NF-κB p65在非霍奇金淋巴瘤中的表達及臨床意義

肖建波，李海麗，王軼楠，王學靜，張順禮

論著·臨床

NF-κB p65在非霍奇金淋巴瘤中的表達及臨床意義

肖建波，李海麗，王軼楠，王學靜，張順禮

目的探討非霍奇金淋巴瘤患者血清和組織 NF-κB p65的表達是否一致，其表達與非霍奇金淋巴瘤臨床特征的關系。方法免疫組化法檢測58例非霍奇金淋巴瘤患者組織NF-κB p65的表達，ELISA 法檢測患者血清NF-κB p65水平。分析血清與組織 NF-κB p65 表達及與臨床特征的關系。結果58例非霍奇金淋巴瘤患者血清、組織的 NF-κB p65表達率分別為51.7%、55.2%，表達一致率為75.8%。血清及組織NF-κB p65 的陽性表達與非霍奇金淋巴瘤患者的臨床分期及國際預后指數(IPI)評分有關(P<0.05)，而在不同性別、年齡及T、B細胞亞型之間陽性表達差異無統計學意義(P﹥0.05)。結論非霍奇金淋巴瘤患者血清NF-κB p65表達升高，可能部分反映淋巴瘤組織NF-κB p65的表達水平，同時與非霍奇金淋巴瘤的臨床分期及IPI相關。

非霍奇金淋巴瘤；核轉錄因子NF-κB；國際預后指數

核轉錄因子-κB(NF-κB)是廣泛存在于真核生物細胞內的一種可誘導的轉錄因子家族蛋白，1986年作為B細胞轉錄因子首先被發現，與免疫球蛋白κ輕鏈基因增強子結合，促進其表達，在淋巴瘤的發生、發展過程中起著重要作用[1，2]。目前文獻報道NF-κB p65在淋巴瘤組織中高表達，且與預后相關，但NF-κB p65血清蛋白表達是否與組織表達一致，其與臨床特征有何關系，結果尚不清楚。現用ELISA 法和免疫組化方法檢測NF-κB p65在非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者血清及組織中的表達情況，探討兩者在淋巴瘤中表達是否一致及與臨床特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2011年12月—2013年2月我院收治NHL患者58例(病理診斷明確，未做過放化療)，取患者淋巴結組織蠟塊，全部重新復查均經HE及免疫組織化學方法確診。58例患者中，男27例，女31例；年齡15～74歲，中位年齡45.5歲；其中B細胞NHL 34例(彌漫大B細胞淋巴瘤24例、伯基特淋巴瘤2例、黏膜相關淋巴瘤4例、濾泡淋巴瘤4例)，T細胞NHL 24例(T淋巴母細胞淋巴瘤2例、NK/T細胞淋巴瘤5例、非特殊型外周T細胞淋巴瘤12例、間變大細胞淋巴瘤3例、血管免疫母細胞淋巴瘤2例)；臨床分期I～II期27例，III～IV期31例。國際預后指數(IPI)評分：低危組(0～1分)25例，高危組(≥2分)33例；首程治療前采集患者血清，另收集同期40例正常人血清作為健康對照組，血清經標本經分裝后，保存于-80℃冰箱。

1.2 血清NF-κB p65的ELISA檢測及陽性結果判定 NF-κB p65 ELISA試劑盒購自美國RD公司，按試劑盒說明進行操作。濃度< 40ng/ml為陰性，≥40ng/ml為陽性。

1.3 免疫組化方法及陽性結果判定 患者淋巴結組織蠟塊標本經10%中性福爾馬林溶液固定，常規脫水，石蠟包埋，4μm 厚切片，切片常規脫蠟水化；0.3% H2O2阻斷內源性過氧化物酶，10%小牛血清封閉切片，滴加一抗，4℃過夜。PBS洗后滴加廣譜生物素化二抗(1∶200)，SP復合物(1∶200)，DAB顯色，蘇木精復染胞核，脫水，透明，封片。NF-κB p65陽性為棕黃色細小顆粒，均位于胞核，在高倍鏡下(×400)對每個病變組織隨機選10個視野進行陽性細胞計數，根據染色強度及范圍進行判斷，陽性細胞數<25%為陰性，≥25%為陽性。以乳腺癌組織NF-κB p65陽性片為陽性對照，所有病理標本切片用PBS液代替一抗作陰性對照。免疫組織化學檢測采用SP法，SP試劑盒購于美國RD公司。

