血型血清學檢查方法在交叉配血中的應用

龔衛(wèi)鋒(西安市中心醫(yī)院輸血科，西安 710003)

交叉配血試驗包括主試驗和副試驗兩種。前者用受血者血清與供血者紅細胞懸液作試驗以發(fā)現受血者血清中是否含有與供血者紅細胞反應的抗體，又稱直接配合或主側配合;后者則用供血者血清與受血者紅細胞作試驗以發(fā)現供血者血清中是否有不合抗體，又稱間接配合。交叉配血試驗有多種方式，如鹽水法、膠體介質配血法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。據報道，每輸一個單位的血使受血者致敏的風險為1.0% －1.6%，多次輸血產生同種抗體的幾率為15% －20%［1］。一些疑難血型交叉配血尚需更多的辦法加以驗證，IgG+C3多抗試劑37℃恒溫箱溫浴可發(fā)現血型不配合及意外抗體，該方法主要優(yōu)點是既能檢出不相配合的完全抗體，又能檢出不完全抗體，較好地解決了疑難血型交叉配血中結果難以正確判斷的問題，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 對象

選擇2006－06～2013－08西安市中心醫(yī)院20 136例住院需輸血患者，其中有95例交叉配血不相合患者。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 抗人球蛋白IgG+C3試劑，3%標準A、B、O型紅細胞，均為上海血液中心產品。BASO 2002—2型血庫專用離心機。

1.2.2 抗人球法檢測凝血情況 靜脈抽取受血者和供血者血液各3 ml，按常規(guī)方法分離血清。將受血者和供血者紅細胞用生理鹽水制成5%的洗滌紅細胞生理鹽水懸液。取兩支試管，分別注明“主”、“次”或“+”、“－”號字樣，主側滴入供血者洗滌紅細胞懸液一滴和受血者血清兩滴;次側加入受血者洗滌紅細胞懸液一滴和供血者血清兩滴。混合管:受血者洗滌紅細胞懸液一滴和供血者血清兩滴，供血者洗滌紅細胞懸液一滴和受血者血清兩滴，混勻，37℃恒溫箱內溫浴30 min－2 h后取出，3 000 r/min離心1－2 min;觀察上清液的顏色，然后再觀察有無紅細胞凝集或溶血現象發(fā)生［2］。隨后加入抗人球蛋白IgG+C3試劑1滴，混勻，1 000 r/min離心1 min，觀察結果。

若試管內紅細胞呈均勻混濁無顆粒出現，顯微鏡下紅細胞分散存在，即無凝集，上清液呈正常血清狀顏色為交叉配血試驗相合，可以發(fā)血;若試管內紅細胞出現溶血或凝集現象可用凝膠配血法(又稱微管(板)凝膠抗球蛋白試驗)進一步印證，若仍然有溶血或凝集現象，則需要進一步檢測抗體類型，另外尋找相合血源。

2 結果

本院20 136例住院需輸血患者中檢出95例交叉配血不相合患者，95例交叉配血不相合患者中包括92例意外抗體陽性患者和3例A2B亞型血患者。

92例意外抗體陽性患者(其中包括O型30例，B型32例，A型28例，AB型2例)與同型獻血者試管法交叉配血實驗結果表明，30 min后出現輕度溶血或凝集，1 h后出現中度溶血或凝集，2 h后出現重度溶血或凝集。

凝膠配血法印證92例意外抗體陽性患者經凝膠配血法復檢均有輕度到重度溶血或凝集現象。

3例A2B型血患者與B型、AB型供血者加入IgG+C3多抗試劑37℃溫浴后結果表明，A2B型血患者與B型供血者交叉配血結果無凝集無溶血，A2B型血患者與AB型供血者交叉配血結果輕度凝集，輕度溶血。用凝聚胺法做此亞型患者與供血者交叉配血有同樣的結果，但沒有抗人球法容易判斷結果。

