苦蕎浸泡酒中總黃酮的測定方法及浸提條件研究

劉曉燕

摘要：通過精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率等試驗(yàn)評價(jià)了苦蕎及其制品中總黃酮常用的檢測方法，并探討應(yīng)用于苦蕎酒中總黃酮含量測定的可行性。同時(shí)，對影響苦蕎保健泡酒中黃酮含量的兩大因素（時(shí)間和固液比）進(jìn)行了單因素試驗(yàn)，確定這兩種因素對提高黃酮在白酒中溶出率的較適宜范圍。結(jié)果表明，該方法應(yīng)用于苦蕎酒的檢測時(shí)有較好的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和回收率，變異系數(shù)分別為3.30%、3.26%、1.81%、3.36%，說明該法同樣適用于苦蕎酒中總黃酮含量的測定，并采用此方法確定苦蕎浸泡酒（55%，V/V）最佳浸泡時(shí)間為10 d，最佳固液比為1∶20。

關(guān)鍵詞：苦蕎浸泡酒；總黃酮；溶出率

中圖分類號(hào)：S652.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）13-3156-03

Determination of the Total Flavonoids Content and the Soaked

Condition of Buckwheat Wine

LIU Xiao-yan

（School of Applied Chemical Engineering/Provincial Key Laboratory of Buckwheat，Xichang College， Xichang 615013， Sichuan， China）

Abstract： The feasibility of determining the total flavonoids content in buckwheat wine was evaluated by using precision， stability， reproducibility and recovery test. Effects of different soaking time and ratio of solid to liquid on leaching efficiency were investigated with single factor test. Results showed that the method had good accuracy， stability， reproducibility and recovery with variation coefficients of 3.30%，3.26%，1.81%，3.36%，respectively. The method could be used to determine the total flavonoids content in buckwheat wine. The best soaking time was about 10 days. Ratio of solid to liquid was around 1∶20. Key words： buckwheat wine； total flavonoids； leaching rate

苦蕎麥（Fagopyrum esculentum）是蓼科蕎麥屬的植物，為我國特有的蕎麥品種，主產(chǎn)于大涼山2 000 m以上的高寒山區(qū)，是一種藥食兩用植物[1，2]。現(xiàn)代科學(xué)研究證明，苦蕎麥具有很高的營養(yǎng)價(jià)值，并含有其他谷物所不含有的黃酮類物質(zhì)，苦蕎黃酮具有降血脂、降血糖、抗氧化、抗癌等多種功效。隨著人們對苦蕎黃酮化合物研發(fā)的深入，其營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值越來越受到關(guān)注[3，4]。黃酮在水中的溶解度較小，而在乙醇中有較高的溶解度，因此苦蕎保健酒，有效地提取了苦蕎的功能成分，具有較高的營養(yǎng)保健作用，是一種低度、高營養(yǎng)的保健品，經(jīng)常適量飲用苦蕎酒可防毛細(xì)血管的脆性和滲透性出血，預(yù)防糖尿病、高血脂、冠心病、風(fēng)濕病等，并且有強(qiáng)筋骨、健脾胃、祛風(fēng)濕、壯腎氣之功效[5-7]。

目前，苦蕎麥中總黃酮含量的測定通常采用中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)[8]，該標(biāo)準(zhǔn)采用分光光度法只針對蕎麥及其制品中的總黃酮含量的測定，未包括苦蕎浸泡酒中總黃酮含量測定。本研究綜合相關(guān)測定方法[9-12]應(yīng)用于苦蕎浸泡酒中黃酮含量的測定，通過精密度、穩(wěn)定性、添加回收率試驗(yàn)，最終建立了苦蕎浸泡酒中總黃酮含量的測定方法，旨在為相關(guān)單位或企業(yè)在測定苦蕎泡酒總黃酮含量時(shí)提供參考。同時(shí)，對影響苦蕎浸泡酒黃酮含量的兩大因素，即時(shí)間和固液比進(jìn)行了單因素試驗(yàn)，確定這兩種因素對提高苦蕎中黃酮在白酒中溶出率的較適宜范圍，為人們?nèi)粘Ｉ钪信葜瓶嗍w保健酒提供參考[13，14]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料與試劑 航飛維苦蕎茶（西昌航飛苦蕎科技發(fā)展有限公司）；野蕎神清香型白酒（55%，V/V； 西昌航飛苦蕎科技發(fā)展有限公司）。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心），甲醇、三氯化鋁、乙酸鉀均為分析純（國藥集團(tuán)上海試劑公司）。

