降低，而IL-10升高是CCV患者的一個重要免疫學特征，三者與炎癥分級呈明顯相關性，且可反映治療效果，因而具有重要臨床意義。

慢性宮頸炎；自然殺傷細胞；細胞因子；炎癥分度；相關性分析

作為最常見的婦科炎癥，慢性宮頸炎(CCV)包括宮頸陰道部炎癥及宮頸管黏膜炎癥，前者可有陰道炎癥引起，而后者是臨床最為常見的宮頸炎類型［1］。近年國內外宮頸炎發病率有增加趨勢，且由于宮頸管黏膜上皮為單層柱狀上皮，易演變為宮頸癌，因此CCV的治療尤為重要［2］。已有報道自然殺傷細胞（natural killer cell, NKC）與宮頸病變密切相關，且宮頸炎患者存在T細胞亞群的失調［3］。作為具有NKC及T細胞雙重功能的特殊T細胞［4］，自然殺傷T細胞（natural killer T cells, NKTs）是否也參與CCV的發病機制，與炎癥程度關系如何等，目前均未見相關報道。本文以上述背景為基礎探討NKTs與CCV炎癥分度及治療的關系，如下。

1 資料與方法

1.1 患者一般資料

以本院2012年1月~2014年1月期間收治的CCV患者作為研究對象，均行宮頸刮片或宮頸管吸片或病理學檢查確診。合并腫瘤、風濕免疫性疾病、服用免疫抑制劑者除外［5］。共入選70例，年齡21~68歲，平均44.26±23.19歲；其中宮頸Ⅰ度糜爛19例，Ⅱ度27例，Ⅲ度24例。入選同期到院查體的70例健康女性作為對照組，年齡19~67歲，平均43.18±24.03歲。兩組的年齡無統計學差異。

1.2 流式細胞術檢測

采集靜脈血約3 ml，運用免疫磁珠法分選外周血單個核細胞；以CD3、CD56分離出NKTs，使用膜穿透劑對NKTs胞內細胞因子IFN-γ及IL-6進行染色，隨后使用B＆D公司生產的多色流式細胞儀（型號FACSCalibur），檢測NKTs、IFN-γ及IL-6的水平，采用百分含量表示［6］。

1.3 治療方法

將以上70例CCV患者分為觀察組及對照組各35例，兩組的年齡、炎癥分度均無統計學差異。其中觀察組有13例及對照組有14例人乳頭瘤病毒(HPV)陽性，均給予重組人干擾素α-2a凝膠治療[7]。根據炎癥分度，對照組患者：I及Ⅱ度者采用紅核婦潔洗液10 ml藥液沖洗外陰和陰道，2次/d，連用7 d；同時口服中成藥。Ⅲ度患者給予微波治療治療［8］。觀察組患者在對照組的基礎上，加用保婦康栓治療（將栓劑塞入陰道深部，每晚1粒，療程7 d）［9］。治療2周后復查NKTs、IFN-γ及IL-6含量。

1.4 統計學處理

定量資料采用均數±標準差表示，采用t檢驗比較兩組間的差異，運用配對t檢驗比較治療前后的NKTs、IFN-γ及IL-6變化；NKTs、IFN-γ及IL-6與分度的關系采用Pearson法。使用統計軟件包SPSS 17.0分析數據，當P＜0.05認為是差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NKTs與細胞因子含量

與對照組比較，慢性宮頸炎患者NKTs及IFN-γ均顯著降低（P=0.016、0.019），而IL-6顯著高于對照組（P= 0.001，表1）。

2.2 治療后宮頸炎患者NKTs及細胞因子變化

治療前觀察組及對照組的NKTs、IFN-γ及IL-6均無統計學差異。治療后觀察組及對照組患者NKTs及IFN-γ較治療前明顯回升，而IL-6均較治療前明顯下降，兩組治療前后差異均有顯著性（*P＜0.05）。治療后觀察組NKTs及IFN-γ顯著高于對照組，而IL-6顯著低于對照組（#P＜0.05）。

