西帕依固齦液對口腔白色念珠菌體外溶血活性研究

孫媛元

山西醫科大學研究生學院口腔系，山西太原 030001

近年來，口腔念珠菌感染的發病率呈不斷上升趨勢，屬于條件致病性疾病，臨床上比較常見的一種疾病。此外，白斑、口腔扁平苔蘚等疾病中口腔念珠菌感染通常提示與惡變的可能，使得該疾病近幾年逐漸受到重視[1]。氟康唑是多年認可的抗真菌藥，但由于其耐藥性是我們一直關注的問題。因此，藥物的合理使用是我們更加關注的話題。西帕依固齦液是有抗真菌作用的民族中藥，用單味藥材沒食子經提取精制而成的漱口液，具有固澀、燥濕、止血、消炎和防腐之功效，廣泛地應用于口腔的衛生保健[2]，在抗真菌藥物中也獨具特色。本實驗通過研究西帕依固齦液對口腔白色念珠菌的溶血性的影響，了解其對白色念珠菌的毒力，對臨床用藥提供理論依據。

1 實驗材料和實驗方法

1.1 材料

菌種：白色念珠菌Candidaalbicans ATCC 10231(中國山西生物制品所菌種保存中心)。沙博氏培養基(陜西西安微生物所)。藥物：西帕依固齦液 (新疆奇康哈博維藥有限公司，國藥準字Z65020012)、氟康唑分散片（山西太原制藥廠有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）MIC 是指能抑制生長的最低藥物濃度，采用美國國家臨床實驗室標準化委員會推薦的微量肉湯積壓稀釋法（national com-mittee for clinical laboratory standards，NCCLS M27-A）規定的方法檢測MIC[3]。

1.2.2 將白色念珠菌接種于沙博氏液體培養基，30℃培養24 h后備用 培養24 h 后的菌液，將它稀釋成為濃度約為1×108 個/mL的實驗菌工作濃度，即取100 mL 細菌混懸液，接種于3組沙博氏平皿培養基（3%葡萄糖），從60 株臨床菌株中挑選白色念珠菌菌株，每組15 株[4]。其中一組加入西帕依固齦液，一組加入氟康唑（使其終濃度為0.5MIC），另外一組為只加培養基的對照組。37℃培養48h。

1.2.3 檢測溶血性 指標：測定菌落直徑和總直徑（菌落+溶血環） 溶血指數計算方法：溶血指數=菌落直徑/總直徑。

1.3 統計學分析

采用SPSS 13.0 軟件進行數據描述和統計，描述性統計分析采用比，均數±標準差，推斷性統計分析采用析因方差分析的方法，用其進行交互作用的顯著性推斷。檢驗標準α=0.05。

2 結果

只加培養基的對照組和西帕依固齦液組、氟康唑組均有溶血現象，但西帕依固齦液組和氟康唑組的溶血現象顯著變少。溶血指數檢測結果分別為：西帕依固齦液組溶血指數為0.3241、氟康唑組溶血指數為0.3315，對照組溶血指數為0.2531，西帕依固齦液組和氟康唑組溶血指數兩者溶血指數的交互效應無統計學意義（F=3.974，P＞0.05）。西帕依固齦液組、氟康唑組與未干預對照組比較，均有顯著性差異，分別為（F=2.521，P=0.015）、（F=2.612，P=0.020）。

3 討論

口腔念珠菌病(oral candidiasis)是白色念珠菌引起的口腔黏膜的真菌感染性疾病[5]。近年來口腔念珠菌感染逐年呈增長趨勢，而且為條件致病菌，常寄生于人的開放性腔道，在機體免疫力降低時容易感染此菌，所以難治療且易復發。因此，選擇有效、使用方便而無明顯副作用的藥物進行治療白色念珠菌，以及預防其感染等是我們目前面臨的重要問題之一。

念珠菌的致病性和毒力是一組因子決定[6-7]。有二相性轉換、疏水性、粘附性、磷脂酶活性、溶血性。二相性包括：能產生菌絲的念珠菌有毒力且毒力增強，有毒力的念珠菌形態學已經由酵母相向菌絲相的轉換了；細胞表面疏水性在黏附宿主細胞、細胞外基質蛋白和導管以及躲避吞噬細胞的監視方面，有著重要作用；白色念珠菌通過識別中間物質黏附素來識別粘附宿主[8-9]；磷脂酶可以分解宿主細胞膜磷脂使細胞膜通透性增高，從而入侵宿主細胞；溶血性是病原微生物破壞亞鐵血紅素后提取鐵元素的能力，提取鐵元素的能力在感染過程中發揮重要作用。1994年MANNS 描述了白色念珠菌被羊血瓊脂培養基誘導后產生一個半透明的完全溶血環，這是念珠菌溶血性的首次報道[10]。在本實驗中，我們發現實驗組和未干預的對照組均發生溶血反應，這與Samaranake LP等[11]的實驗結果相吻合。Samaranake LP 的研究結果認為：檢測口腔白色念珠菌體外均發生溶血活性反應。