1.1.2 儀器設(shè)備 電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京市永光醫(yī)療儀器廠）；ESJ210-4B型電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）；722G型可見分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市長風(fēng)儀器儀表公司）。

1.2 苦蕎泡酒中黃酮測定方法的評價(jià)

1.2.1 苦蕎泡酒的制備方法 稱取2.0 g的苦蕎茶，置于150 mL三角瓶中，加入白酒50 mL，常溫下放置10 d，過濾后的濾液即為苦蕎浸泡酒，設(shè)置3個(gè)重復(fù)。吸取1.0 mL浸泡酒置于10 mL容量瓶中，用70%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，靜置30 min，待測。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法 用移液管吸取20 mg/mL 蘆丁標(biāo)液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL分別置于 50 mL 容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液和3 mL 1.0 mol/L 乙酸鉀溶液，用70%的甲醇溶液定容至刻度，搖勻，靜置30 min。同時(shí)作空白對照。標(biāo)準(zhǔn)曲線中蘆丁質(zhì)量濃度分別為0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mg/mL。在波長420 nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)、蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，回歸方程為：y=0.006 4-0.001 5x（R2=0.997 9）。

1.2.3 總黃酮含量的測定方法 吸取苦蕎泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液2 mL，1 mol/L 乙酸鉀溶液3 mL，用70%的甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，放置30 min，在420 nm處測定其吸光值。依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出總黃酮的濃度值。

1.2.4 苦蕎泡酒中總黃酮含量的計(jì)算方法 苦蕎酒中總黃酮含量以蘆丁的質(zhì)量計(jì)，稀釋倍數(shù)數(shù)值以V表示，按公式計(jì)算。

w= C·V/1000

式中，C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出的總黃酮濃度，mg/mL；V為總稀釋倍數(shù)。

1.2.5 精密度試驗(yàn) 吸取浸泡酒1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，連續(xù)測定吸光度5次，計(jì)算出泡酒中黃酮含量。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸取浸泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液和3 mL 1 mol/L 乙酸鉀溶液，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min。分別在放置0、15、30、45、60、90 min時(shí)測定其吸光度，計(jì)算出泡酒中黃酮含量。

1.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 分別吸取浸泡酒1.0 mL 5份，于10 mL容量瓶中，加入 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，并計(jì)算出苦蕎酒中黃酮含量。

1.2.8 回收率試驗(yàn) 分別吸取浸泡酒樣品1.0 mL 5份，置于10 mL容量瓶中，再準(zhǔn)確加入1 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL），同樣0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，70%甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，計(jì)算出浸泡酒中黃酮含量。

1.3 浸泡條件對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響

1.3.1 浸泡時(shí)間對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響 稱取2.0 g苦蕎茶浸泡于50 mL白酒中，分別于1、3、5、10、15、20、30 d吸取浸泡酒，利用上述方法測定黃酮含量，重復(fù)3次，考察浸泡時(shí)間對苦蕎酒中黃酮溶出量的影響。

1.3.2 固液比對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響 稱取2.0 g苦蕎茶8份分別浸泡于10、20、30、40、50、60、70、80 mL的白酒中，浸泡10 d后過濾后即得不同濃度的苦蕎浸泡酒，測定黃酮的溶出率（黃酮溶出率（%）=100×測出的黃酮濃度×總體積/總質(zhì)量），重復(fù)3次，考察固液比對苦蕎浸泡酒中黃酮溶出率的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦蕎泡酒中黃酮測定方法的評價(jià)

2.1.1 精密度試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)“1.2.5”方法，測定結(jié)果見表1，同一樣品的總黃酮含量連續(xù)測定結(jié)果的RSD為3.30%，表明該方法測定苦蕎浸泡酒中黃酮含量時(shí)精密度良好。

