癌-睪丸抗原SSX2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)研究

黎鵬 鄭慧玲 韋立軍

癌-睪丸抗原SSX2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)研究

黎鵬 鄭慧玲 韋立軍

目的 檢測癌-睪丸抗原SSX2在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)。方法 應(yīng)用RT-PCR技術(shù), 對40例肝細(xì)胞癌的癌組織及相應(yīng)癌旁組織進行SSX2基因的mRNA檢測。結(jié)果 肝細(xì)胞癌組織中SSX2 mRNA表達(dá)陽性率為27.5%(11/40), 而相應(yīng)的癌旁組織無SSX2 mRNA表達(dá)陽性率為0(0/40), 兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。統(tǒng)計學(xué)分析顯示SSX2表達(dá)與AFP陽性率、HbsAg陽性率、病理分級、肝細(xì)胞癌腫瘤大小、肝細(xì)胞癌是否伴有肝硬化的情況等相關(guān)的臨床指標(biāo)均無關(guān) (P>0.05)。結(jié)論 SSX2在HCC中呈低頻率的表達(dá)。

肝細(xì)胞癌；癌-睪丸抗原；SSX2；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

肝細(xì)胞癌 (hepatoc ellular carcinomas, HCC) 是我國常見的惡性腫瘤, 目前臨床治療已積累了豐富經(jīng)驗, 在腫瘤免疫治療方面也有了一定的進展。目前已發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)抗原較多, CT抗原(cancer testis antigen)是其中最有前景的一種。因為這類抗原只在睪丸及廣泛的腫瘤組織有表達(dá)。在CT抗原中有一種SSX抗原的多基因家族［1］。其中SSX2在HCC的表達(dá)研究目前已有報道［2,3］, 但在廣東地區(qū)未見報道, 為了了解其在廣東地區(qū)HCC的表達(dá)情況, 本研究應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測HCC及相應(yīng)癌旁組織, 初步探討廣東地區(qū)HCC中SSX2基因表達(dá)的意義。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本來源 40例HCC及相應(yīng)癌旁肝組織標(biāo)本取自附院, 所有病例均經(jīng)病理查實。標(biāo)本于外科手術(shù)切除后即液氮凍存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2 RT-PCR分析 總RNA提取采用異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法, cDNA質(zhì)量檢測方法見參考文獻(xiàn)［4］。取2 μg總RNA進行cDNA合成 (逆轉(zhuǎn)錄試劑盒, MBI公司), 取 1 μl cDNA進行RT-PCR檢測 (30 μl反應(yīng)體系), 設(shè)睪丸cDNA為陽性對照,不加模板為空白對照。基因序列,經(jīng)計算機輔助設(shè)計,使用Omiga 2軟件設(shè)計引物, SSX2引物(MWG Biotech公司)序列為：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense： TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G, 退火溫度為58℃, 擴增產(chǎn)物大小為434 bp。PCR反應(yīng)完畢進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用最新版本SPSS19.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果

2. 1 SSX2在HCC組織中低表達(dá) 癌旁肝組織SSX2表達(dá)陽性率為0(0/40), HCC組織SSX2表達(dá)陽性率為27.5%(11/40), P值<0.01。

2. 2 SSX2的表達(dá)與臨床指標(biāo)無相關(guān)關(guān)系 SSX2與AFP陽性率、HBsAg陽性率、病理分級、HCC腫瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情況等相關(guān)的臨床指標(biāo)均無關(guān) (P>0.05), 結(jié)果見表1。

3 討論

在SSX抗原基因家族中, 包括有SSX1~SSX5等5種基因, 其中SSX2屬于腫瘤基因, 可以使滑膜肉瘤患者發(fā)生t(X, 18)易位。SSX2最早在血清檢測法(SEREX)分析中發(fā)現(xiàn), 被命名為HOM-MEL-40蛋白, 進一步通過Northern Blot技術(shù)證實其為SSX2［5］。在以往的研究中, SSX2在HCC的mRNA表達(dá)率在30%~46.7%之間。Chen等［2］檢測30例肝細(xì)胞癌中SSX2呈較高的表達(dá)率為46.7%, 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低頻率的表達(dá)率在30%~35.7%之間。

