白細(xì)胞介素1A多態(tài)性與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的相關(guān)性

巖 亮，舒 云

(西雙版納州人民醫(yī)院 1.外四科；2.普通外科，云南 景洪666100)

白細(xì)胞介素1(interleukin-1，IL-1)是由多種細(xì)胞分泌的一種多功能細(xì)胞因子，顱內(nèi)多種神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞等均可產(chǎn)生IL-1。IL-1具有多種生物學(xué)效應(yīng)，包括炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤特性。IL-1A作為IL-1家族成員之一，可通過激活抗腫瘤免疫、抑制腫瘤細(xì)胞生長，從而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)[1]。IL-1A基因存在兩個(gè)功能性多態(tài)位點(diǎn)：-889C/T(rs1800587)和+4845G/T(Ala114Ser，rs17561)。目前，多項(xiàng)研究報(bào)道了IL-1A基因多態(tài)性與卵巢癌、鼻咽癌、前列腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、胃癌、乳腺癌等腫瘤的相關(guān)性[2-7]。然而，其與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的關(guān)系至今未見報(bào)道。本研究運(yùn)用病例-對照研究探討IL-1A -889C/T和+4845G/T多態(tài)性與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的相關(guān)性，旨在為闡明神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

神經(jīng)膠質(zhì)瘤組：來自于我院神經(jīng)外科，共154例，其中，男性87例，女性67例，平均年齡44.9±15.0歲，中位年齡45歲。所有病例均經(jīng)組織病理學(xué)確診，根據(jù)1997年世界衛(wèi)生組織(WHO)病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ-Ⅱ級(jí)84例，Ⅲ-Ⅳ級(jí)70例。樣本采集前均未進(jìn)行放化療。正常對照組：來自于我院健康體檢中心，共195例，其中，男性105例，女性90例，平均年齡43.7±12.6歲，中位年齡43歲，均為體檢正常標(biāo)本，并且無腫瘤家族史。神經(jīng)膠質(zhì)瘤組和正常對照組在性別和年齡上無差異。

1.2 基因組DNA提取和引物合成

采集入選研究對象外周靜脈血2 ml，酚/氯仿法抽提基因組DNA。參照文獻(xiàn)[8]設(shè)計(jì)-889C/T引物，上游:5’-GGGGGCTTCACTATGTTGCCCACACTGGACT AA-3’，下游:5’-GAAGGCATGGATTTTTACATATGACCTTCCATG-3’，擴(kuò)增片段長度為300 bp。參照文獻(xiàn)[9]設(shè)計(jì)+4845G/T引物，上游：5’-ATGGTTTTAGAAAT CATCAAGCCTAGGGCA-3’，下游:5’-AATGAAAG

GAGGGGAGGATGACAG AAATGT-3’，擴(kuò)增片段長度為231 bp。引物由北京奧科生物技術(shù)有限公司合成。

1.3 基因分型

運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)方法進(jìn)行基因分型。PCR反應(yīng)體系為20 μl，含 PCR mix(北京百泰克生物公司)10.0 μl，上、下游引物(10 μM)各0.2 μl，基因組DNA 1.5 μl，用無菌去離子水補(bǔ)足至20 μl。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，退火30 s(-889C/T:61℃；+4845G/T:54℃)，72 ℃延伸30 s，共35個(gè)循環(huán)；最終72 ℃延伸10 min。限制性內(nèi)切酶酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物：酶切反應(yīng)體系為10 μl，含PCR產(chǎn)物2 μl，限制性內(nèi)切酶1U(NEB公司，-889C/T:Nco I；+4845G/T:Fnu4H I)，10×NEB buffer 1 μl，無菌去離子水補(bǔ)足至10 μl。混勻后，37℃酶切過夜。聚丙烯酰胺凝膠電泳，常規(guī)硝酸銀染色，判型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。直接計(jì)數(shù)法計(jì)算基因型和等位基因頻率，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以優(yōu)勢比(odds ratio，OR)和95%可信區(qū)間(confidence interval，CI)表示神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

IL-1A -889C/T位點(diǎn)檢測到3種基因型：CC基因型：271和29 bp兩條帶；CT基因型：300、271和29 bp 三條帶；TT基因型：300 bp一條帶。IL-1A +4845位點(diǎn)亦檢測到3種基因型：GG基因型：123、79和29 bp三條帶；GT基因型：152、123、79和29 bp四條帶；TT基因型：152和79 bp兩條帶。經(jīng)檢驗(yàn)，兩位點(diǎn)各基因型在對照組和神經(jīng)膠質(zhì)瘤組中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，說明兩組入選人群具有群體代表性。