2.1.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.6”方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表2， RSD為3.26%。苦蕎浸泡酒樣品溶液在90 min內(nèi)總黃酮量基本不變，說明苦蕎浸泡酒使用該方法測定黃酮量時(shí)穩(wěn)定性良好。

2.1.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.7”方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表3， RSD為1.81%。說明該測定方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量測定時(shí)重現(xiàn)性良好。

2.1.4 回收率試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.8”方法進(jìn)行試驗(yàn)，測定結(jié)果見表4，得到平均加標(biāo)回收率為97.79%，RSD為3.36%。該結(jié)果表明本方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量的測定具有可行性。

2.2 浸泡條件對苦蕎泡酒中黃酮含量影響的測定結(jié)果

2.2.1 不同浸泡時(shí)間苦蕎酒中黃酮含量的變化 由圖1可知，浸泡時(shí)間在1～10 d內(nèi)，隨著天數(shù)的增加，黃酮含量逐漸增加，直到浸泡10 d后，黃酮含量基本不再隨時(shí)間的增加而增加，說明此時(shí)苦蕎中黃酮已經(jīng)達(dá)到最大溶出率，因此可以推斷出苦蕎酒最佳浸泡時(shí)間為10 d。

2.2.2 不同固液比浸泡苦蕎酒中黃酮含量的變化 由圖2可知，浸泡苦蕎酒時(shí)，隨著白酒量的增加，黃酮溶出率增加，直至當(dāng)苦蕎和浸泡酒的比例達(dá)到1∶20時(shí)，白酒體積的增加對黃酮溶出率影響減小，黃酮含量增加值逐漸趨近為零，因此采用野蕎神清香型白酒（55%，V/V）浸泡苦蕎酒固液比為1∶20時(shí)為最佳。

3 小結(jié)與討論

本研究將苦蕎和苦蕎制品中黃酮含量的農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)方法應(yīng)用于測定苦蕎酒中黃酮的含量，通過精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加標(biāo)回收率試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果表明，該方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量的測定切實(shí)可行。同時(shí)從苦蕎酒的野蕎神清香型白酒（55%，V/V）浸泡時(shí)間和浸泡體積對浸泡酒中黃酮含量的影響分析得到，最佳浸泡時(shí)間為10 d，最佳固液比為1∶20，此結(jié)果和王雪波等[15]的結(jié)果基本一致。本研究結(jié)果可以為苦蕎酒的開發(fā)及生產(chǎn)企業(yè)提供參考，并對喜愛泡酒的公眾提供保健酒合適的炮制條件。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳慶富. 蕎麥屬植物科學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2012.

[2] 趙 鋼，唐 宇，馬 榮.苦蕎麥的營養(yǎng)和藥用價(jià)值及其開發(fā)應(yīng)用[J].農(nóng)牧產(chǎn)品開發(fā)，1999（7）：17-18.

[3] 姜忠麗，趙永進(jìn).苦蕎麥的營養(yǎng)成分及其保健功能[J].糧食與食品工業(yè)，2003（4）：33-35.

[4] 田秀紅，任 濤.苦蕎麥的營養(yǎng)保健作用與開發(fā)利用[J].中國食物與營養(yǎng)，2007（10）：44-46.

[5] 胡一冰，楊敬東，鄒 亮，等.苦蕎麥藥理研究及臨床應(yīng)用概況[J].成都大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006，25（4）：271-276.

[6] 黃興富，趙聲定，王繼良，等.蕎麥中黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2010（5）：354-355.

[7] 張 政，周 源，王轉(zhuǎn)花，等苦蕎麥麩皮中類黃酮的抗氧化活性[J].藥物生物技術(shù)，2001，8（4）：217-220.

[8] 周建華，劉松艷，鞏發(fā)永.兩種分光光度法測定苦蕎中黃酮含量的比較[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（5）：247-251.

[9] 張宏志，管正學(xué)，田曉婭.分光光度法測定蕎麥中蘆丁含量[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室，1996，13（3）：24-27.