2 結 果

2.1 NF-κB p65在血清中的表達 NHL組患者外周血NF-κB p65的表達明顯高于健康對照組[(48.2±17.0)ng/ml vs.(22.7±8.3)ng/ml]，差異有統計學意義(P<0.05)。58例NHL患者血清NF-κB p65陽性表達率為51.7%(30/58)。

2.2 NF-κB p65在淋巴瘤組織中的表達 淋巴瘤組織細胞核中有NF-κB p65表達，內可見棕黃色顆粒。表達陽性率為55.2%(32/58)。

2.3 血清與組織NF-κB p65表達的關系 NHL患者中血清與組織同為陰性20例，同為陽性 24例，采用Kappa 一致性檢驗，Kappa值=0.516(P﹤0.05) ，可以認為具有一致性。采用Spearman秩相關系數，rs=0.517，P﹤0. 05，表達一致率為75.8%。見表1。

表1 NHL患者血清及組織NF-κB p65表達情況

2.4 NF-κB p65表達與臨床特征的關系 58例淋巴瘤患者中，血清及組織NF-κB p65表達情況與臨床特征關系，見表2。血清及組織NF-κB p65表達陽性與臨床分期及國際預后指數(IPI)有相關性(P<0.05)，與其他臨床特征無相關性(P>0.05)。見表3。

表3 血清、組織NF-κB p65和臨床特征因素相關分析

3 討 論

目前研究表明，NF-κB能抑制凋亡與腫瘤發生密切相關[3]。許多血液和實體腫瘤中都有NF-κB的異常激活。異常激活的NF-κB在腫瘤增生、凋亡、血管生成、侵襲和轉移起著重要作用[4]。目前在多種類型的NHL中(例如ABC-DLBCL、MALT淋巴瘤和成人T細胞淋巴瘤等)均已被證實存在NF-κB信號通路的異?；罨痆5～7]。

NF-κB通路的異常激活可以上調一系列抗凋亡基因的表達(Bcl-2、TRAFs和IAPs等)，是誘導細胞持續惡性增殖及癌癥發生的重要原因。它的表達與部分淋巴瘤的臨床特征及預后相關。近年研究發現，NF-κB的表達與淋巴母細胞淋巴瘤的臨床分期相關，在彌漫大B細胞淋巴瘤中與IPI同時作為獨立不良預后因素[8]，在胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤中表達提示預后不良[9]。本研究分析非霍奇金淋巴瘤患者血清及組織NF-κB p65表達與臨床特征關系時發現，NF-κB表達與臨床分期及IPI有相關性，與文獻報道相符[10]。臨床分期及IPI可大致反映非霍奇金淋巴瘤的預后，NF-κB p65表達與其相關，因此NF-κB p65檢測有可能成為非霍奇金淋巴瘤的預后指標之一，但尚需大樣本及生存分析統計，需要進一步病理亞型分析。

表2 NHL患者血清及組織NF-κB p65表達與臨床特征的關系

由于外周血循環中存在腫瘤細胞及相關產物，同時取材容易、創傷小，操作簡便，容易動態檢測，成為目前研究熱點。本組通過檢測血清NF-κB表達情況，發現NHL患者血清NF-κB p65 表達明顯高于健康對照組，提示NF-κB陽性表達與非霍奇金淋巴瘤發生有關。血清NF-κB p65表達與臨床分期及IPI相關，考慮可能與多數晚期及高IPI評分患者，腫瘤負荷相對較大，組織及外周血中循環的腫瘤細胞較多，異常的NF-κB活化促進腫瘤的生長有關。同時，NHL患者血清及組織NF-κB p65表達具有一致性，提示血清NF-κB p65可能部分反映組織NF-κB p65的表達情況，一般情況下Kappa值>0.7才表明吻合度好，本組Kappa值為0.516，需要大樣本進一步證實和優化、標化檢驗方法，因此目前外周血檢測尚不能完全替代組織檢測，但為探尋一個簡易的指標提供了一定依據。

1 Vonach C，Viola K，Giessrigl B，et al．NF-κB mediates the 12(S)-HETE-inducedendothelial to mesenchymal transition of lymphen dothelial cells during the intravasation of breast carcinoma cells[J]． Br J Cancer，2011，105(2)：263-271.