本研究RT-PCR檢測結(jié)果為SSX2在HCC組織的mRNA表達(dá)率為27.5% (11/40), 相應(yīng)的癌旁肝組織均未檢測到SSX2的mRNA, 兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001), 提示SSX2在HCC組織的表達(dá)高于癌旁肝組織。對HCC的SSX2檢測與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系進行分析, 發(fā)現(xiàn)在6項指標(biāo)中, SSX2在HBsAg陽性和陰性的HCC組織表達(dá)率分別是22.58%和44.44%, 有表達(dá)差異, 但是這個差異并無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；在其余的5個指標(biāo)中, 在AFP陽性和陰性, Ⅰ~Ⅱ級和Ⅲ~Ⅳ級的病理分級, 直徑>5 cm和≤5 cm的腫瘤, 有無肝硬化及在患者>45歲和≤45歲的HCC組織中, SSX2的表達(dá)率都很接近, 統(tǒng)計學(xué)結(jié)果均無相關(guān)性(P>0.05)。本項目的研究結(jié)果顯示癌-睪丸抗原SSX2在廣東地區(qū)的HCC組織中表達(dá)率稍低于以往的研究結(jié)果, 是因為標(biāo)本例數(shù)的原因還是不同地域組織的原因, 有待于進一步的研究發(fā)現(xiàn)；而SSX2的表達(dá)情況與患者年齡、性別、病理分級、腫瘤大小、HBsAg及AFP的水平等無關(guān), 則與以往的報道一致。

［1］ Zahn M. Cancer/Testis (CT)Gene Database. Cancer Immunology online, 2006.

［2］ Chen C H, Chen G J, Lee H S, et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett, 2001, 164(2): 189.

［3］ 肖瑞雪,農(nóng)蔚霞,宋瓊,等.癌-睪丸抗原SSX基因在肝細(xì)胞癌中mRNA水平的表達(dá)及意義.中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2013, 10(05): 4-6.

［4］ Gure AO, Stockert E, Arden KC, et al . CT10: a new cancer-testis (CT) antigen homologous to CT7 and the MAGE family, identified by representational-difference analysis. Int J Cancer, 2000, 85(5):726.［5］ Smith HA, Cronk RJ, Lang JM, et al.Expression and immunotherapeutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs, 2011,71(21):6785-6795.

Expression of cancer-testis antigen SSX2 in hepatocellular carcinoma

LI Peng, ZHENG Hui-ling, WEI Li-jun.
Department of Histology and Embryology, Guangdong Medical College, Dongguan 523800, China

Objective Detection of cancer - testis antigen SSX2 expression in HCC tissues. Methods By RT-PCR technique, 40 cases of hepatocellular carcinoma and corresponding adjacent tissues SSX2 gene mRNA detection. Results HCC SSX2mRNA expression was 27.5% (11/40), while the corresponding adjacent tissues without SSX2mRNA expression was 0 (0/40), the difference between the two groups was significant (P<0.01), Statistical analysis showed clinically relevant indicators SSX2 expression and AFP-positive rate, HbsAg positive rate, histological grade, tumor size of hepatocellular carcinoma, hepatocellular carcinoma is associated with cirrhosis of the situation and so are unrelated (P> 0.05). Conclusion SSX2 expression in HCC is low frequency.

Hepatocellular carcinoma (HCC); Cancer-testis antigen; Synovial sarcoma X break-point2 (SSX2); RT-PCR

表1 SSX2表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系

廣東省廣東醫(yī)學(xué)院校級項目(項目編號：XQ0522)

523800 東莞, 廣東省廣東醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室(黎鵬),生物化學(xué)教研室(鄭慧玲),信息工程學(xué)院(韋立軍)