[10] 徐寶才，丁霄霖.苦蕎黃酮的測定方法[J].無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，22（2）：98-101.

[11] 張 琪，劉慧靈，朱 瑞，等.苦蕎麥中總黃酮和蘆丁的含量測定方法的研究[J].食品科學(xué)，2003，24（7）：113-116.

[12] 鞏發(fā)永.涼山州苦蕎茶總黃酮含量對比及分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（18）：3811-3814.

[13] 李 欣，王步軍.兩種苦蕎黃酮提取方法的優(yōu)化及含量測定[J].食品科學(xué)，2010，31（6）：80-85.

[14] 歐陽平，張高勇，康保安，等.苦蕎麥黃酮類化合物提取的工藝參數(shù)優(yōu)化及數(shù)學(xué)模型研究[J].食品科學(xué)，2005，26（1）：107-111.

[15] 王雪波，鄧建華，胡建平.苦蕎泡酒的工藝條件[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2013（2）：30-32.

1.2.3 總黃酮含量的測定方法 吸取苦蕎泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液2 mL，1 mol/L 乙酸鉀溶液3 mL，用70%的甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，放置30 min，在420 nm處測定其吸光值。依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出總黃酮的濃度值。

1.2.4 苦蕎泡酒中總黃酮含量的計(jì)算方法 苦蕎酒中總黃酮含量以蘆丁的質(zhì)量計(jì)，稀釋倍數(shù)數(shù)值以V表示，按公式計(jì)算。

w= C·V/1000

式中，C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出的總黃酮濃度，mg/mL；V為總稀釋倍數(shù)。

1.2.5 精密度試驗(yàn) 吸取浸泡酒1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，連續(xù)測定吸光度5次，計(jì)算出泡酒中黃酮含量。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸取浸泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液和3 mL 1 mol/L 乙酸鉀溶液，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min。分別在放置0、15、30、45、60、90 min時(shí)測定其吸光度，計(jì)算出泡酒中黃酮含量。

1.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 分別吸取浸泡酒1.0 mL 5份，于10 mL容量瓶中，加入 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，并計(jì)算出苦蕎酒中黃酮含量。

1.2.8 回收率試驗(yàn) 分別吸取浸泡酒樣品1.0 mL 5份，置于10 mL容量瓶中，再準(zhǔn)確加入1 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL），同樣0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，70%甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，計(jì)算出浸泡酒中黃酮含量。

1.3 浸泡條件對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響

1.3.1 浸泡時(shí)間對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響 稱取2.0 g苦蕎茶浸泡于50 mL白酒中，分別于1、3、5、10、15、20、30 d吸取浸泡酒，利用上述方法測定黃酮含量，重復(fù)3次，考察浸泡時(shí)間對苦蕎酒中黃酮溶出量的影響。

1.3.2 固液比對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響 稱取2.0 g苦蕎茶8份分別浸泡于10、20、30、40、50、60、70、80 mL的白酒中，浸泡10 d后過濾后即得不同濃度的苦蕎浸泡酒，測定黃酮的溶出率（黃酮溶出率（%）=100×測出的黃酮濃度×總體積/總質(zhì)量），重復(fù)3次，考察固液比對苦蕎浸泡酒中黃酮溶出率的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦蕎泡酒中黃酮測定方法的評價(jià)

2.1.1 精密度試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)“1.2.5”方法，測定結(jié)果見表1，同一樣品的總黃酮含量連續(xù)測定結(jié)果的RSD為3.30%，表明該方法測定苦蕎浸泡酒中黃酮含量時(shí)精密度良好。

2.1.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.6”方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表2， RSD為3.26%。苦蕎浸泡酒樣品溶液在90 min內(nèi)總黃酮量基本不變，說明苦蕎浸泡酒使用該方法測定黃酮量時(shí)穩(wěn)定性良好。

2.1.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.7”方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表3， RSD為1.81%。說明該測定方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量測定時(shí)重現(xiàn)性良好。

2.1.4 回收率試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.8”方法進(jìn)行試驗(yàn)，測定結(jié)果見表4，得到平均加標(biāo)回收率為97.79%，RSD為3.36%。該結(jié)果表明本方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量的測定具有可行性。

