廣藿香油對家兔內毒素性發熱的作用*

周彥希， 彭 成， 萬 峰， 曹小玉， 肖麗萍， 劉建林， 賀 抒， 杜巧輝， 龔小紅

(1成都中醫藥大學， 2中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，中藥材標準化教育部重點實驗室，四川 成都 610075)

廣藿香油(patchoulioil)為唇形科植物廣藿香Pogostemoncablin(Blanco)Benth. 的干燥地上部分經水蒸氣蒸餾提取的揮發油[1]，是廣藿香的主要藥用成分。該成分具有抗細菌[2]、刺激胃腸分泌[3]、抗真菌、抗病毒、抗瘧原蟲、保護腸屏障功能、調節胃腸運動功能、免疫調節、抗炎、鎮痛、抗氧化、止咳化痰、鎮吐等[4]廣泛藥理作用，但有關其解熱作用尚未見報道。本教研室前期實驗研究發現廣藿香油具有廣譜抗菌活性，并具有極強的抗菌效力。基于此，本實驗復制大腸桿菌內毒素致家兔發熱模型，觀察廣藿香油對家兔體溫的影響，并測定家兔血清中內生致熱原白細胞介素1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子α (TNF-α)含量及下丘腦中的中樞發熱介質環磷酸腺苷(cAMP)和前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)含量，旨在探討廣藿香油對內毒素性發熱家兔的解熱作用及其解熱機制。

材 料 和 方 法

1 材料、動物和實驗分組

廣藿香，購自湛江雷州市，經成都中醫藥大學中藥鑒定教研室李敏老師鑒定，為唇形科植物廣藿香Pogostemoncablin(Blanco)Benth.的干燥地上部分，炮制后采用水蒸氣蒸餾法提取廣藿香油，使用時用0.5% 吐溫80配成廣藿香油乳。脂多糖(lipopolysaccharide, LPS; Sigma)；注射用賴氨匹林(lysine acetylsalicylate for injection, LAI;揚州一洋制藥有限公司)；雙黃連注射液(Shuanghuanglian injection,SI;河南福森藥業有限公司)；Rabbit cAMP ELISA Kit、Rabbit TNF-α ELISA Kit、Rabbit IL-1β ELISA Kit和Rabbit PGE2ELISA Kit購自R&D。

電子天平(上海天平儀器廠，JA-2603)；OMRON電子體溫計(歐姆龍有限公司，MC-347)；離心機(Thermo Scientific, Legend Micro 17R)；酶標儀(Thermo Scientific, Varioskon Flash)；電熱恒溫鼓風干燥箱(上海躍進醫療器械有限公司，101-3-BS-Ⅱ)；超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，KQ5200E型)。

雄性普通級家兔，體重(2.0±0.5)kg，由成都中醫藥大學實驗動物研究中心提供，許可證編號為SCXK(川)2008-11。將家兔于實驗室飼養3 d，使其適應環境。分別在實驗前2 d及實驗當天晨測家兔肛溫，選擇3次肛溫值在38.5～39.5 ℃之間，波動不超過0.5 ℃者用于實驗。取實驗當天晨測肛溫為基礎體溫。根據實驗當天體重及基礎體溫值均分為7組，分別為空白對照組、模型對照組、西藥陽性組、中藥陽性組及廣藿香油高、中、低(2%、1%、0.5%)3個劑量組，每組6只。

2 方法

2.1復制LPS致家兔發熱模型 用無熱原的生理鹽水將精制的LPS稀釋成2 mg/L，除空白對照組外，其余各組均按1 mL/kg經家兔左耳的耳緣靜脈注射LPS。空白對照組按1 mL/kg耳緣靜脈注射無熱原生理鹽水。

2.2給藥LPS注射0.5h后，按以下方式順次經家兔右耳的耳緣靜脈注射給藥：空白對照組：0.5% 吐溫80 1mL/kg；模型對照組：0.5% 吐溫80 1mL/kg；西藥陽性組：LAI1mL/kg；中藥陽性組：SI每只0.5～1mL；廣藿香油高、中、低劑量組：廣藿香油乳高、中、低(2%、1%和0.5%)1mL/kg。

