非小細胞肺癌組織中VEGF、E-cad的表達變化及意義

郝 琴，陳美霓

(延安大學醫學院，陜西延安716000)

國際癌癥研究中心數據表明，2008年肺癌占全世界惡性腫瘤病死率第一位，占總病死率12.7%［1］。肺癌有發現晚、轉移早、病死率高等特點，即使接受標準化的治療，目前進展性的非小細胞肺癌(NSCLC)患者中位生存時間約10個月［2］。癌細胞的生長、轉移依賴新生血管的形成，血管內皮生長因子(VEGF)是最有效的促血管生長因子。而目前認為，E-鈣黏附素(E-cad)與腫瘤侵潤性生長和腫瘤細胞的轉移關系最為密切。2014年3～5月，我們采用免疫組化法檢測52例份NSCLC組織及11例份良性病變肺組織中VEGF、E-cad，觀察其表達變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年1月～2013年9月延安大學附屬醫院病理科存檔的NSCLC病理組織標本52例份(觀察組)，患者男36例，女16例;所有患者均經病理證實，且未行放化療。肺癌診斷標準參照1999年WHO/IASLC肺和胸膜組織學分類標準［3］。其中鱗癌31例，腺癌18例，其他類型癌3例;有淋巴結轉移者37例，無淋巴結轉移者15例;TNM分期Ⅰ+Ⅱ期17例，Ⅲ+Ⅳ期35例;分化程度為高6例，中25例，低21例。另選良性病變肺組織標本11例份作為對照組，其中炎性病變5例，肺結核6例。兩組一般資料無統計學差異，具有可比性。

1.2 主要試劑 兔抗人多克隆抗體VEGF、鼠抗人多克隆抗體E-cad及S-P試劑盒購自北京中衫金橋生物技術有限公司，DAB底物顯色劑購自武漢博士德生物技術有限公司。

1.3 VEGF和E-cad的檢測 采用免疫組化SP法，抗原修復采用枸櫞酸鈉緩沖液高壓熱修復，其他步驟嚴格按照試劑盒說明進行。兔抗人VEGF抗體、鼠抗人E-cad抗體工作濃度均為1∶100，以PBS代替一抗作為陰性對照。結果判定標準:參照文獻［4］。VEGF:胞質內呈棕黃色顆粒為陽性細胞;E-cad:包膜中見到棕黃色顆粒分布為陽性，以病理科VEGF和E-cad陽性的胃癌切片作為陽性對照。在400倍鏡下隨機取5個視野，每個視野隨機計數100個腫瘤細胞，將其染色陽性的細胞相加再除以5，即得該例腫瘤細胞的陽性率(%)，陽性細胞數≥10%定為陽性，陽性細胞數＜10%定為陰性。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。兩組間比較應用χ2檢驗，采用Spearman等級相關分析法分析VEGF與E-cad間及與NSCLC臨床病理參數的相關性。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組VEGF、E-cad表達比較 觀察組、對照組VEGF 陽性率分別為 71.15%(37/52)、18.18%(2/11)，兩組比較，P ＜0.01;E-cad 陽性率分別為57.69%(30/52)、90.91%(10/11)，兩組比較，P ＜0.05。

2.2 VEGF、E-cad陽性表達與NSCLC臨床病理參數的關系 結果見表1。由表1可知，VEGF、E-cad表達與NSCLC淋巴結轉移、TNM分期、分化程度有關(P均＜0.05)，與其余病理參數無關(P均＞0.05)。

表1 VEGF、E-cad陽性表達與NSCLC臨床病理參數的關系

2.3 觀察組VEGF和E-cad表達的關系 觀察組VEGF表達與E-cad表達呈負相關(r=－0.373，P＜0.01)。

3 討論

世界范圍內，肺癌已成為發病率和病死率增長速度最快的惡性腫瘤，對人類的健康和生命造成巨大威脅。據中國腫瘤登記中心數據統計，我國2008年肺癌發病率為52.1萬，死亡人數約45.2萬，病死率居惡性腫瘤第一位，近年來有明顯快速增長趨勢［5］。