2.2 浸泡條件對苦蕎泡酒中黃酮含量影響的測定結(jié)果

2.2.1 不同浸泡時(shí)間苦蕎酒中黃酮含量的變化 由圖1可知，浸泡時(shí)間在1～10 d內(nèi)，隨著天數(shù)的增加，黃酮含量逐漸增加，直到浸泡10 d后，黃酮含量基本不再隨時(shí)間的增加而增加，說明此時(shí)苦蕎中黃酮已經(jīng)達(dá)到最大溶出率，因此可以推斷出苦蕎酒最佳浸泡時(shí)間為10 d。

2.2.2 不同固液比浸泡苦蕎酒中黃酮含量的變化 由圖2可知，浸泡苦蕎酒時(shí)，隨著白酒量的增加，黃酮溶出率增加，直至當(dāng)苦蕎和浸泡酒的比例達(dá)到1∶20時(shí)，白酒體積的增加對黃酮溶出率影響減小，黃酮含量增加值逐漸趨近為零，因此采用野蕎神清香型白酒（55%，V/V）浸泡苦蕎酒固液比為1∶20時(shí)為最佳。

3 小結(jié)與討論

本研究將苦蕎和苦蕎制品中黃酮含量的農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)方法應(yīng)用于測定苦蕎酒中黃酮的含量，通過精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加標(biāo)回收率試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果表明，該方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量的測定切實(shí)可行。同時(shí)從苦蕎酒的野蕎神清香型白酒（55%，V/V）浸泡時(shí)間和浸泡體積對浸泡酒中黃酮含量的影響分析得到，最佳浸泡時(shí)間為10 d，最佳固液比為1∶20，此結(jié)果和王雪波等[15]的結(jié)果基本一致。本研究結(jié)果可以為苦蕎酒的開發(fā)及生產(chǎn)企業(yè)提供參考，并對喜愛泡酒的公眾提供保健酒合適的炮制條件。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳慶富. 蕎麥屬植物科學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2012.

[2] 趙 鋼，唐 宇，馬 榮.苦蕎麥的營養(yǎng)和藥用價(jià)值及其開發(fā)應(yīng)用[J].農(nóng)牧產(chǎn)品開發(fā)，1999（7）：17-18.

[3] 姜忠麗，趙永進(jìn).苦蕎麥的營養(yǎng)成分及其保健功能[J].糧食與食品工業(yè)，2003（4）：33-35.

[4] 田秀紅，任 濤.苦蕎麥的營養(yǎng)保健作用與開發(fā)利用[J].中國食物與營養(yǎng)，2007（10）：44-46.

[5] 胡一冰，楊敬東，鄒 亮，等.苦蕎麥藥理研究及臨床應(yīng)用概況[J].成都大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006，25（4）：271-276.

[6] 黃興富，趙聲定，王繼良，等.蕎麥中黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2010（5）：354-355.

[7] 張 政，周 源，王轉(zhuǎn)花，等苦蕎麥麩皮中類黃酮的抗氧化活性[J].藥物生物技術(shù)，2001，8（4）：217-220.

[8] 周建華，劉松艷，鞏發(fā)永.兩種分光光度法測定苦蕎中黃酮含量的比較[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（5）：247-251.

[9] 張宏志，管正學(xué)，田曉婭.分光光度法測定蕎麥中蘆丁含量[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室，1996，13（3）：24-27.

[10] 徐寶才，丁霄霖.苦蕎黃酮的測定方法[J].無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，22（2）：98-101.

[11] 張 琪，劉慧靈，朱 瑞，等.苦蕎麥中總黃酮和蘆丁的含量測定方法的研究[J].食品科學(xué)，2003，24（7）：113-116.

[12] 鞏發(fā)永.涼山州苦蕎茶總黃酮含量對比及分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（18）：3811-3814.

[13] 李 欣，王步軍.兩種苦蕎黃酮提取方法的優(yōu)化及含量測定[J].食品科學(xué)，2010，31（6）：80-85.