3 討論

需要輸血的患者除單純型外傷大出血外，大多伴隨某些疾病，再加上患者身體素質、病情不同，用藥情況的差異及其他因素，往往會導致臨床配血困難［3］，血液標本中含有肝素、肺炎支原體抗體、抗人球蛋白抗體等均會導致交叉配血失敗［4］。隨著溫浴時間延長，各種影響交叉配血因素充分作用，試管內紅細胞溶血或凝集程度隨之增加。

對于亞型患者A1抗原能與抗A、抗A1抗體發(fā)生凝集反應，而A2B抗原與抗A凝集弱，與抗B凝集強。A2B亞型的血清中含少量抗A1抗體，把A2B亞型血定為AB血型，在臨床輸血過程中若將AB型血輸給患者，其中患者的抗A1抗體會與大部分AB型獻血者血液反應，出現溶血性輸血反應。Ax型紅細胞與B型血清(抗A抗體)凝集較弱，但與O型血清可發(fā)生程度不一的凝集，這是因為O型血中抗A效價比B型血抗A效價高，故做ABO血型鑒定時，應加O型血清(內含抗A、抗B及抗AB)，以防將Ax型誤定為O型或AxB亞型誤定為B型;若找不到合適A2B亞型血，給患者輸B型懸液或O型洗滌紅細胞是妥當的，但須征得患者同意并簽署知情同意書。

微柱凝膠技術在交叉配血中敏感、操作方便，更有效地保證了輸血安全［5］，微柱凝膠技術與試管法需要相互印證。當交叉配血不相合時，首先要復查受血者和供血者的ABO血型和Rh血型，觀察抗體篩檢結果。通常情況下，受血者和獻血者的樣本在輸血后，需要在2－6℃保存3－7 d時間，對于ABO血型正反定型不符血樣，必須嚴格按照操作規(guī)程，保障試劑質量，另外抽取患者新鮮標本重新檢測，排除技術和責任問題是必要的［6］。在血型正確的情況下，還要注意避免意外抗體對交叉配血的影響，篩查出具體抗體類型，選擇不含該抗體所針對抗原的獻血者進行交叉配血，近來，由于激素等免疫抑制劑在臨床中的使用，意外抗體陽性患者已明顯減少。

不完全抗體為ABO系統(tǒng)以外的其他血型抗體，多為IgG抗體，分子量較小，在鹽水介質中只能致敏相應抗原的紅細胞，而不能使之凝集，必須通過特定的方法(如加入IgG+C3多抗試劑37℃恒溫水浴)使致敏紅細胞發(fā)生凝集。通常情況下，IgM抗體在4℃比在22℃或37℃更容易被吸收，IgG抗體在37℃吸收效果最好［7］。所以IgG抗體在37℃更易產生抗原與抗體間的中和反應，加入IgG+C3多抗試劑促進了抗原與抗體反應的進行，隨著反應時間的延長，抗原與抗體反應進行的更加充分完全。此方法對IgG抗體檢出及疑難交叉配血均有顯著效果。對交叉配血不合患者，可采用隨機配血法尋找合適同型供血者，也可進一步篩查IgG抗體類型，再尋找不含該類型IgG抗體的相應抗原的供血者來解決。

［1］ 林瓊琳，李建華，彭燕，等.1038例患者輸血前不規(guī)則抗體篩檢分析［J］.臨床輸血與檢驗，2005，7(3):200 －201.

［2］ 葉應嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.南京:東南大學出版社，2006:100 －102.

［3］ 王志紅，陳善華，馬紅麗，等.探討疑難配血三步法在實際工作中的應用［J］.中國輸血雜志，2011，24(3):246 －247.

［4］ 朱莉，扎洛.49例交叉配血不合的分析及意義［J］.現代預防醫(yī)學，2011，38(10):1919 －1921.

［5］ 陳迎榮.微柱凝膠技術在交叉配血中的應用2586例分析［J］.中國誤診學雜志，2011，11(3):647 －648.

［6］ 龔衛(wèi)鋒，白艷麗.影響ABO血型鑒定結果的因素分析［J］.山西醫(yī)藥雜志，2010，39(12):1176 －1177.

［7］ 夏琳，楊江存，謝偉.臨床輸血診斷技術［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:75－76.