原發性卵巢上皮性惡性腫瘤中Livin和Fas的表達及相關性分析

朱 丹,王瑛堅*,邱 丹,劉 莉

(1.吉林大學中日聯誼醫院 婦產科，吉林 長春130033;2.松原市中心醫院 功能科)

卵巢上皮性惡性腫瘤是預后最差的婦科惡性腫瘤，對其早期診斷及有效治療并判定預后，一直是研究的熱點問題。隨著科學技術的迅猛發展，目前認為腫瘤生長、侵襲及轉移是一個復雜的多步驟過程，受諸多因素的影響。Livin 是最新發現的一個 IAPs 家族的新成員[1]，而Fas和其受體構成了Fas系統[2]，其介導了細胞的凋亡，兩者在惡性腫瘤的發生、發展、浸潤擴散、淋巴結轉移、化療耐藥等方面均起著重要的作用。探討二者在卵巢惡性腫瘤中的相關性，可為卵巢上皮性惡性腫瘤的診斷及預后評估提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1 實驗資料

隨機選取吉林大學中日聯誼醫院婦科2011年1月-2012年10月期間48例卵巢上皮性惡性腫瘤手術患者切除標本，患者年齡18-74歲，中位年齡50歲，所有病例術前均未接受放、化療及免疫治療，具有完整的臨床資料。術后病理均經病理科醫師確診。另選取同期卵巢上皮性良性腫瘤手術患者切除標本20例、因其它婦科良性疾病切除的正常卵巢組織20例為對照組。惡性腫瘤組按國際婦產科聯盟(FIGO) 2000年手術-病理分期標準，Ⅰ期23例，Ⅱ期15例、Ⅲ期7例、Ⅳ期3例，其中Ⅰ-Ⅱ期有淋巴結轉移10例，無淋巴轉移28例。組織學分級:G1級16例、G2級10例、G3級22例。組織學類型:漿液性囊腺癌20例、粘液性囊腺癌17例及其他類型11例。所有標本均在手術后2 h內新鮮取材，立即經10 %中性福爾馬林固定，于4℃下用10 %甲醛(pH值7.2-7.4)固定10 h，常規石蠟包埋存檔。

1.2 實驗試劑

兔抗人Livin 多克隆抗體 ，兔抗人Fas 多克隆抗體均購自上海信然生物技術有限公司。

1.3 實驗步驟和方法

所有組織標本常規石蠟包埋后連續切片，片厚約4 μm，共3張。分別常規HE染色、免疫組織化學染色。

1.4 閱片、記錄結果

兩位病理科專家進行雙盲閱片，若兩位專家結果不一致則重新判定。Livin蛋白主要在胞質中表達，偶可見在細胞核表達，顯微鏡下陽性細胞可見呈絲狀棕黃色；Fas為粗細不一的棕黃色顆粒，定位胞漿。按半定量積分法判定蛋白表達結果，見表1。

表1 按半定量積分法判定蛋白表達結果

1.5 數據分析及處理

數據常規整理列表，按指令輸入SPSS 19.0操作系統中，Livin與Fas相關性用Pearson分析，其余均用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Livin在不同的卵巢上皮組織中的表達及其與卵巢上皮性惡性腫瘤臨床病理參數之間的關系

由表2結果可見，Livin在正常卵巢組織、卵巢上皮良性腫瘤和惡性腫瘤中的陽性率呈上升趨勢，差異有顯著性(P<0.01)；Livin在卵巢上皮性惡性腫瘤的臨床分期、組織學分級中的陽性表達差異均有顯著性 (P<0.01)；Livin在卵巢上皮性惡性腫瘤的組織學類型中的表達差異無統計學意義 (P>0.05)；Livin在有淋巴結轉移病人的陽性表達率高于無淋巴結轉移者，但差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 Fas在不同卵巢組織中的表達及其與卵巢上皮性惡性腫瘤臨床病理參數之間的關系

由表3結果可見，Fas在正常卵巢組織、卵巢上皮良性腫瘤和惡性腫瘤中的陽性率呈下降趨勢，差異具有統計學意義(P<0.01)。Fas在臨床分期方面，差異有統計學意義 (P<0.01)。在各組織學類型、組織學分級及淋巴結轉移中表達差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.3 Livin與Fas在卵巢上皮性惡性腫瘤中表達結果的相關性

由表4結果可知，37例Livin陽性者中，有24例Fas為陰性，11例Livin陰性者中，有9例Fas為陽性，對兩者之間的關系進行Pearson相關性分析:r=-0.362，P<0.01。說明Livin與Fas在卵巢上皮性惡性腫瘤中的表達呈負相關。

表2 Livin在正常卵巢組織、卵巢上皮性良性腫瘤組織及卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的表達及其與卵巢上皮性惡性腫瘤臨床病理參數之間的關系

表3 Fas在正常卵巢組織、卵巢上皮性良性腫瘤組織及卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的表達及其與卵巢上皮性惡性腫瘤臨床病理參數之間的關系

注:△ 率的兩兩比較與卵巢上皮性惡性腫瘤組織比較

表4 Livin與Fas在卵巢上皮性惡性腫瘤中表達結果的相關性分析

3 討論

3.1 Livin結構、功能與卵巢上皮性惡性腫瘤的關系

凋亡抑制蛋白(IAP)具有調節受體介導的信號轉導，調節細胞周期，抑制半胱氨酸蛋白酶活性等作用[1]。近年發現Livin為IAP家族中抗凋亡活性最強的，可激活泛素-蛋白酶體途徑，使人體細胞中Smac降解，最終實現抑制細胞凋亡[3]。

