CK14在低分化非小細胞肺癌中區分鱗癌和腺癌的意義

段楚驍 李夢晨 付圣靈 付向寧

根據世界衛生組織公布的資料，2012年癌癥在全球共造成約820萬人死亡，其中肺癌的死亡人數在所有癌癥中排名第一，約159萬。肺癌中約80%為非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。在對NSCLC進行組織學診斷時，應盡可能進一步劃分腺分化或鱗分化。因為腺癌常伴有表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)突變，可用表皮生長因子受體-酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-tyrosine kinase inhibitors, EGFR-TKI)或培美曲塞(pemetrexed)或貝代美珠(beracigumab)單抗治療[1-2]。培美曲塞對腺癌的治療比鱗癌效果更好，而鱗癌患者在接受貝代美珠單抗治療時，有引起致命大出血的危險。因此對于光鏡下無法明確鱗癌和腺癌的患者，應采用免疫組織化學的方法確定其分化傾向[3]。除了臨床上常用的CK5/6、P63和TTF-1，本研究顯示細胞角蛋白14(cytokeratin,CK14)對于肺鱗癌和腺癌的鑒別也具有較高價值。

國內外關于CK14在NSCLC中的表達及鑒別診斷價值的相關研究極少，文獻報道CK14在高增殖活性和淋巴轉移傾向的肺鱗癌中有著較高表達，因此CK14可作為肺鱗癌增殖活性和淋巴轉移潛能的一個評判指標，并且CK14的陽性程度與Ki67抗原標記指數呈正相關[4]。本研究采用手術切除的低分化NSCLC病理組織標本進行CK14免疫組化檢測，以探討CK14在鱗癌與腺癌鑒別診斷中的意義。

材料與方法

一、一般材料

收集華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院胸外科存檔的低分化肺鱗狀細胞癌和低分化肺腺癌病理標本共40例，其中鱗癌20例，腺癌20例，患者年齡44～78歲，平均57歲；20例腺癌中，男性14例，女性6例，年齡44～78歲，平均58歲；20例鱗癌中，男性19例，女性1例，年齡46～73歲，平均57歲。

二、免疫組織化學染色

采用免疫組化EnVision兩步法對標本進行處理。所用CK14抗體為即用型抗體，抗體及免疫組化檢測試劑盒均購于福州邁新公司。標本經10%中性福爾馬林液固定，常規脫水后經石蠟包埋，5 μm厚連續切片數張，取其中1張做HE染色，用于核實病理學診斷，剩余切片用于免疫組化染色。

三、結果判斷

經本院兩名經驗豐富的病理科醫師同時閱片審核。CK14陽性定位于細胞漿，結果判斷參考相關文獻[5]：腫瘤細胞陽性表達>70%為強陽性表達(++)，陽性表達>5%～10%且<70%為弱陽性表達(+)，陽性表達<5%～10%或未觀察到陽性腫瘤細胞為陰性表達(-)。

四、統計學方法

采用SPSS17.0進行統計學分析，所有資料均為計數資料。各組間的頻率比較采用行×列表資料Fisher χ2精確檢驗，P<0.01表示差異有統計學意義。并計算各指標的特異度、敏感度及準確度。

結 果

一、CK14在肺鱗癌中的表達

20例肺鱗癌手術切除標本中CK14強陽性表達者4例，弱陽性表達者9例，陰性表達者7例。CK14在肺鱗癌中的陽性率為65% 。CK14診斷鱗癌靈敏度為65%，特異度為90% ，陽性預測值為86.7%，陰性預測值為72.0%，準確度為77.5%。

二、CK14在肺腺癌中的表達

20例肺腺癌手術切除標本中CK14強陽性表達者0例，弱陽性表達者2例，陰性表達者18例。CK14在肺腺癌中的陽性率為10% 。

三、CK14在肺鱗癌和肺腺癌中陽性表達率的比較

將各組間的頻率比較采用行×列表資料Fisher χ2精確檢驗，Fisher精確檢驗χ253.976，P<0.01，具有統計學意義。CK14在肺鱗癌的陽性率明顯高于在肺腺癌中的陽性率，CK14在肺腺癌和肺鱗癌中的表達差異具有統計學意義。

四、CK14表達陽性率與淋巴結轉移度、病理分期、吸煙指數及分化程度的關系

本組所選的40例手術切除標本中，CK14表達陽性率與淋巴結轉移度、病理分期、吸煙指數無明顯相關性，可能與樣本量較小有關。

五、 CK14與其他免疫組化指標P63和TTF-1的關系

40例標本同時進行了P63和TTF-1免疫組化分析，結果見表1；同時進行了相關性分析，結果顯示CK14與P63、TTF-1均顯著相關(P<0.01)。本次研究顯示CK14診斷鱗癌的敏感度為65%，小于P63診斷鱗癌的敏感度95%。CK14診斷鱗癌的特異性為90%高于本研究中P63的80%。

