冠心病患者外周血樹突狀細(xì)胞前體的數(shù)量變化及意義

黎音亮 張峰 孫愛軍 葛均波

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院心內(nèi)科，上海 200032)

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是一種脂質(zhì)相關(guān)的慢性炎性免疫疾病。樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)廣泛分布于人體器官，是目前已知功能最強(qiáng)大的專職抗原提呈細(xì)胞，對(duì)炎性免疫舉足輕重。根據(jù)表型及功能不同，外周血DCs前體可分為兩種亞型：促使Th1免疫應(yīng)答的髓系DCs(myeloid DCs，mDCs)和促使Th2免疫應(yīng)答的淋巴系DCs(plasmacytoid DCs，pDCs)。無論在動(dòng)脈粥樣硬化早期病變還是晚期的復(fù)合斑塊中，DCs的聚集都明顯增強(qiáng)，而其在正常血管組織中卻分布很少[1]。有研究[2]表明，冠心病患者血液循環(huán)中DCs的絕對(duì)數(shù)量高于健康對(duì)照組，其中mDCs的絕對(duì)數(shù)量、百分比及 mDC/pDC比值均高于對(duì)照組，但不同亞型冠心病的DCs表達(dá)水平、功能和作用目前仍未闡明。

本研究參考了2012年美國(guó)不穩(wěn)定心絞痛/非ST段抬高心肌梗死管理指南和2013年穩(wěn)定性冠心病新定義。這些指南與定義將冠心病患者分為不同組[穩(wěn)定型冠心病(stable coronary artery disease，SCAD)、不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina，UA)、非ST段抬高型心肌梗死(non-ST-elevation myocardial infarction，NSTEMI)、ST段抬高型心肌梗死(ST-elevation myocardial infarction，STEMI)]。

1 資料與方法

1.1 入選與分組 選取我院心內(nèi)科2008年1月—2008年3月住院疑似冠心病患者81例，入院后行冠脈造影。以冠狀動(dòng)脈直徑狹窄≥50％為有意義。按冠脈造影結(jié)果分組：(1)陰性組(N組)：冠脈狹窄<50％；(2)穩(wěn)定型冠心病組(SCAD組)：冠脈造影證實(shí)至少1支或以上冠脈狹窄，胸痛1個(gè)月以上，發(fā)作誘因、疼痛強(qiáng)度、疼痛時(shí)間、發(fā)作次數(shù)、硝酸甘油服用量和起效時(shí)間穩(wěn)定不變者；(3)不穩(wěn)定型心絞痛組(UA組)：冠脈造影證實(shí)至少1支或以上冠脈狹窄，1個(gè)月內(nèi)心絞痛，或在相對(duì)穩(wěn)定的勞力相關(guān)心絞痛基礎(chǔ)上出現(xiàn)的逐漸增強(qiáng)、誘發(fā)閾值降低的心絞痛，或在休息時(shí)發(fā)作的心絞痛。肌鈣蛋白和血清心肌酶陰性；(4)非ST段抬高型心肌梗死組(NSTEMI組)：冠脈造影證實(shí)至少1支或以上冠脈狹窄，臨床癥狀與UA組相似，但心肌鈣蛋白T(cTnT)或血清肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)陽(yáng)性，且心電圖不出現(xiàn)典型ST段抬高改變；(5)ST段抬高型心肌梗死組(STEMI組)：冠脈造影證實(shí)至少1支或以上冠脈狹窄，cTnT、血清心肌酶CK-MB陽(yáng)性，心電圖出現(xiàn)典型ST段抬高改變。

1.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)及結(jié)果判定 所有入選者在入院后24 h內(nèi)抽取靜脈血3 mL，NSTEMI和STEMI患者于入院7 d后再次采血。應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞含量、TC、TG、LDL-C、HDL-C等。采用流式細(xì)胞四色分析法檢測(cè)DCs及其亞型的比例并計(jì)算每毫升絕對(duì)數(shù)。

所有對(duì)象采血2 h內(nèi)進(jìn)行全血樣本熒光抗體染色，實(shí)驗(yàn)管由PE標(biāo)志的CD1c 抗體定義mDC1s，F(xiàn)ITC 標(biāo)志的CD303抗體定義pDCs，APC 標(biāo)志的CD141抗體定義mDC2s，PE-Cy5標(biāo)志的CD14和CD19抗體定義單核細(xì)胞和B細(xì)胞；對(duì)照管加入鼠同型對(duì)照單克隆抗體。加入紅細(xì)胞裂解液，離心后加入固定液和終止死細(xì)胞標(biāo)志物，24 h內(nèi)用FACS流式細(xì)胞儀檢測(cè)。采用CELLQuest軟件分析結(jié)果，圈定外周血pDCs、mDC1s和mDC2s。