2.3體溫測定 分別測定給藥后0.5 h、1 h、1.5 h、2.5 h、3.5 h、4.5 h和5.5 h(相當于造模后1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、5 h和6 h)家兔的肛溫，比較不同時點肛溫與基礎肛溫之差值(ΔT)為體溫變化的指標。

2.4樣品采集與檢測 造模后3h耳緣靜脈取血3mL，靜止1～2h，離心(1 400×g, 15min)，取上清液，按試劑盒說明書測定IL-1β和TNF-α含量。于末次測量體溫后，立即斷頭處死家兔，取出全腦，在冰浴下于視交叉與灰結節之間取出下丘腦，縱向切成2等份，取1份稱重，放入盛有0.5mL生理鹽水的勻漿器中粉碎勻漿。將懸浮液倒入10mL試管內(冰浴)，用0.3mL生理鹽水洗勻漿器并倒入懸浮液中，混勻靜置5min，離心(1 400×g, 15min)，收集上清液，按試劑盒說明書測定cAMP和PGE2的含量。

3 統計學處理

數據用均數±標準差(mean±SD)表示，利用SPSS 17.0軟件處理，采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 廣藿香油對內毒素性發熱家兔體溫的影響

實驗過程中，空白對照組家兔體溫在正常范圍內波動，模型對照組造模后各時點體溫升高明顯，與空白對照組比較有顯著差異(P<0.01)。陽性組及給藥組造模后各時點體溫均升高，但升高度數均低于各時點模型對照組的體溫升高度數。西藥陽性組給藥后0.5 h有明顯的解熱作用，與模型對照組比較有顯著差異(P<0.05)，其余各時點與模型對照組比較無顯著差異。中藥陽性組給藥后1 h和2.5 h無明顯的解熱作用，其余各時點均有明顯的解熱作用，與模型對照組比較有顯著差異(P<0.05)。廣藿香油高劑量組從給藥后1.5 h開始有明顯的解熱作用，一直持續到給藥后5.5 h，與模型對照組比較有顯著差異(P<0.05)。廣藿香油中劑量組給藥后3.5 h開始有明顯的解熱作用，一直持續到給藥后5.5 h，與模型對照組比較有顯著差異(P<0.05)。這表明廣藿香油對內毒素所致發熱模型家兔有顯著解熱作用，見表1。

表1 廣藿香油對內毒素性發熱家兔體溫的影響

LAI: lysine acetylsalicylate for injection; SI: shuanghuanglian injection.△△P<0.01vscontrol group;*P<0.05vsmodel group.

2 廣藿香油對內毒素性發熱家兔血清中IL-1β和TNF-α含量的影響

模型對照組家兔血清中IL-1β和TNF-α含量均明顯高于空白對照組，與空白對照組比較均有顯著差異(P<0.05)。西藥陽性組和中藥陽性組家兔血清中IL-1β和TNF-α含量均明顯低于模型對照組(P<0.01或P<0.05)。廣藿香油各劑量組家兔血清中IL-1β含量與模型對照組比較無顯著差異，但均有降低IL-1β含量的趨勢。廣藿香油中劑量組家兔血清中TNF-α含量明顯低于模型對照組(P<0.05)。這表明廣藿香油可明顯抑制內毒素致發熱家兔血清中TNF-α含量的產生，見表2。

表2廣藿香油對內毒素性發熱家兔血清中IL-1β和TNF-α對含量的影響

Table 2. The effect of IL-1β and TNF-α contents in the serum of rabbits with LPS-induced fever(Mean±SD.n=6)

GroupIL-1β(pg/L)TNF-α(ng/L)Control422.64±146.44130.93±8.88Model831.83±31.39△152.24±10.71△LAI442.56±27.70??126.40±7.17?SI365.88±66.12??130.80±12.93?High 738.38±145.60144.84±16.10Middle807.74±78.25132.98±18.32?Low808.01±69.76144.62±16.66

△P<0.05vscontrol group;*P<0.05,**P<0.01vsmodel group.