表1 CK14與指標P63及TTF-1相關性統計

討 論

對于NSCLC患者，高分化的肺鱗癌和肺腺癌并不難鑒別，而低分化鱗癌和腺癌光鏡下有時難以區分。鱗癌和腺癌的區分對于傳統化療藥物價值不大，但隨著新的靶向治療和聯合治療方案的出現，這就要求有明確的病理組織學分類[6]。免疫組織化學檢測是明確NSCLC病理組織分型的一種有效手段[7]，本研究顯示CK14是區分低分化肺鱗癌和肺腺癌有效的免疫組化標志物。

CK14是一種相對分子量為50×103的細胞角蛋白，正常情況下表達于復層上皮細胞。已有研究顯示CK14陽性表達在食管鱗癌和乳腺導管內乳頭狀腫瘤中均有明確意義[8-9]。

本研究中40例標本均以HE染色結果作為明確鱗癌腺癌的金標準，結果顯示，CK14在肺鱗癌中的陽性率為65%，CK14在肺腺癌中的陽性率為10% 。CK14在肺腺癌和肺鱗癌中的表達差異具有統計學意義，Fisherχ2精確檢驗為53.976，P<0.01。薛麗燕等[10]的研究顯示，CK14在正常肺組織中均呈陰性表達，CK14在肺鱗癌中的陽性表達率為36.7%，在肺腺癌中的陽性表達率為13.3%，其對肺鱗癌診斷的靈敏度為36.7%，特異度為86.7% ，準確度為61.7%。

已有研究表明CK14是肺鱗癌增殖活性的一個指標，CK14陽性表達程度可能與肺鱗癌患者淋巴結轉移情況及病理分期相關[2]，但本研究結果并不支持這一觀點。對于形態學鏡檢分型存在不確定性的低分化非小細胞癌患者，可做CK14免疫組化檢測以進一步明確診斷，隨后可及時予以相對應的合適治療方案，以提高患者生存率。CK14陽性表達對于肺鱗狀細胞癌診斷的靈敏度為65%，特異度為90%，在鱗癌和腺癌的鑒別診斷中具有統計學意義，可用于臨床中低分化鱗癌與腺癌的鑒別診斷，輔助臨床治療的實施。本研究顯示CK14陽性率與患者吸煙指數、淋巴結轉移度以及病理分期等無明顯相關性，可能與本研究選取例數較少有關，下一步實驗可擴大研究的樣本量，進一步探討CK14在NSCLC中的意義。

參 考 文 獻

1 Yang CH, Shih JY, Chen KC, et al. Survival outeolne and pyedictors of gefitinib antitumor activity in east Asian chemonaive patients wits advanced non small cell lung cancer[J]. CANCER, 2006, 107(8): 1873-1882.

2 劉 穎, 魏紅艷, 戴獻利, 等. 培美曲塞治療老年肺腺癌臨床觀察[J]. 實用臨床醫藥雜志, 2011, 15(7)： 91-93.

3 鄭 姮, 段楚驍, 付圣靈, 等. 甲狀腺轉錄因子-1, 細胞角蛋白8/18, P63和HMW聯合檢測對肺鱗癌和肺腺癌鑒別診斷價值[J/CD]. 中華肺部疾病雜志： 電子版, 2014, 7(1): 56-60.

4 Tsubokawa F, Nishisaka T, Takeshima Y, et al. Heterogeneity of expression of cytokeratin subtypes in squamous cell carcinoma of the lung: With special reference to CK14 overexpression in cancer of high-proliferative and lymphogenous metastatic potential[J]. Pathology international, 2002, 52(4): 286-293.

5 Dejmek JS, Dejmek A. The reactivity to CK5/6 antibody in tumor cells from non-small cell lung cancers shed into pleural effusions predicts survival[J]. Oncology reports, 2006, 15(3): 583-587.

6 Schiller JH, Harrington D, Belani CP, et al. Comparison of four chemotherapy regimens for advanced non-small-cell lung cancer [J]. N Engl J Med, 2002, 346(2): 92-98.

7 李 慧, 陳艷樂, 常靜俠, 等. 腫瘤標志物在肺癌診斷、病理分型和臨床分期中的價值[J/CD]. 中華肺部疾病雜志： 電子版， 2013， 6(2)： 144-148.

8 薛麗燕, 宋詠梅, 童 彤, 等. 成束蛋白、細胞角蛋白14在食管鱗癌中的表達[J]. 中華醫學雜志, 2007, 87(35): 2494-2498.

9 Boecker W, Moll R, Dervan P, et al. Usual ductal hyperplasia of the breast is a committed stem (progenitor) cell lesion distinct from atypical ductal hyperplasia and ductal carcinoma in situ[J]. J Pathol, 2002, 198(4): 458-467.

10 薛麗燕, 鄒霜梅, 鄭 閃, 等. 成束蛋白和細胞角蛋白14在多種腫瘤組織中的表達及其鑒別診斷意義[J]. 中華腫瘤雜志, 2010, 32(11): 838-844.