2 結(jié) 果

2.1 一般資料比較 研究入選情況：N組18例、SCAD組17例、UA組15例、NSTEMI組15例、STEMI組16例。5組對(duì)象的年齡、性別、危險(xiǎn)因素(高血壓、糖尿病、吸煙、高脂血癥)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 冠心病患者外周循環(huán)DCs前體及亞型表達(dá)水平的分析 5組外周循環(huán)DCs及亞型mDCs、mDC1s、mDC2s、pDCs占外周循環(huán)白細(xì)胞的比例和在每毫升外周血中的絕對(duì)數(shù)見表1，5組外周循環(huán)mDCs與pDCs比值見表1。

表1 各組外周血DCs及亞型的比例和絕對(duì)數(shù)

2.3 心肌梗死患者急性期外周循環(huán)DCs前體及亞型的變化 NSTEMI和STEMI患者為急性心肌梗死患者，入院1 d內(nèi)和7 d后外周循環(huán)DCs及其亞型mDCs、mDC1s、mDC2s、pDCs占外周循環(huán)白細(xì)胞的比例和在每毫升外周血中的絕對(duì)數(shù)見表2。

表2 心肌梗死患者急性期外周血DCs及亞型比例和絕對(duì)數(shù)

3 討 論

本研究將冠心病患者分為4個(gè)組，反映動(dòng)脈粥樣硬化斑塊：從穩(wěn)定-不穩(wěn)定-破裂-血栓形成-血管完全閉塞的過程。以流式細(xì)胞儀四色分析法計(jì)數(shù)不同亞組冠心病患者外周循環(huán)DCs前體及亞型的比例及絕對(duì)數(shù)，探討DCs在冠心病發(fā)展中的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，與N組相比，UA患者外周循環(huán)DCs明顯增多，可能原因有：各種冠心病危險(xiǎn)因素影響DCs的數(shù)量和功能；高血糖會(huì)顯著增強(qiáng)DCs內(nèi)活性氧的水平，促進(jìn)DCs成熟，使DCs激活T淋巴細(xì)胞的能力明顯增強(qiáng)[3]；經(jīng)煙堿處理的DCs促淋巴細(xì)胞增殖的作用加強(qiáng)，T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力提高而促進(jìn)粒細(xì)胞和CD34+祖細(xì)胞從骨髓釋放到血液，增加了mDCs的動(dòng)員，導(dǎo)致DCs數(shù)量增加[4]。與N組比較，UA患者的危險(xiǎn)因素和炎性免疫增強(qiáng)，DCs數(shù)量增多，從而使DCs刺激T細(xì)胞及產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力增強(qiáng)。

本研究發(fā)現(xiàn)，與N組相比，UA患者外周循環(huán)mDCs和mDC1s明顯增多，pDCs無變化。動(dòng)脈粥樣硬化早期即有活化T細(xì)胞浸潤(rùn)，以CD4+T細(xì)胞為主，Th1多于Th2。mDCs分泌大量的IL-12，促使發(fā)生Th1免疫應(yīng)答，參與了斑塊的不穩(wěn)定過程[1]。本研究解釋了冠心病中Th1和IL-12增多的可能原因，即mDCs可能參與Th1應(yīng)答增強(qiáng)。

本研究還發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者入院時(shí)DCs及其亞型明顯減少，7 d后外周循環(huán)DCs、mDCs、mDC1s、pDCs較入院時(shí)均明顯升高，可能原因如下：在冠心病急性期，血液循環(huán)中的大量DCs遷移到粥樣斑塊中；DCs可能流入淋巴，進(jìn)入?yún)^(qū)域淋巴結(jié)，進(jìn)而激活T細(xì)胞；DCs亦有可能遷移到壞死心肌中，參與壞死心肌的炎性免疫，造成外周循環(huán)中DCs數(shù)量的下降[5]。

從SCAD到急性心肌梗死，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊經(jīng)歷了從穩(wěn)定到破裂的過程，外周血DCs的比例和數(shù)量也經(jīng)歷了穩(wěn)定-增多-驟然下降的過程，間接反映了DCs可能參與斑塊的發(fā)生發(fā)展及破裂過程。今后應(yīng)進(jìn)一步觀察大樣本不同類型冠心病患者外周血DCs及其亞型的數(shù)量及比例，同時(shí)應(yīng)從DCs的功能方面探索動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制。

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