目前大量研究證明，Livin在多種惡性腫瘤組織中陽性表達率增加，且表達率與腫瘤浸潤深度、組織分化和淋巴結轉移有關[4,5]。提示其抑制細胞凋亡 ,與腫瘤的發生、發展及預后相關 ,有望成為腫瘤治療的新靶點。本研究表明，Livin在正常卵巢組織、卵巢上皮性良性腫瘤和惡性腫瘤中的陽性表達率增高，差異有顯著性 。由此可見，Livin表達水平在由正常組織到惡變的整個過程中是逐漸遞增的，其陽性表達率隨著腫瘤惡性程度的增加而增加，說明Livin參與了卵巢腫瘤的發生發展過程。本研究還表明，在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中,Livin的陽性表達率隨腫瘤組織學分級及臨床分期的增高而增高，差異具有顯著性。由于臨床分期和組織學分級是判斷惡性腫瘤預后的一個重要指標，因此，檢測Livin的陽性表達率可作為判定卵巢惡性腫瘤預后的指標之一，并用于指導后續治療。另外，Livin在不同組織性類型的卵巢惡性腫瘤中以及有無淋巴結轉移組中的陽性表達率無顯著性差異，說明其與組織學類型及淋巴轉移無關。

3.2 Fas的結構與功能 及與卵巢上皮性惡性腫瘤的關系

Fas是典型的細胞凋亡信號受體，具有誘導細胞凋亡的作用[2]。Fas介導的細胞凋亡,基因定位于10號染色體長臂，當其與一種相關的蛋白結合，活化Caspase家族的其它成員，使細胞骨架降解，從而使細胞凋亡[2]。大量研究證實，Fas和其受體夠成了Fas系統，其介導了腫瘤細胞的凋亡[6,7]。本研究表明，Fas在正常卵巢組織、卵巢上皮良性腫瘤和惡性腫瘤中的陽性表達率顯著性降低，由此可以看出其表達水平在由正常組織到惡變的整個過程中是逐漸遞減的，這與Fas介導的細胞凋亡有關，當細胞表面缺少它的表達時，凋亡信號不能啟動,使細胞擺脫了凋亡的作用,而不斷分裂、增殖，最終導致腫瘤的發生。本次實驗的結果和文獻的報道一致[6,7]。本研究還表明，Fas的陽性表達率隨著卵巢上皮性惡性腫瘤的臨床分期的增高而降低，其差異具有統計學意義。證明惡性腫瘤避開免疫系統的監視，逃脫被清除的機會，是通過腫瘤中Fas表達的下調來實現的。另外，Fas在卵巢惡性腫瘤不同組織學類型、組織學分級及有無淋巴結轉移中的陽性表達率均無顯著性差異。說明Fas的表達與組織學類型、組織學分級及淋巴結轉移無關，僅可作為判定卵巢良、惡性腫瘤的指標之一；另外Fas在卵巢上皮性惡性腫瘤中的表達與腫瘤的臨床分期密切相關，亦可作為判定預后的指標。

3.3 Livin與Fas在卵巢上皮性腫瘤中的相關性

本研究表明， Livin與Fas在卵巢上皮性惡性腫瘤中的表達呈負相關。Livin表達的上調與Fas表達的下調，共同抑制了細胞的凋亡，導致了腫瘤的發生，在卵巢上皮性惡性腫瘤的發生發展過程中起到了協同作用，這可能與下面的機制有關:Livin通過BIR區與半胱氨酸蛋白酶(Caspase)結合并且抑制其活性，從而起到阻斷凋亡受體的作用，抑制細胞凋亡。Caspase-3是Fas介導的細胞凋亡的主要通路。配體FasL受體與Fas交聯后，含有死亡區的膜內信號連接蛋白與Fas受體的死亡結構域結合,一系列轉導凋亡信號在連接蛋白的結構域的作用下，使Caspase活化引起細胞凋亡。Livin通過間接或直接抑制凋亡效應分子Caspases-3來抑制Fas介導的細胞凋亡。

參考文獻：

[1]Boaz Nachmias Itay Lazar.Subcellular localization determines the delicate balance between the anti-and pro-apoptotic activity of Livin[J] .Apoptosis,2007,(7):1129.

[2]Arai H,Gordon D,Nabel EG,et al.Gene transfer of Fas ligand induces tumor regression in vivio[J].Proc Natl Acad Sci USA,1997,94:138.

[3]Ma L,Huang Y,Song Z etc.Livin promotes Smac/DIABLO degradation by ubiquitin-proteasome path way[J].Cell Death Differ,2006,13(12):2079.

[4]Liu HB,Kong CZ,Zeng Y.Livin may serve as a marker for prognosis of bladder cancer relapse and a target of bladder cancer treatment[J].Urol Oncol,2009,27(3):277.

[5]Nedelcu T,Kubista T,Koller A.Livin and Bcl2 expression in high grade osteosarcoma[J].J CancerRes Clin Onco,2008,134(2):237.

[6]Darren I O' Brien,Ken Nally,Raymond G Kelly,et al.Targeting the Fas/Fast ligand pathway in cancer[J].Expert Opin Ther Targets,2005,9(5):1031.

[7]Darren I O' Brien,Ken Nally,Raymond G Kelly,et al.Targeting the Fas/Fast ligand pathway in cancer[J].Expert Opin Ther Targets,2005,9(5):1031.