保健酒中總皂苷含量測定方法研究

福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122

保健酒中總皂苷含量測定方法研究

徐媛白少偉龐文生胡娟*

福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122

利用Amberlite-XAD-2大孔樹脂純化樣品，以人參皂苷Re為對照品，采用香草醛-高氯酸比色法檢測保健酒中總皂苷含量。三個批次的保健酒樣品中總皂苷平均含量為53.5mg/100mL。

保健酒；香草醛-高氯酸比色法；總皂苷含量

總皂苷被認(rèn)為是保健食品中的主要功效成分，廣泛存在于多種藥食兩用、保健中藥和保健食品當(dāng)中，具有抗疲勞、促進(jìn)記憶、保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用。本保健酒以多味中藥為主要原料，含有總皂苷和多糖等多種功效成分。依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范(2003版)》[1]中保健食品總皂苷的測定方法，利用Amberlite-XAD-2大孔樹脂對樣品進(jìn)行純化，以人參皂苷Re為對照品，采用香草醛-高氯酸比色法檢測總皂苷含量。

1 儀器與材料

UV-1800紫外可見分光光度計(上海美譜達(dá)儀器有限公司)，數(shù)顯恒溫水浴鍋，10ml注射器，離心機，電子天平，水浴鍋。

受試樣品(本課題組自制)；人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品鑒定所)，香草醛-冰乙酸溶液(稱取5.0g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml)，Amberlite-XAD-2大孔樹脂(Sigma化學(xué)公司，U.S.A.)，中性氧化鋁(層析用，100-200目)，正丁醇，乙醇，高氯酸，冰乙酸等試劑均為分析純；

2 試驗方法

2.1 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精確稱取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品0.020g，用甲醇溶解并定容10.0ml，即每毫升含人參皂苷Re 2.0mg。

2.2 受試樣品的處理 吸取1.0mL保健酒試樣放蒸發(fā)皿中60℃水浴揮干，用水浴溶解殘渣，用此液進(jìn)行柱層析。

2.3 樣品柱層析

2.3.1 層析柱的制備 用10ml注射器作層析管，內(nèi)裝3cm Amberlite-XAD-2大孔樹脂，上加1cm中性氧化鋁。先用25ml 70%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25ml水洗柱，待用。

2.3.2 試樣總皂苷的吸附及洗脫 精確吸取1.0ml已處理好的試樣溶液(見2.2)，注入已處理的注射器內(nèi)，待試樣滲透柱內(nèi)后，用25ml水洗柱，棄去洗脫液，再用25ml 70%乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60℃水浴揮干。以此作顯色用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)管的制備 吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液(2.0mg/ml)100μl于蒸發(fā)皿中，水浴揮干(低于60℃)，以下操作從“2.3層析柱…”起，與試樣相同。待測吸收度值。

2.5 皂苷的顯色與比色測定 在上述已揮干的接收液中準(zhǔn)確加入0.2ml 5%香草醛冰乙酸溶液，使殘渣都溶解，再加0.8ml高氯酸，混勻后移入5ml帶塞刻度離心管中，60℃水浴上加熱10min，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0ml，搖勻后，以1cm比色池于560nm波長處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測定。

2.6 計算

式中X：試樣中總皂苷量(以總?cè)藚⒃碥誖e計，計算結(jié)果保留二位有效數(shù)字)，g/100g(ml)；A1—被測液的吸光度值；A2—標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值；C—標(biāo)準(zhǔn)管人參皂苷Re的量，μg；V—試樣稀釋體積，ml；m—試樣質(zhì)量，g(ml)。

3 結(jié)果與討論

3.1 測定結(jié)果 見表1。

表1 總皂苷含量測定結(jié)果

3.2 討論 層析柱中的中性氧化鋁和大孔吸附樹脂分別屬于非極性無機和有機吸附劑，大孔樹脂選擇性強，理化性質(zhì)穩(wěn)定，吸附量大，對皂苷的吸附力強，而對其他物質(zhì)吸附力差，易被水洗滌[2-3]。保證大孔樹脂分離純化效果。

采用香草醛-高氯酸比色法對甘草皂苷進(jìn)行定量測定時，顯色反應(yīng)過程中吸光度隨加熱時間和溫度的改變而變化，測定時應(yīng)嚴(yán)格控制測定時間，規(guī)范操作步驟[4]；樣品從60℃水浴中取出后立即用冰水浴冷卻，精密加入醋酸，確保搖勻后進(jìn)行測定，從而保證檢測結(jié)果的高準(zhǔn)確度。另外，所用的香草醛-冰乙酸溶液要在用時現(xiàn)配，否則空白值的顏色會加深，影響測定的結(jié)果。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部．保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范[S]．2003，223-224．

[2] Wu Jianyong，Lin Lidong，Chau Foo-Tim．Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseneg roots and cultured ginseng cells [J]．Gltrason Sonochem，2001，8(4)：347-352．

[3] Glebko L I，Krasovskaya N P，Pokushalova T V．Standardization of ginseng root and tincture quality with respect to the total content of ginsenosides [J]．Pharm Chem J.，2004，38(4)：191-194．

[4] 蘭霞，王洪新．比色法測定甘草中總皂苷的含量[J]．時珍國醫(yī)國藥，2007，18(4)：886-887．

國家科技部十二五支撐計劃(2011BRI01B06)，福建省中藥臨床前研究與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心平臺(2009Y2003)支撐。

徐媛，女，在讀碩士研究生，從事中藥活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：542980972@qq.com。

胡娟，E-mail：huj@fjtcm.edu.cn。

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1007-8517(2014)06-0030-01

2014.01.19)