高壓氧治療潰瘍性結腸炎患者的療效及對Th17/Treg細胞免疫調節的影響

羅慶偉, 李志紅, 田小林, 余召師, 趙敏健, 何建林

(1. 湖北省鄂州市中心醫院 胃腸外科, 湖北 鄂州, 436000;2. 廣西壯族自治區桂林醫學院附屬醫院, 廣西 桂林, 541001)

潰瘍性結腸炎(UC)是一種慢性非特異性結腸炎癥性疾病[1]以腹痛、腹瀉、黏液膿血便為主要臨床表現，其病因及發病機制目前尚未完全清楚，可能與遺傳、免疫、微生物及環境等多種因素的相互作用有關[2]。已有研究[3]發現, Th17/Treg失衡與自身免疫性疾病包括UC關系非常密切, Th17通過分泌IL-17等多種效應因子介導炎癥反應，而調節性T細胞(Treg)則能夠起到拮抗作用[4], Th17/Treg平衡對維持正常免疫應答，防止自身免疫性疾病具有重要的意義。高壓氧(HBO)作為一種特殊的療法，有其獨到的優勢和針對性，大量研究[5-6]證實高壓氧對潰瘍性結腸炎具有較好的治療效果。本文探討高壓氧治療UC患者的療效及其對Thl7細胞與Treg細胞的影響，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2011年10月—2013年10月UC患者74例, UC的診斷符合中華醫學會消化分會炎癥性腸病協作組2007年制訂的《對中國炎癥性腸病診斷治療規范的共識意見》中的活動期潰瘍性結腸炎診斷標準[7]。隨機分為高壓氧組40例，男22 例，女18例，年齡22～58歲，平均(38.2±11.5)歲；對照組38例，男23例，女15例，年齡24～59歲，平均(39.3±10.2)歲。2組年齡、性別及體質量等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 治療方法

對照組口服柳氮磺胺吡啶1.0 g, 4次/d。高壓氧組在口服柳氮磺胺吡啶的基礎上(用量、用法與對照組一致)加用高壓氧治療。在高壓氧加壓艙內，設定壓力0.06 kPa, 加壓、穩壓、減壓各30 min, 1次/d, 7 d為1個療程。2組療程均為4周。

1.3 觀察指標

2組患者分別于治療前及治療4周后采集空腹靜脈血各2 mL, 加入EDTA抗凝，實驗管分別加入FITC抗人CD25mAb、FITC抗人IL-17mAb IgG1各10 μL，對照管加入同型對照抗體(PE-CD4), 流式管內混合均勻，于室溫下避光孵育30 min。加入紅細胞裂解液充分震蕩室溫避光放置10 min, 待溶液完全透明。1 200 r/min離心5 min, PBS重懸后洗滌2次，采用流式細胞儀(美國BD公司)對Treg細胞、Thl7細胞進行檢測。以CD4直方圖設門區分Th細胞(CD4+)，同型對照調零，最終以散點圖IL-17、CD25染色陽性表示CD4+IL-17A+的Th17細胞和CD4+CD25+的Treg細胞，用Cellsquest軟件獲取并分析數據。

1.4 臨床療效評定標準[7]

治愈：腹痛、血便、全身中毒癥狀消失，結腸鏡檢查黏膜病變恢復正常；顯效：腹痛、血便、全身中毒癥狀消失或輕微，結腸鏡檢查黏膜病變恢復正常或輕度；好轉：腹痛、血便、全身中毒癥狀減輕，結腸鏡檢查黏膜病變好轉；無效：治療前后無明顯變化。

1.5 統計學分析

采用SPSS 15.0統計軟件進行數據分析，所得數據以均數±標準差表示，兩組間進行方差齊性檢驗，如滿足方差齊性，采用兩樣本t檢驗；如不滿足，則采用秩轉換檢驗方法。同組治療前后數據比較采用配對t檢驗，P<0.05 為差異具有統計學意義。

2 結 果

2組均無完全治愈的病例，但高壓氧組總有效率明顯優于對照組(P<0.05)。見表1。2組患者在治療前外周血Thl7細胞所占比例、Treg細胞所占比例、Th17/Treg細胞的比值差異均無統計學意義(t=1.747, 0.149, 0.091,P>0.05)。經柳氮磺胺吡啶治療(對照組)或高壓氧聯合柳氮磺胺吡啶治療(高壓氧組)后, 2組患者外周血Thl7細胞所占比例均明顯下降(t=14.679, 17.486,P<0.01), Treg細胞所占比例均明顯升高(t=9.85, 13.042,P<0.01), 而Th17/Treg 細胞的比值下降(t=12.5, 9.09,P<0.01)。高壓氧組Thl7細胞所占比例下降程度、Treg細胞所占比例升高程度以及Th17/Treg細胞的比值下降程度較對照組更為明顯(t=9.076, 8.638, 2.227,P<0.05)。見表2。