對照組和神經(jīng)膠質(zhì)瘤組IL-1A基因多態(tài)性比較見表1。IL-1A +4845G/T位點(diǎn)：GG和GT/TT基因型在對照組中的頻率分別為86.7%和13.3%，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組中的頻率分別為76.6%和23.4%，兩組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(GT/TT與GG相比：χ2=5.94，P=0.015)；G和T等位基因在對照組中的頻率分別為93.1%和6.9%，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組中的頻率分別為87.7%和12.3%，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.97，P=0.015)。未發(fā)現(xiàn)IL-1A -889C/T多態(tài)性頻率分布在對照組和神經(jīng)膠質(zhì)瘤組之間存在顯著差異。根據(jù)神經(jīng)膠質(zhì)瘤病理分級(jí)進(jìn)行亞組分析，未發(fā)現(xiàn)IL-1A -889C/T和+4845G/T多態(tài)性與病理分級(jí)存在明顯相關(guān)性(P>0.05)(見表2)。

表1 對照組和神經(jīng)膠質(zhì)瘤組IL-1A多態(tài)性比較

表2 IL-1A多態(tài)性與神經(jīng)膠質(zhì)瘤病理分級(jí)的關(guān)系

各組比較，P>0.05

3 討論

神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，有研究顯示，炎癥在其發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。IL-1作為由多種細(xì)胞分泌的小分子多肽，不僅參與炎癥反應(yīng)，而且具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和細(xì)胞生長分化的特性，能夠誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞表達(dá)多種酶類和(或)多肽類物質(zhì)，例如環(huán)氧化酶-2等，提高機(jī)體對腫瘤的免疫監(jiān)視，通過影響腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為而介導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)[1,10]。

IL-1家族包含IL-1α、IL-1β和白細(xì)胞介素受體拮抗劑(IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra)。IL-1A基因位于人類第2號(hào)染色體長臂1區(qū)4帶(2q14)，含7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，編碼IL-1α蛋白。該基因上存在2個(gè)功能性多態(tài)位點(diǎn)：位于基因啟動(dòng)子區(qū)可影響IL-1α蛋白表達(dá)的-889C/T多態(tài)性和位于第5外顯子的+4845G/T多態(tài)性，G→T單核苷酸變異可引起氨基酸的改變(丙氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榻z氨酸)。目前，多項(xiàng)研究報(bào)道了IL-1A -889C/T多態(tài)性與腫瘤的相關(guān)性。Abazis-Stamboulieh等[5]報(bào)道IL-1A -889CT基因型顯著增加了歐洲人群多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。Snoussi等[7]報(bào)道攜帶IL-1A -889TT基因型的乳腺癌患者無病生存率和總體生存率明顯降低。然而，有研究報(bào)道IL-1A -889C/T多態(tài)性與鼻咽癌、前列腺癌和胃癌的發(fā)病無關(guān)[3,4,6]。本研究亦未發(fā)現(xiàn)IL-1A -889C/T多態(tài)性與中國人群神經(jīng)膠質(zhì)瘤存在明顯的相關(guān)性。造成以上研究結(jié)果不一致的原因可能是：其一、IL-1A 在不同類型腫瘤發(fā)病中的作用不盡相同；其二、種族差異。因此，有必要在多個(gè)種族中深入研究IL-1A -889C/T多態(tài)性與不同類型腫瘤的關(guān)聯(lián)，以明確該位點(diǎn)在腫瘤發(fā)病中的作用。目前，關(guān)于IL-1A +4845G/T多態(tài)性與腫瘤關(guān)系的研究較少。本研究運(yùn)用PCR-RFLP方法調(diào)查了IL-1A +4845G/T多態(tài)性在154例神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者和195例正常對照組中的分布，結(jié)果顯示攜帶GT/TT基因型和T等位基因的個(gè)體患神經(jīng)膠質(zhì)瘤的風(fēng)險(xiǎn)分別增加了1.98和1.89倍，提示IL-1A +4845G/T可能是中國人群神經(jīng)膠質(zhì)瘤的一個(gè)易感基因位點(diǎn)。

綜上所述，本研究首次發(fā)現(xiàn)IL-1A +4845G/T多態(tài)性與中國人群神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)病相關(guān)。然而，其與神經(jīng)膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)、預(yù)后等的關(guān)系以及詳細(xì)的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

作者簡介：巖亮(1972-)，男(傣族)，云南景洪人，副主任醫(yī)師，本科，主要研究方向：神經(jīng)外科學(xué)。

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