HPLC法測定蒙成藥寧心丸中膽紅素的含量

內蒙古自治區通遼市食品藥品檢驗所，內蒙古 通遼 028000

HPLC法測定蒙成藥寧心丸中膽紅素的含量

包保全包長龍

內蒙古自治區通遼市食品藥品檢驗所，內蒙古 通遼 028000

目的用高效液相色譜法測定吉如很-10(寧心丸)中膽紅素的含量。方法采用Shim-pack VP-ODS C18色譜柱(150×4.6mm，5μm)，以甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液(86∶10∶4)為流動相，流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長為450nm；進樣量：10μl。結果膽紅素在0.01524～0.2313 μg范圍內呈良好的線性關系，r= 0.9996。精密度試驗RSD=0.81%，重復性試驗RSD=0.21%，平均回收率為99.1%，RSD=1.2%(n=6)。結論方法簡便、準確、穩定性、重現性較好，可用于該制劑的質量控制。

吉如很-10(寧心丸)；膽紅素；高效液相色譜法

吉如很-10(寧心丸)由肉豆蔻、石膏、兔心、冰片、麥冬、阿魏、人工牛黃、檀香、苦參、朱砂等十味藥材組成[1]。具有調節氣血不和，改善心腦供血，加強心肌心縮。用于心肌病，高心病，心腦供血不足，植物神經紊亂，尤其是冠心病及各種心律失常有良好的療效。本試驗對吉如很-10(寧心丸)中人工牛黃所含的有效成分膽紅素進行含量測定方法學考察[2]，得到較滿意的準確度和精密度試驗結果，說明本試驗方法是可行的，可作為吉如很-10(寧心丸)的質量控制方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 島津LC-10A型高效液相色譜儀(日本)，SPD-VP紫外檢測器，CLASS-VP色譜工作站，TP-300超聲波清洗機。

1.2 試藥 膽紅素(批號：100077-200805，中國藥品生物制品檢定所)； 樣品：吉如很-10(批號: 20081003、20090217、20090509，內蒙古通遼市科左中旗蒙醫院提)。甲醇(色譜純，天津天大化學試劑廠)；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 采用Shim-pack VP-ODS C18色譜柱(150×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-乙腈-1%冰醋酸溶液(86∶10∶4)；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測波長為450nm；進樣量：10μl。理論塔板數：N≥2000；拖尾因子：1.10。檢測過程中系統穩定。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取膽紅素對照品15.42mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，即得(每1ml含膽紅素15.42μg)。

2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取1.0g，精密稱定，置25ml容量瓶中，加三氯甲烷15 ml，進行超聲提取(功率120W，頻率40kHz)10min，取出，放冷，加甲醇5ml，加三氯甲烷至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

2.4 陰性對照試驗 取按處方量并以相同工藝制備的陰性對照品(缺人工牛黃)，操作同樣品分析項下方法，測得結果為：陰性對照品色譜圖中在與膽紅素對照品色譜相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明其它組分對吉如很-10中膽紅素的測定無干擾。

2.5 線性關系的考察 精密吸取對照品溶液1、3、5、7、9、10、15μl進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對濃度進行回歸分析，結果膽紅素在0.01524～0.2313 μg范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為：y=2.3E-07x + 0.002061，r=0.9996。

2.6 精密度試驗 精密量取膽紅素對照品溶液(0.01542mg /ml)10μl，連續進樣5次，測定膽紅素峰面積值，結果峰面積平均值639133，RSD為0.81%。

2.7 穩定性試驗 取同一份供試品(批號20081003)溶液，間隔0、3、6、12、15、19小時、精密量取10μl注入色譜儀，測定，記錄峰面積值，結果平均峰面積842207.7，RSD為0.1%，表明供試品溶液在19小時內穩定性良好。

2.8 重復性試驗 取同一批號樣品(批號：20090217)6份，研細，精密稱取約1g，按上述色譜條件測定，測定每份樣品含量。按外標法計算含量。平均含量為0.451 RSD為0.21%，表明本試驗重現性良好，結果見表1。

表1 膽紅素含量重現性試驗結果

2.9 加樣回收試驗 取供試品(含量0.452mg/g)6份，各約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，各精密加入用三氯甲烷配制的膽紅素對照品溶液(濃度為0.01542mg/ml)1ml，再各精密加入三氯甲烷20ml，分別按含量測定項下的方法操作，測定每份供試品含量，計算回收率，結果平均回收率為99.1%，RSD為1.2%，結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果

表3 樣品膽紅素的含量 (n=3)

2.10 樣品分析 按上述色譜條件,取三批樣品(批號分別為20081003、20090217、20090509)，照供試品溶液的制備方法，各進樣各10μl，每批試樣平行檢測三次，以外標法計算含量。該條件下膽紅素的保留時間為16.04min。供試品含量測定結果見表3。

3 討論

3.1 提取條件的選擇 分別考察了不同溶劑加入量和不同超聲時間的提取方法，并考察了提取溶劑加入量(25、50、100ml)，提取時間(5、10、15min)。結果得到最有化的提取方法為加三氯甲烷25ml，超聲處理10min。超聲時間過長或溶劑過熱使膽紅素不穩定，影響測定結果。

3.2 本法簡便、靈敏、準確、專屬性強，故認為可作控制吉如很-10(寧心丸)的檢測方法。

[1]內蒙古食品藥品監督管理局.內蒙古蒙藥制劑規范(第一冊)[S].內蒙古：內蒙古人民出版社，2007：168.

[2]國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

包保全,E-mail：myjh2013@126.com。

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1007-8517(2014)13-0006-02

2014.04.27)