表1 兩組NKTS及其細胞因子含量比較(n=70,％)

表2 宮頸炎患者治療前后NKTs及其細胞因子含量比較(n=35,％)

2.3 相關性分析

相關性分析顯示，NKTS及IFN-γ與炎癥分度呈負相關性，而IL-6與炎癥分度呈正相關性相關性(P＜0.05，表3)。

表3 NKTS及其細胞因子與宮頸炎分度的r及P值表

3 討論

近年國內外發現宮頸病變與免疫異常密切相關，因此探索宮頸炎與免疫細胞的關系，具有重要性及創新性。作為同時具備NKC及T細胞功能的NKT，可表達多種細胞因子從而發揮不同的免疫功能，其中IFN-γ及IL-6是NKTs分泌的重要炎性細胞因子［10］。作為Th1類細胞因子，IFN-γ可誘導細胞免疫，并發揮抗病毒作用；IL-6屬于Th2類細胞因子，是最為重要的促炎因子之一，可誘導體液免疫。目前有研究發現NKTs參與子宮內膜異位癥（EMT）的發病機制，且與EMT的分期呈明顯相關性［11］。然而，NKTs與CCV的關系如何？目前尚未見類似報道。盡管缺少直接相關的報道，但以下研究為搭建NKTs與CCV的關系提供了基礎：如黃瑞等［12］發現宮頸癌患者外周血NK細胞活性降低，其活化性受體NKG2D表達的下降是NK細胞活性下降的原因之一；黃宇琨等［13］發現宮頸癌患者NKC、TNF-α及INF-γ表達均明顯較少。宮頸癌化療患者NKC明顯降低，心理護理能使得T淋巴細胞亞群和NK細胞增多從而提高宮頸癌化療患者免疫力。為此，筆者推測NKTs可能參與CCV的發病機制［14-17］。

本研究發現，與對照組比較，慢性宮頸炎患者NKTs及IFN-γ均顯著降低，而IL-6顯著高于對照組，說明NKTs、IFN-γ及IL-6與健康人存在差異性表達，但憑此一點還不足以認定NKTs及其細胞因子參與CCV的發病，因此筆者進行了干預試驗：治療前觀察組及對照組的NKTs、IFN-γ及IL-6均無統計學差異，說明兩組具有均勻性及可比性；治療后觀察組及對照組患者NKTs 及IFN-γ較治療前明顯回升，而IL-6均較治療前明顯下降，且治療后觀察組NKTs及IFN-γ顯著高于對照組，而IL-6顯著低于對照組；相關性分析顯示，NKTs及IFN-γ與炎癥分度呈負相關性，而IL-6與炎癥分度呈正相關性相關性，亦即炎癥越重，NKTs及IFN-γ含量越低，而IL-6含量越高。上述結果充分印證了NKTs、IFN-γ及IL-6參與CCV的免疫學機制，其過程可能是NKTs分泌減少導致宮頸局部抗炎不足而增加CCV患者的宮頸糜爛程度；相反，未能控制的炎癥加重了NKTs及其所分泌的具有抗炎作用的IFN-γ的消耗，導致其含量降低；而炎癥物質的趨化及炎癥放大效應導致了IL-6的增加。

從治療反應看，加用保婦康栓的觀察組患者優于對照組，能更好的增加NKTs的活性，使IFN-γ分泌量增加，說明NKTs及IFN-γ是CCV患者的一個保護性因素；而治療后IL-6下降，進一步說明IL-6是CCV患者的一個負面因素。因此，筆者認為三者可反應CCV的療效。通過本研究筆者認為，NKTs及IFN-γ降低，而IL-10升高是CCV患者的一個重要免疫學特征，提示三者參與CCV的免疫學發病機制；三者與炎癥分級呈明顯相關性，且可反映治療效果，因而具有重要臨床意義。

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2014-04-27

麥艷芬，主治醫師，E-mail:fswymyf@126.com

吳葉歡，副主任醫師