自身抗體檢測對系統性紅斑狼瘡的診斷價值分析

邢桂芝，石哲群，褚金龍，房 成，張雅青

(1．唐山市工人醫院 檢驗科，河北 唐山063000；2.唐山市康復醫療中心；3.唐山市工人醫院 血液科)

系統性紅斑狼瘡(SLE)的發病是多種免疫系統功能異常的結果，患者體內會出現T細胞功能異常、B細胞高度活化、NK細胞活性降低等病理改變，進而可引起多種自身抗體的產生和免疫復合物的沉積，最終引發SLE相關組織損傷的出現，因此，有關細胞免疫和體液免疫失衡的課題始終是SLE相關研究領域的焦點問題[1]。本研究針對自身抗體檢測對SLE的診斷價值進行了觀察和分析，現將研究的具體情況報告如下。

1 材料和方法

1.1研究對象

選取2011年6月至2012年12月我院收治的SLE患者100例作為SLE組，所有納入患者均符合美國風濕病協會于1997年修訂的SLE診斷及分類標準[2]，其中，男性患者為13例，女性患者為87例，患者平均年齡為(33.8±10.6)歲；選取同期我院收治的其他自身免疫病患者100例作為OAID組，其中，61例為干燥綜合征患者，25例為類風濕關節炎患者，14例為系統性硬化癥患者，男性患者為15例，女性患者為85例，患者平均年齡為(41.6±12.9)；選取同期在我院查體正常者100例作為對照組，納入的研究對象均無自身免疫病，其中，男性16例，女性84例，平均年齡為(38.7±11.3)。3組研究對象在年齡、性別構成方面的差異均無顯著性(P>0.05)。

1.2觀察指標和檢測方法

對3組研究對象的血清抗核抗體(ANAIgG)、抗雙鏈DNA 抗體(抗dsDNA 抗體)、14種特異性IgG類自身抗體的表達陽性率進行檢測和比較。具體方法如下：采集3組研究對象的清晨空腹靜脈血，以每分鐘3 000 r的轉速進行離心后分離血清，保存于-20℃冰箱內待測。血清標本用PBS緩沖液進行1∶100和1∶1 000稀釋，以陰陽血清作為對照，加入異硫氰酸熒光素FITC標記的抗人球蛋白，應用間接免疫熒光法(IIF法)，以人喉癌細胞Hep-2 及猴肝細胞為基質，在熒光顯微鏡(德國歐蒙公司生產)下對染色結果進行觀察，檢測(ANAIgG)的表達水平，以效價大于1∶100為陽性結果，以綠蠅短膜蟲為基質，測定血清抗dsDNA 抗體的表達陽性率；將血清樣本稀釋后，加入堿性磷酸酶標記的抗人IgG、溫育清洗后，采用線性免疫檢測法(LIA法)測定抗核抗體譜中14種抗體的表達陽性率，應用EURO Line Scan 軟件對染色結果的灰度值進行掃描，灰度值≤5時判定為陰性，灰度值在6至10之間時判定為弱陽性，灰度值≥11時判定為陽性。

1.3數據處理方法

所有數據應用EXCEL建立數據庫，應用SPSS 13.0統計軟件包進行統計學處理，各組自身抗體表達陽性率之間的比較采用卡方檢驗進行分析，應用Logistic多元回歸篩選用于SLE診斷的自身抗體指標，以P<0.05為差異有顯著性。

2 結果

2.1 3組研究對象各類自身抗體表達陽性率的比較

見表1。

表1 3組研究對象各類自身抗體表達陽性率的比較(例，%)

注：與OAID組比較，*P<0.05

2.2SLE診斷相關自身抗體指標的篩選以是否SLE患病為因變量(診斷標準為SLE臨床診斷金標準)，以各自身抗體表達情況為自變量，應用Logistic多元回歸進行相關因素分析，見表2。

2.3各自身抗體的單項檢測及聯合檢測對SLE的診斷價值見表3。

表2 Logisctic 回歸篩選SLE診斷相關自身抗體指標結果

表3 各自身抗體的單項檢測及聯合檢測對SLE的診斷價值

注：與單項自身抗體檢測，*P<0.05

3 討論

SLE是可以累及多個系統、多個器官的自身免疫性疾病，根據相關調查研究數據，我國女性人群中SLE患病率可達100/10萬，顯著高于白種人群女性的患病率，這也提示了遺傳基因的差異可能與SLE相關免疫功能異常具有相關性[3，4]。SLE常發生于免疫系統的自身耐受功能崩潰后，免疫系統中大量細胞因子的釋放和激活、自身抗體和免疫復合物的產生都參與了SLE發病和進展的過程[5]。因此，血清自身抗體檢測用于SLE早期診斷的臨床意義是巨大的。本研究選取了IIF法和LIA法兩種方法進行血清標本中自身抗體表達情況的檢測，在各類自身抗體中，抗dsDNA抗體可對細胞功能產生干擾并誘導細胞凋亡，而且能夠侵入腎小球膜細胞并引發細胞增殖，從而最終導致蛋白尿的產生，因此，該抗體是SLE早期診斷的重要自身抗體指標之一。組蛋白是細胞核內含量最高的蛋白質，也是構成染色體的重要物質，SLE患者血清中抗Histone抗體的產生與其出現白細胞減少和溶血性貧血等癥狀具有明顯的相關性[6]，本研究中應用LIA法對抗Histone抗體等多種自身抗體進行檢測。

已有很多研究證實，應用多種自身抗體聯合檢測的方法可提高SLE診斷的敏感度，減少SLE的漏診率，但是由于開展研究的自身抗體項目有限、檢測方法難以普及、缺乏多中心大樣本隨機對照研究證據等原因，實際的研究中很少能進行全面的自身抗體分析[7-9]。因此，既提高診斷效能又比較經濟的最佳診斷策略是根據患者癥狀開展幾種特異自身抗體聯合檢測[10]。本研究結果顯示，SLE組患者的抗dsDNA抗體、抗nRNP/Sm抗體、抗Sm抗體、ARPA抗體、AnuA抗體、抗Histone抗體的表達陽性率均顯著高于OAID組(P<0.05)，Logistic多元回歸分析顯示，抗dsDNA 抗體、抗Sm抗體、AnuA抗體、抗Histone抗體、ARPA抗體等五項指標最終被納入Logistic多元回歸方程，其表達陽性率與SLE的患病情況具有相關性(P<0.05)，說明上述五項自身抗體指標的表達是SLE發病的相關危險因素，可作為SLE早期診斷的參考指標；應用上述五種自身抗體進行單項檢測時，敏感度均在20%-44%，應用五種自身抗體聯合檢測時，敏感度為84%，顯著高于應用單項檢測(P<0.05)，而與單項抗體檢測的特異性的差異無顯著性(P>0.05)，且聯合檢測的約登指數顯著高于單項自身抗體檢測(P<0.05)，說明應用多種自身抗體聯合檢測可提高診斷的敏感度和總體效能，且不會對診斷的特異度造成顯著的影響。

參考文獻：

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[10]Almeida González D,Cabrera de León A,Rodríguez Pérez Model C,et al.Efficiency of different strategies to detect autoantibodies to extractable nuclear antigens[J].J Immunol Methods,2010,360(1-2):89.