[14] 歐陽平，張高勇，康保安，等.苦蕎麥黃酮類化合物提取的工藝參數(shù)優(yōu)化及數(shù)學(xué)模型研究[J].食品科學(xué)，2005，26（1）：107-111.

[15] 王雪波，鄧建華，胡建平.苦蕎泡酒的工藝條件[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2013（2）：30-32.

1.2.3 總黃酮含量的測定方法 吸取苦蕎泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液2 mL，1 mol/L 乙酸鉀溶液3 mL，用70%的甲醇溶液定容至10 mL，搖勻，放置30 min，在420 nm處測定其吸光值。依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出總黃酮的濃度值。

1.2.4 苦蕎泡酒中總黃酮含量的計(jì)算方法 苦蕎酒中總黃酮含量以蘆丁的質(zhì)量計(jì)，稀釋倍數(shù)數(shù)值以V表示，按公式計(jì)算。

w= C·V/1000

式中，C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出的總黃酮濃度，mg/mL；V為總稀釋倍數(shù)。

1.2.5 精密度試驗(yàn) 吸取浸泡酒1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，連續(xù)測定吸光度5次，計(jì)算出泡酒中黃酮含量。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸取浸泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液和3 mL 1 mol/L 乙酸鉀溶液，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min。分別在放置0、15、30、45、60、90 min時(shí)測定其吸光度，計(jì)算出泡酒中黃酮含量。

1.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 分別吸取浸泡酒1.0 mL 5份，于10 mL容量瓶中，加入 0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，并計(jì)算出苦蕎酒中黃酮含量。

1.2.8 回收率試驗(yàn) 分別吸取浸泡酒樣品1.0 mL 5份，置于10 mL容量瓶中，再準(zhǔn)確加入1 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 mg/mL），同樣0.1 mol/L 三氯化鋁溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸鉀溶液 3 mL，70%甲醇溶液定容，搖勻，靜置30 min，測定其吸光度，計(jì)算出浸泡酒中黃酮含量。

1.3 浸泡條件對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響

1.3.1 浸泡時(shí)間對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響 稱取2.0 g苦蕎茶浸泡于50 mL白酒中，分別于1、3、5、10、15、20、30 d吸取浸泡酒，利用上述方法測定黃酮含量，重復(fù)3次，考察浸泡時(shí)間對苦蕎酒中黃酮溶出量的影響。

1.3.2 固液比對苦蕎泡酒中黃酮含量的影響 稱取2.0 g苦蕎茶8份分別浸泡于10、20、30、40、50、60、70、80 mL的白酒中，浸泡10 d后過濾后即得不同濃度的苦蕎浸泡酒，測定黃酮的溶出率（黃酮溶出率（%）=100×測出的黃酮濃度×總體積/總質(zhì)量），重復(fù)3次，考察固液比對苦蕎浸泡酒中黃酮溶出率的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦蕎泡酒中黃酮測定方法的評價(jià)

2.1.1 精密度試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)“1.2.5”方法，測定結(jié)果見表1，同一樣品的總黃酮含量連續(xù)測定結(jié)果的RSD為3.30%，表明該方法測定苦蕎浸泡酒中黃酮含量時(shí)精密度良好。

2.1.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.6”方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表2， RSD為3.26%。苦蕎浸泡酒樣品溶液在90 min內(nèi)總黃酮量基本不變，說明苦蕎浸泡酒使用該方法測定黃酮量時(shí)穩(wěn)定性良好。

2.1.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.7”方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表3， RSD為1.81%。說明該測定方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量測定時(shí)重現(xiàn)性良好。

2.1.4 回收率試驗(yàn)結(jié)果 按“1.2.8”方法進(jìn)行試驗(yàn)，測定結(jié)果見表4，得到平均加標(biāo)回收率為97.79%，RSD為3.36%。該結(jié)果表明本方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量的測定具有可行性。

2.2 浸泡條件對苦蕎泡酒中黃酮含量影響的測定結(jié)果

2.2.1 不同浸泡時(shí)間苦蕎酒中黃酮含量的變化 由圖1可知，浸泡時(shí)間在1～10 d內(nèi)，隨著天數(shù)的增加，黃酮含量逐漸增加，直到浸泡10 d后，黃酮含量基本不再隨時(shí)間的增加而增加，說明此時(shí)苦蕎中黃酮已經(jīng)達(dá)到最大溶出率，因此可以推斷出苦蕎酒最佳浸泡時(shí)間為10 d。

