KT和NAA對知母試管苗生長發育的影響

尹明華

摘要：探討了激動素（KT）和萘乙酸（NAA）對知母（Anemarrhena asphodeloides）分蘗生長發育和生理生化指標的影響。結果表明，知母分蘗生長發育的最佳培養基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L，此培養基條件下，知母分蘗的總葉綠素含量、可溶性總糖含量和可溶性蛋白質含量最高；而低濃度的KT與高濃度的NAA組合下知母試管苗總葉綠素含量、可溶性總糖含量和可溶性蛋白質含量較低。

關鍵詞：知母（Anemarrhena asphodeloides）；激動素（KT）；萘乙酸（NAA）；分蘗生長發育；生理生化指標

中圖分類號：S567.23 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）03-0607-02

知母（Anemarrhena asphodeloides）為百合科（Liliaceae）知母屬（Anemarrhena Bunge）多年生宿根植物，其根、莖為常用中藥材，藥用歷史悠久，始載于《神農本草經》，列為中品，味苦、寒，具有清熱瀉火、潤腸滑燥、止渴除煩等功效[1]。在中國主要分布于河北、山西、內蒙古、遼寧、黑龍江、吉林等省（區）[2]。知母皂苷元為知母的主要活性成分，已有研究表明，知母皂苷具有提高多種擬癡呆動物的學習記憶功能和對抗β-淀粉樣蛋白引起的神經細胞凋亡的作用[3]。

目前國內外主要對知母的化學成分[4]、提取工藝[5]、藥理作用[6]、臨床應用[7]和栽培管理[8]等方面進行了研究，而關于知母組織培養的研究較少[9，10]。試驗探討了NAA（萘乙酸）和KT（激動素）對知母分蘗生長發育和生理生化指標的影響，旨在為知母組培快繁和種質保存提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料知母分蘗由上饒師范學院生命科學學院植物組織培養室提供。

1.2 方法

選取相同條件下生長良好的知母分蘗，切除根，留莖1.5 cm，每瓶接種5個知母分蘗，培養基如下：①MS（CK）；②MS+KT 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L；③MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L；④MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L；⑤MS+KT 4 mg/L+NAA 0.5 mg/L。培養基中均加入30 g/L蔗糖和0.5 g/L瓊脂，調pH為5.8～6.0。培養條件為：光照時間14 h/d；光照度1 000～2 000 lx；溫度（25±1） ℃；相對濕度70%～80%。在60 d內統計知母分蘗生長發育情況。60 d后測定5組試管苗的生理生化指標，總葉綠素（葉綠素a和葉綠素b）含量的測定采用丙酮比色法[11]，可溶性蛋白質含量的測定采用考馬斯亮藍G-250染色法[12]，可溶性總糖含量的測定采用蒽酮比色法[12]。試驗設3次重復，數據用SPSS 19.0軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 KT和NAA對知母分蘗生長發育的影響

從表1可知，沒有添加激素的對照組，不僅芽少芽短，而且根少根短。添加激素后，總體上可以促進知母分蘗的生長發育。當KT濃度為2 mg/L時，隨著NAA濃度的升高，新生芽數極顯著增加，但新生芽長、新生根數和新生根長無顯著變化。當KT濃度為4 mg/L時，隨著NAA濃度的升高，新生芽數和新生芽長極顯著下降，而新生根數和新生根長無顯著變化。當NAA濃度為0.1 mg/L時，隨著KT濃度的升高，新生根數無顯著變化，但新生芽數、新生芽長和新生根長極顯著增加。當NAA濃度為0.5 mg/L時，隨著KT濃度的升高，新生芽數和新生根數無顯著變化，但新生根長極顯著增加，而新生芽長極顯著下降。因此，知母分蘗生長發育的最佳培養基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

2.2 KT和NAA對知母試管苗生理生化指標的影響

從表2可知，沒有添加激素的對照組，總葉綠素含量、可溶性蛋白質含量和可溶性總糖含量均較低。添加激素后，總體上可以促進總葉綠素含量、可溶性蛋白質含量和可溶性總糖含量的增加。當KT濃度為2 mg/L時，隨著NAA濃度的升高，總葉綠素含量、可溶性蛋白質含量和可溶性總糖含量極顯著增加。當KT濃度為4 mg/L時，隨著NAA濃度的升高，總葉綠素含量和可溶性蛋白質含量極顯著下降，而可溶性總糖含量無顯著變化。當NAA濃度為0.1 mg/L時，隨著KT濃度的升高，總葉綠素含量、可溶性蛋白質含量和可溶性總糖含量極顯著增加。當NAA濃度為0.5 mg/L時，隨著KT濃度的升高，總葉綠素含量和可溶性蛋白質含量無顯著變化，但可溶性總糖含量極顯著增加。因此，從生理生化指標的變化來看，知母分蘗生長發育的最佳培養基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

3 小結

植物材料的器官再生途徑一般是由細胞分裂與生長素的比例來控制的[5]。KT和NAA是兩種常用的植物生長調節劑，分別屬于細胞分裂素類和生長素類，它們在生產上尤其在組織培養中應用較廣，KT和NAA在培養基中的含量及其比例不同都可以影響培養材料的生長[13]。試驗結果表明，知母分蘗生長發育的最佳培養基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L，在此培養基下，知母分蘗的新生芽數、新生芽長、新生根數和新生根長總體上明顯增加。生理生化指標測定結果也表明，此種培養基有利于知母試管苗的總葉綠素含量、可溶性蛋白質含量以及可溶性總糖含量的提高。劉小鳳等[14]研究了不同濃度的NAA和KT對馬鈴薯組培苗鮮重、根重、須根數和腋芽數的影響，發現最佳的濃度組合為NAA 0.05～0.08 mL/L、KT 0.4～0.6 mL/L。祝紅藝等[13]也研究了培養基中KT與NAA含量對馬鈴薯組培苗生長的影響，發現當KT為0.4 mg/L、NAA為0.04 mg/L時，組培苗鮮重、根重、根數、腋芽發生數及腋芽發生百分比顯著增加。徐恒戩[15]對KT和NAA對黑籽南瓜器官離體再生的影響研究發現，最佳的再生培養基為MS+KT 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L，此培養基下可獲得較高的不定芽誘導率，與本研究結果基本一致。

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