抗真菌藥物氟康唑的耐藥問題變得日益嚴重，使臨床用藥遇到棘手問題，因此合理用藥作為解決耐藥的新思路。因此本實驗通過西帕依固齦液和氟康唑分別作用口腔白色念珠菌后，檢測其與未干預對照組溶血活性有無差異性。結果表明雖然未干預對照組和實驗組均有溶血現象，但西帕依固齦液組和氟康唑組的溶血現象明顯變少，西帕依固齦液組和氟康唑組的溶血性與未干預對照組有顯著性差異（P＜0.05）。氟康唑是在臨床中治療口腔白色念珠菌療效明確的唑類抗真菌藥，本實驗的結果證實西帕依固齦液和氟康唑對白色念珠菌溶血活性有相似的作用，提示西帕依固齦液的使用可以使口腔白色念珠菌毒性降低，可以作為臨床治療口腔白色念珠菌的藥物。

西帕依固齦液主要成分是沒食子，屬于具有特色的民族藥。其沒食子抗真菌、抗病毒、抗細菌等方面都具有明顯的療效。也有報道稱西帕依固齦液對口腔白色念珠菌有一定的治療作用[12]。本實驗也證實西帕依固齦液對口腔白色念珠菌毒力的降低有一定的影響。白色念珠菌的毒力因素還包括二相性轉換、疏水性、粘附性、磷脂酶活性等[13]，下一個課題我們將探討西帕依固齦液對口腔白色念珠菌其他毒力因素的研究，用以指導臨床用藥。

[1]Gainza-Cirauqui ML,Nieminen MT,Novak Frazer L,et al.Production of carcinogenic acetaldehyde by Candida albicans from patients with po-tentially malignant oral mucosal disorders[J].J Oral Pathol Med，2013，42(3)：243-9.

[2]中華人民共和國衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準.維吾爾藥分冊[S].1999：123.

[3]Flisfisch S，Meyer J，Meurman JH，et al.Effects of fluorides on Candida albicans.[J].Oral Dis，2008，14（4）：296-301.

[4]蔣李懿，陳華，資云玲.口腔白色念珠菌對西吡氯銨含片的體外溶血活性研究[J].江西醫藥，2011，46(3)：209-211.

[5]李秉琦，周曾同.口腔粘膜病學[M].2 版.北京：人民衛生出版社,2000：28.

[6]HUANG Chang-wu，LI Xing-lu，QIU Jun-feng.Study for pathogenicity of Candida albicans in leucorrhea specimen [J].Chin J Microecol，2004，16(5)：284-286.

[7]黃長武，李興祿，邱君鳳.白帶中白色念珠菌致病性的研究[J].中國微生態學雜志，2004，16(5)：284-286.

[8]WANG Dan min，HAN Jing tian，DONG Xiao qing.Study on the relationship between Candida albicans proteinase activity and virulence inmice[J].Chin J Microecol，2008，12（4）：215-217.

[9]孫海燕，鄒璇.臨床常見致病念珠菌的毒力研究現狀[J].中國微生態學雜志，2013，5(25)：604-608.

[10]ZHU W，FILLER S G.Interactions of Candida albicans with epithelial cells[J].Cell Microbiol，2010，12(3)：273-282.

[11]Luo G，Samaranayake LP，Joyee Y Yan,et al.Candida exhibit different in-vitro hemolvtic actibities[J].J microbiol，2001，39(8)：29-71.

[12]李澤慧，聶晶.西帕依固齦液和沒食子體外抗白色念珠菌的活性測定[J].江西醫藥，2011，46(3)：209-211.

[13]Seabra CL,Botelho CM,Henriques M,et al.Differential adherence and expression of virulence traits by Candida albicans and Candidaparapsilosis in mono-and dual-species cultures in artificial saliva[J].Oliveira R，2013，8(3) ：33-40.