2.2.2 不同固液比浸泡苦蕎酒中黃酮含量的變化 由圖2可知，浸泡苦蕎酒時(shí)，隨著白酒量的增加，黃酮溶出率增加，直至當(dāng)苦蕎和浸泡酒的比例達(dá)到1∶20時(shí)，白酒體積的增加對黃酮溶出率影響減小，黃酮含量增加值逐漸趨近為零，因此采用野蕎神清香型白酒（55%，V/V）浸泡苦蕎酒固液比為1∶20時(shí)為最佳。

3 小結(jié)與討論

本研究將苦蕎和苦蕎制品中黃酮含量的農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)方法應(yīng)用于測定苦蕎酒中黃酮的含量，通過精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和加標(biāo)回收率試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果表明，該方法應(yīng)用于苦蕎酒中黃酮含量的測定切實(shí)可行。同時(shí)從苦蕎酒的野蕎神清香型白酒（55%，V/V）浸泡時(shí)間和浸泡體積對浸泡酒中黃酮含量的影響分析得到，最佳浸泡時(shí)間為10 d，最佳固液比為1∶20，此結(jié)果和王雪波等[15]的結(jié)果基本一致。本研究結(jié)果可以為苦蕎酒的開發(fā)及生產(chǎn)企業(yè)提供參考，并對喜愛泡酒的公眾提供保健酒合適的炮制條件。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳慶富. 蕎麥屬植物科學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2012.

[2] 趙 鋼，唐 宇，馬 榮.苦蕎麥的營養(yǎng)和藥用價(jià)值及其開發(fā)應(yīng)用[J].農(nóng)牧產(chǎn)品開發(fā)，1999（7）：17-18.

[3] 姜忠麗，趙永進(jìn).苦蕎麥的營養(yǎng)成分及其保健功能[J].糧食與食品工業(yè)，2003（4）：33-35.

[4] 田秀紅，任 濤.苦蕎麥的營養(yǎng)保健作用與開發(fā)利用[J].中國食物與營養(yǎng)，2007（10）：44-46.

[5] 胡一冰，楊敬東，鄒 亮，等.苦蕎麥藥理研究及臨床應(yīng)用概況[J].成都大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006，25（4）：271-276.

[6] 黃興富，趙聲定，王繼良，等.蕎麥中黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J].中國民族民間醫(yī)藥，2010（5）：354-355.

[7] 張 政，周 源，王轉(zhuǎn)花，等苦蕎麥麩皮中類黃酮的抗氧化活性[J].藥物生物技術(shù)，2001，8（4）：217-220.

[8] 周建華，劉松艷，鞏發(fā)永.兩種分光光度法測定苦蕎中黃酮含量的比較[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（5）：247-251.

[9] 張宏志，管正學(xué)，田曉婭.分光光度法測定蕎麥中蘆丁含量[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室，1996，13（3）：24-27.

[10] 徐寶才，丁霄霖.苦蕎黃酮的測定方法[J].無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，22（2）：98-101.

[11] 張 琪，劉慧靈，朱 瑞，等.苦蕎麥中總黃酮和蘆丁的含量測定方法的研究[J].食品科學(xué)，2003，24（7）：113-116.

[12] 鞏發(fā)永.涼山州苦蕎茶總黃酮含量對比及分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（18）：3811-3814.

[13] 李 欣，王步軍.兩種苦蕎黃酮提取方法的優(yōu)化及含量測定[J].食品科學(xué)，2010，31（6）：80-85.

[14] 歐陽平，張高勇，康保安，等.苦蕎麥黃酮類化合物提取的工藝參數(shù)優(yōu)化及數(shù)學(xué)模型研究[J].食品科學(xué)，2005，26（1）：107-111.

[15] 王雪波，鄧建華，胡建平.苦蕎泡酒的工藝條件[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2013（2）：30-32.