3 廣藿香油對內毒素性發熱家兔下丘腦中cAMP和PGE2含量的影響

模型對照組家兔下丘腦中cAMP和PGE2含量均明顯高于空白對照組，與空白對照組比較均有顯著差異(P<0.05)。西藥陽性組和中藥陽性組家兔下丘腦中cAMP含量均明顯低于模型對照組，與之比較均有顯著差異(P<0.05)。西藥陽性組和中藥陽性組家兔下丘腦中PGE2含量與模型對照組比較均無顯著差異。廣藿香油各劑量組家兔下丘腦中cAMP含量明顯低于模型對照組，與之比較有顯著差異(P<0.05)。廣藿香油各劑量組家兔PGE2含量與模型對照組比較均無顯著差異，但均有降低PGE2含量的趨勢。這表明廣藿香油可明顯抑制內毒素致發熱家兔下丘腦中cAMP含量的產生，見表3。

表3廣藿香油對內毒素性發熱家兔下丘腦中cAMP和PGE2含量的影響

Table 3. The cAMP and PGE2contents in the hypothalamus of rabbits with LPS-induced fever (Mean±SD.n=6)

GroupcAMP (nmol/L)PGE2 (ng/L)Control18.48±1.9683.82±15.28Model21.65±1.36△114.66±10.12△LAI17.96±1.42?93.11±15.53SI17.13±1.53?97.02±4.79High17.30±0.77?98.10±12.47Middle18.66±4.34?110.51±31.88Low17.49±1.10?87.64±18.90

△P<0.05vscontrol group;*P<0.05vsmodel group.

討 論

內毒素是外源性致熱原，通過激活體內的單核巨噬細胞產生并釋放內生致熱原引起發熱反應[5]。本實驗觀察到家兔耳緣靜脈注射內毒素后，體溫明顯升高，而廣藿香油有明顯的解熱作用，可明顯抑制內毒素導致的體溫升高。與西藥賴氨匹林和中藥雙黃連注射液比較，西藥賴氨匹林主要特點是降體溫快，但持續時間短；中藥雙黃連注射液主要特點是間歇性降體溫，但作用不穩定；而廣藿香油降體溫的作用效果穩定、持久、無反復。

內生致熱原是多種致熱性細胞因子，包括IL-1、IL-6、干擾素、TNF、巨噬細胞炎癥蛋白-1等[6]。IL-1是重要的致熱性細胞因子，因基因編碼不同分為IL-1α和IL-1β，實驗證實IL-1β具有明顯的致熱性，是參與多種致熱原性發熱的重要細胞因子[7]。TNF主要以2種蛋白質形式存在，即：TNF-α和TNF-β，而TNF-α被認為是其發熱的主要調節因子[8]，大量資料表明，內毒素性發熱時血漿和腦脊液中TNF-α含量均明顯升高[9]。內生致熱原可直接或間接作用于體溫調節中樞，引起發熱中樞介質cAMP、PGE2、促皮質激素釋放激素等的釋放，繼而引起發熱。cAMP為腦內多種介質的第二信使，許多學者主張cAMP是主要的中樞發熱介質[10]。在多種動物發熱模型的研究中均發現，下丘腦中cAMP含量與體溫變化呈正相關[11]。內毒素性發熱呈多相性，PGE2在其所有階段皆有調節作用，是重要的中樞調節介質[12]。內毒素性發熱時，下丘腦中PGE2含量明顯升高[13]。

本實驗觀察到靜脈注射內毒素后3 h，模型對照組血清中IL-1β和TNF-α以及下丘腦中cAMP和PGE2含量均明顯升高。廣藿香油可明顯抑制血清中TNF-α和下丘腦中cAMP含量的升高，廣藿香油中劑量組血清中TNF-α含量明顯低于模型對照組，廣藿香油各劑量組下丘腦中cAMP含量均明顯低于模型對照組；有降低血清中IL-1β和下丘腦中PGE2含量升高的趨勢。

綜上所述，廣藿香油對內毒素性發熱家兔有解熱作用，其解熱機制可能與抑制內毒素性發熱家兔血清中TNF-α和下丘腦中cAMP含量升高有關。

[參 考 文 獻]

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