表1 2組療效比較[n(%)]

與對照組比較，*P<0.05。

表2 2組治療前后外周血Th17細胞與Treg細胞所占百分比的變化

與治療前比較，*P<0.05; 與對照組治療后比較，#P<0.05。

3 討 論

UC是一種慢性非特異性炎癥性腸病，近年來在中國的發病率逐年上升。柳氮磺胺吡啶是目前臨床一線用藥，有一定的療效，但不良反應較多。HBO具有治療方便、簡單、無副作用、患者易于接受、治療效果好等優點。本研究采用HBO與柳氮磺胺吡啶聯合應用，結果顯示該法的總有效率明顯高于單獨使用柳氮磺胺吡啶，與國內學者報道一致[5-6]。其原因可能為[6]: ① HBO改善結腸局部氧供，增加血液及組織內氧分壓，增加血氧含量及氧的彌散距離，改善結腸黏膜局部缺氧狀態，從而促進細胞增生，膠原纖維形成，有利于潰瘍愈合及壞死組織的修復; ② HBO使組織血管收縮，毛細血管通透性降低，滲出減少，腸壁組織水腫減輕或消失，有利于炎癥吸收; HBO還可以促進側支循環建立，改善結腸黏膜血供，促進潰瘍形成; ③ HBO抑制結腸局部抗體和細胞毒免疫反應，HBO使腎上腺皮質激素分泌增加，抑制機體的細胞免疫反應和抗結腸上皮的抗體產生，阻斷UC的發病機制; ④ HBO抑制結腸內微需氧菌及厭氧菌的生長繁殖，增加白細胞的殺菌能力和機體對微生物的防御能力，與抗生素協同增強抗感染作用; ⑤ HBO調節自主神經系統的功能，從而達到舒緩情緒，緩解自主神經系統的功能紊亂癥狀，阻斷了UC的腸病理性惡性循環。

近年來，人們研究發現免疫調節異常在UC 的發病中起重要作用，但HBO是否能通過抗炎-促炎免疫平衡對UC治療發揮免疫調節作用卻未見報道。有研究[8]認為，CD4+T 細胞中的兩個亞群Th17細胞與Treg細胞，二者間轉化平衡是維持腸道免疫穩態的重要因素，這可能成為人類導致炎癥性腸病的原因之一。Th17 細胞是一類不同于Th1 細胞和Th2 細胞的新型CD4+T 細胞亞群，其在多種自身免疫組織損傷中有重要作用，它主要通過分泌IL-17A、IL-17F、IL-22 等多種效應因子介導炎癥反應，參與自身免疫性疾病[9]。Treg是一類具有免疫抑制作用的T細胞亞群，它參與免疫應答/免疫耐受的精細調控，能夠抑制自身免疫并且保護組織損傷，對減少自身免疫和移植排斥反應具有重要的作用[10]。它主要通過分泌IL-4、IL-10 和TGF-β等細胞因子，與多種免疫性疾病的發病機制密切相關[11]。有文獻[12]報道在發生UC時，Treg細胞數量可發生明顯減少而導致免疫功能下降，打破對于腸道細菌的免疫耐受而導致UC發生。因此，調控Th17/Treg的平衡，有可能是治療UC的一個新的途徑。

本研究通過HBO對UC患者Thl7與Treg細胞數量的影響進行了初步的探討，研究證實柳氮磺胺吡啶雖可降低患者體內Th17細胞水平，但聯用HBO后抑制Th17細胞升高的作用更加明顯(P<0.05); 不僅如此，聯用HBO后患者體內免疫抑制性T細胞(Treg細胞)在外周血中所占比例顯著升高(P<0.05), 表現出其促使抗炎性細胞因子分泌的生物學活性。這一結果提示Th17/Treg失衡可能參與UC的發生發展，而HBO聯合柳氮磺胺吡啶正是通過有效的調節Th17/Treg的失衡關系，改善免疫抑制功能，抑制炎癥因子的釋放，達到抗炎-促炎平衡從而發揮治療作用，這可能是其治療UC的免疫調節重要機制之一。

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