2 Liu M，Sakamaki T，Casimiro MC，et al． The canonical NF-kappaB pathway governs mammary tumorigenesis in transgenic mice andtumor stem cell expansion [J]．Cancer Res，2010，70(24):10464-10473.

3 Loercher A, Lee TL, Ricker TL, et al. Nuclear factor- kappa B is animportant modulator of the alteredgene expression profile andmalignant phenotype in squamous cell carcinoma [J] . Cancer Res, 2004, 64(18) : 6511- 6523.

4 Bentires-Alj M, Barbu R, Fillet M, et al. NF- kappaB transcription factor induces drug resist ance through MDR1expression in cancer cells[J] .Oncogene, 2003, 22(1) : 90- 97.

5 昌紅, 高穎, 張建英, 等. 存活蛋白和NF-κB 在外周T 細胞性淋巴瘤中的表達和意義[J]. 中華實驗血液學雜志, 2008, 16(5) : 1079 -1081.

6 李丹,遲心左,周昌菊.胎膜早破孕婦血中NF-κB P65、IL-8、MMP-9的表達及意義[J].疑難病雜志,2012,11(10): 751-754.

7 薛令軍,李培梅,湯祎,等.β-連環素和P65在喉癌侵襲轉移過程中的關系研究[J].中國當代醫藥,2013,20(6) :4-5,8.

8 Bavi P,Uddin S,Bu R, et al. The biological andclinical impact of inhibition of NF-κB-initiatedapoptosis in diffuse large B cell lymphoma(DLBCL) [J]．J Pathol，2011，224(3):355-366.

9 吳秀玲，韓少良，萬麗，等.胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤中BCL-10和NF-κB的表達與預后的關系[J] .中華普通外科雜志，2007,22(3):172-175.

10 趙兵，楊順娥 非霍奇金淋巴瘤中C-myc與NF-κB的表達[J] .腫瘤防治研究，2010,37(9) : 1091-1093.

TheexpressionandclinicalsignificanceofNF-κBp65innon-Hodgkin'slymphoma

XIAOJianbo,LIHaili,WANGYinan,WANGXuejing,ZHANGShunli.

ThirdDepartmentofRadiochemicalTherapy,TangshanCityPeople'sHospital，Tangshan063000,China

ObjectiveTo investigate whether the non-Hodgkin's lymphoma patients andorganizations NF-κB p65 expression are consistent with the expression of non-Hodgkin's lymphoma clinical features.MethodsImmunohistochemistry is appliedto detect 58 cases of non-Hodgkin's lymphoma patient organizations NF-κB p65 expression, ELISA assay of serum NF-κB p65 levels. Analysis of serum andtissue NF-κB p65 expression andclinical features.ResultsIn 58 patients serum, the tissue NF-κB p65 expression rates were 51.7%, 55.2%, 75.8% concordance rate expression. Serum andtissue NF-κB p65 positive expression in patients with non-Hodgkin's lymphoma clinical stage andIPI score (P<0.05), but between different gender, age andT, B cell subtype expression the difference was not statistically significant (P>0.05).ConclusionPatients with non-Hodgkin's lymphoma increasedexpression of NF-κB p65, may partly reflect lymphoma NF-κB p65 expression levels, but also associatedwith non-Hodgkin's lymphoma clinical stage andIPI.

Non-Hodgkin's lymphoma; Nuclear transcription factor-κB; International prognostic index

063000 唐山市人民醫院放化三科

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.01.020

2013-09-05)