VEGF是內皮細胞特異性有絲分裂原，通過與其內皮細胞膜上的受體結合而發揮作用，產生多種功能:①促進生成新的血管。通過與血管內皮細胞的特異性受體結合，促進動、靜脈以及淋巴管來源的內皮細胞生長［6］。②增加血管通透性。小囊液泡器(VVO)是位于微靜脈和小靜脈內皮細胞質里的一種類似與葡糖串樣的細胞器，它與內皮細胞的腔面和腔外面相連，可占細胞質的20%。VVO之間、VVO與細胞之間相互作用形成一些有利于大分子物質通過的小窗，VEGF通過對VVO“窗口”的調節增加血管通透性，促使大分子物質通過VVO滲出血管外［7］。Brock等［8］報道，VEGF是已知的最強的血管滲透劑，高于組胺50 000倍。③通過干擾樹突細胞的成熟而影響腫瘤免疫，從而使腫瘤細胞逃避免疫監視［9］。④在肺癌中，VEGF還可以誘發惡性胸水［10］。VEGF與受體結合后，通過一系列信號傳導機制導致血管內皮細胞分裂增殖，同時增加血管通透性，使血漿蛋白外滲，為胸腔積液形成提供了合適的微環境［11］。除此以外，VEGF與受體結合后，可引起內皮細胞的一系列變化，包括Ca2+的內流、IP3的增加、Von Willebrand因子的釋放以及胎兒血管內皮金屬蛋白酶、凝血酶的產生。而Ca2+和IP3又可以作為細胞內信號傳導的第二信使，傳導細胞內信號，刺激內皮細胞增殖，最終完成 VEGF 的生物學效應［12］。研究［13～18］表明，人類很多腫瘤中均有VEGF的高表達，如腦腫瘤、乳腺癌、結腸癌、卵巢癌、骨肉瘤等，而且表達程度與腫瘤的惡性程度呈正相關。本研究發現，觀察組VEGF陽性率高于對照組，且VEGF陽性表達與NSCLC淋巴結轉移、TNM分期、分化程度有相關性，提示VEGF參與了NSCLC的發生、發展與轉移，可作為NSCLC的一項生物學行為的評估指標。

目前認為，E-cad與腫瘤侵潤性生長和腫瘤細胞的轉移關系最為密切，其主要有以下作用:①通過Wnt途徑、receptor tyrosine kinases及 Rho GTPase信號轉導途徑調節細胞增殖。②影響細胞的分化，參與器官形成過程。③維持正常上皮細胞形態和結構的完整性。④參與了胰腺的β細胞生存能力的維持，減弱人胰腺β細胞的凋亡。⑤與血管新生密切相關［19］。本研究發現，觀察組E-cad陽性率低于對照組，且 E-cad陽性表達與 NSCLC淋巴結轉移、TNM分期、分化程度有相關性，提示E-cad參與了NSCLC的發生、發展及轉移，E-cad的缺失或下降，可能導致腫瘤細胞的侵潤與轉移，其可作為癌癥的一項重要檢測指標。

VEGF就是通過直接或間接途徑來影響血管的形成。實驗證明，E-cad是VEGF信路徑一個組成部分，其定位于內皮細胞間連接處，參與調節血管屏障功能，重組新生血管中的血管內皮細胞，參與VEGF誘導的血管新生過程［20］。其可能的途徑是E-cad蛋白可形成鈣黏素—連環蛋白復合物體使其磷酸化或去磷酸化，通過非胞外信號(p42和p44 ERKs)促進VEGF與其受體VEGF-2的結合，刺激血管形成。本研究顯示，觀察組VEGF與E-cad表達呈負相關，提示VEGF的高表達及E-cad的表達下降或缺失可能共同促使了NSCLC的發生、發展與浸潤轉移。

總之，VEGF、E-cad與NSCLC的增殖、侵襲的調控密切相關。對VEGF與E-cad的聯合檢測，可能成為判斷NSCLC惡性程度和預后的重要指標，同時為抗VEGF及其受體的藥物應用于肺癌的治療提供新的思路。

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