四君子湯對自然衰老小鼠腦組織抗氧化能力的影響

1.河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071000；2.河北省保定市兒童醫(yī)院，河北 保定 071000；3.河北省保定市第三中學(xué)，河北 保定 0710000

四君子湯對自然衰老小鼠腦組織抗氧化能力的影響

王懷穎1范林林2胡亞南2孟德光2聶雷2沈莉3王爍3

1.河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071000；2.河北省保定市兒童醫(yī)院，河北 保定 071000；3.河北省保定市第三中學(xué)，河北 保定 0710000

目的研究四君子湯對自然衰老小鼠腦組織抗氧化能力的影響。方法雄性KM小鼠分為青齡對照組、老齡對照組和四君子湯組，分光光度法檢測小鼠腦組織SOD活性、MDA水平的變化。結(jié)果與青齡對照組比較，老齡對照組小鼠腦組織SOD活性降低，MDA水平升高。與老齡對照組相比，四君子湯組小鼠腦組織SOD活性升高，MDA水平下降。結(jié)論四君子湯可通過增強(qiáng)衰老小鼠腦組織抗氧化能力，達(dá)到延緩衰老的作用。

四君子湯；衰老；腦組織；抗氧化能力

氧化應(yīng)激、氧化損傷的積累和抗氧化能力下降導(dǎo)致衰老發(fā)生[1，2]，而四君子湯能拮抗自由基損傷，改善內(nèi)分泌功能，調(diào)節(jié)能量代謝[3]。本試驗(yàn)以自然衰老小鼠為模型，觀察四君子湯對腦組織抗氧化能力的影響，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物：清潔級雄性KM小鼠，購自河北省實(shí)驗(yàn)動物中心(合格證號804064)。

1.2 試劑：SOD測定試劑盒、MDA測定試劑盒，購自南京建成生物工程公司。

1.3 儀器：電子天平SL20001N，上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司；低溫高速離心機(jī)X-22R，美國貝克曼；722 S 分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；RF-5301PC熒光分光光度計(jì)，日本島津。

2 方法

2.1 四君子湯制備 黨參、白術(shù)(炒)、茯苓、炙甘草，按2∶2∶2∶1組成，剪碎、浸泡、水煎，收集濾液，濾渣再次加水煎煮，合并兩次濾液，濃縮至2g/ml，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 動物分組 KM小鼠分為青齡對照組(3月齡)、老齡對照組(12月齡)和四君子湯組(12月齡)。四君子湯組每日灌胃四君子湯12g·kg-1，其余兩組灌胃等量蒸餾水，共8周。8周后，斷頭處死動物，冰臺上剝離一側(cè)腦組織-70℃冰箱保存，用于生化指標(biāo)測定。

2.3 腦組織生化指標(biāo)測定 取-70℃冰箱保存腦組織加入適量裂解液進(jìn)行組織勻漿。4℃，12000rpm離心20min，取上清液測定腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)濃度。具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。蛋白定量用考馬斯亮藍(lán)法。

3 結(jié)果

3.1 四君子湯對小鼠腦組織SOD活性的影響 與青齡對照組比較，老齡對照組小鼠腦組織SOD活性明顯降低(P<0.01)。四君子湯組小鼠腦組織SOD活性升高，高于老齡對照組，有顯著性差異(P<0.05)(表1)。

3.2 四君子湯對衰老小鼠腦組織MDA水平的影響 與青齡對照組比較，老齡對照組小鼠腦組織MDA水平增高，有顯著性差異(P<0.01)。與老齡對照組相比，四君子湯組小鼠腦組織MDA水平下降，差異顯著(P<0.05)(表1)。

表1 不同組別小鼠腦組織SOD活性、MDA水平的變化

注：與老齡對照組比較，△P<0.05；與青齡對照組比較，*P<0.01。

4 討 論

衰老的確切機(jī)制目前還不明確，存在自由基、端粒、細(xì)胞凋亡等多種學(xué)說，其中自由基學(xué)說認(rèn)為氧化損傷的積累和氧化防御機(jī)能的下降在衰老過程中起關(guān)鍵作用[4]。SOD是機(jī)體氧化防御機(jī)制的重要組成成分[5]，MDA則可客觀反映機(jī)體組織細(xì)胞脂質(zhì)過氧化程度和自由基產(chǎn)生情況。

四君子湯出自《太平惠民和劑局方》，是中醫(yī)學(xué)健脾益氣的代表方劑，該方可明顯改善衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶功能[6]，并且可增強(qiáng)衰老大鼠免疫功能[7]。小鼠增齡過程中氧化應(yīng)激是腦老化的首要影響因素，氧化損傷的積累和抗氧化能力下降導(dǎo)致衰老發(fā)生[1,2]。而氧自由基損傷作用是神經(jīng)細(xì)胞凋亡發(fā)生的重要機(jī)制之一[8]。老齡小鼠腦組織SOD活性下降，氧化產(chǎn)物MDA濃度增加，說明腦組織抗氧化能力下降。本試驗(yàn)證實(shí)四君子湯可提高衰老小鼠腦組織SOD活性，降低MDA水平，說明四君子湯可增強(qiáng)腦組織抗氧化能力。這提示我們，四君子湯可通過清除自由基延緩衰老。

[1]Klartinez E,Navarro A,Ordonez C,et al.Oxidative stress induces apolipoprotein D overexpression in hippocampus during aging and Alzheimer’s disease[J].J Alzheimers Dis,2013,36(1):129-144.

[2]Haddadi M,Jahromi SR, Sagar BK,et al.Brain aging, memory impairment and oxidative stress: a study in Drosophia melanogaster[J].Behav Brain Res,2014,259(1):60-69.

[3]楊靖,詹向紅,孫曄,等.四君子湯對D-半乳糖衰老模型小鼠心、肝、腦組織MDA含量及端粒酶活性的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2005,25(6):531-533.

[4]Perez VI, Bokov A, Van Remmen H, et al. Is the oxidative stress theory of aging dead[J]. Biochim Biophys Acta,2009,1790(10):1005-1014.

[5]Muid KA, Karakaya HC, Koc A. Absence of superoxide dismutase activity causes nuclear DNA fragmentation during the aging process[J]. Biochem Biophys Res Commun,2014,444(2):260-263.[6]李冰,方文娟,孟輝.四君子湯對D-半乳糖誘致衰老小鼠腦抗氧化能力和線粒體DNA損傷的影響[J].北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2009,10(3):218-222.

[7]吳正平,周智興,雪波.四君子湯對衰老模型大鼠免疫功能的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2010,16(7):128-129.

[8]黃俊杰,王彩冰,黃麗娟,等.maFGF對衰老大鼠腦組織SOD、MDA和羥自由基及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,2011,28(7):601-604.

保定市科技攻關(guān)項(xiàng)目(06F04-3)，河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃項(xiàng)目(2007101)。

王懷穎(1973-)，女，碩士，副教授，主要從事腦衰老機(jī)制的研究。

R285.5

A

1007-8517(2014)20-0017-01

2014.09.11)