云南省高EGCG茶樹品種的篩選

尚衛瓊，梁名志，田易萍，徐丕忠，李朝云

（1.云南省農業科學院茶葉研究所，云南 勐海 666201；2.云南省茶樹種質資源創新與配套栽培技術工程研究中心，云南 勐海 666201）

兒茶素是茶葉中的主要化學成分之一，可分為脂型兒茶素（EGCG、ECG、GCG、CG等）和非脂型兒茶素（EC、EGC、C、GC等）。從茶葉中分離得到的兒茶素類單體EGCG（表沒食子兒茶素沒食子酸脂）是茶多酚生物活性的主要成份，其含量在兒茶素類物質中最高[1]。許多研究指出，EGCG的含量不僅影響茶湯的滋味，對茶葉的品質也起著決定作用。例如綠茶中EGCG的含量主占綠茶毛重的9%～13%[2-3]。EGCG具有強氧化性，能夠清除自由基，延緩衰老，降低血壓和血脂，對肝臟和腎臟有保護功能，被運用于癌癥和一些特殊疾病的預防和治療過程中，成效顯著[4]。陳科等[5]研究了EGCG在抗腫瘤方面的作用機制，結果表明，EGCG能夠阻止和抑制腫瘤的發展，對癌癥有一定的抑制效應。李哲等[6]通過研究證實了EGCG在清除自由基和對肝臟、腎臟的保護的能力。隨著人們對EGCG保健功能的認識和在綠茶中的活性效應[7]，EGCG的生物效應和在茶葉中的重要性，已經成為茶葉市場上的一個重要價格指標，高EGCG茶在國內外市場上很受歡迎。

EGCG不能通過人工合成獲得，茶葉是EGCG唯一的來源。目前，國內外對EGCG的研究主要集中在其分離純化、藥用功能及醫學臨床上。EGCG的分離制備方法主要有柱色譜法、高效液相色譜法和逆流色譜法。范小兵等[8-10]采用不同的柱填充劑研究了利用柱色譜法分離制備EGCG單體含量，結果表明不同色譜柱分離得到的EGCG含量由高到低排列依次為：葡聚糖凝膠柱＞大孔樹脂柱＞硅膠柱＞聚酰胺柱。

云南省作為茶葉的發源地，植茶歷史悠久，自然條件優越，具有豐富的茶樹種質資源，對茶樹的遺傳育種提供了豐富的物質基礎，而在目前認定的云南省茶樹品種中，國家級和省級品種的EGCG優異性并不突出[11-12]。因此，運用茶樹新品系篩選高EGCG含量的優質資源有較大的應用前景。試驗旨在研究高EGCG茶樹的遺傳規律，以便為高EGCG茶品種的選育以及EGCG的相關研究提供優質材料。

1 材料與方法

1.1 供試材料

蒲川大折浪茶等15份種質創新材料，通過單株選育和雜交育種育成，來源于云南省農業科學院茶葉研究所品比試驗茶園。

1.2 試驗方法

采摘供試材料的春茶一芽二葉鮮葉，經100℃微波水蒸氣殺青，于80℃烘箱中烘干制成蒸青固樣，再進行EGCG、兒茶素總量、四項常規等測定。HPLC參照ISO 14502.1中的方法測定，水浸出物、茶多酚、游離氨基酸和咖啡堿分別參照GB/T 8305、GB/T 8313、GB/T 8314和GB/T 8312中的方法測定[13]。對篩選出的特色新品系開展單株產量測定，并對由其制作的紅碎茶樣進行感官審評。

2 結果與分析

2.1 茶樹品種的EGCG含量

從圖1中可以看出，不同茶樹品種間EGCG含量有較大差異，含量在4.40%～9.51%之間波動，平均值為7.542%。其中，EGCG含量最低的是12號品種，而EGCG含量最高的是6號品種，最高含量是最低含量的2.16倍。EGCG含量在4.00%～6.00%范圍內的有4個品種（26.7%），分別是10、12、13和14號品種；EGCG含量在6.00%～8.00%范圍內的有5個（33.3%），分別是4、8、9、11和15號品種；EGCG含量在8.00%～10.00%范圍內的有6個（40%），分別是1、2、3、5、6和7號品種。而EGCG含量大于9.00%的材料有3個，分別是1（9.10%）、3（9.12%）和6（9.51%）。

圖1 15個茶樹品種的EGCG含量Fig.1 The epigallocatechin gallate（EGCG）content in new shoots of 15 tea bush varieties

2.2 茶樹品種其他主要成分含量

由表1可知，15個茶樹品種的水浸出物含量變化范圍在45.6%～51.8%之間，平均含量為48.8%，含量最高的是13號品種（51.8%），其次是8號品種（50.2%）和15號品種（50.2%），含量最低的是1號品種（45.6%）；茶多酚含量變化范圍為25.5%～38.49%之間，平均含量為33.3%，含量最高的是4號品種（38.49%），其次是13號品種（38.0%），含量最低的是10號品種（25.5%）；咖啡堿含量變化范圍在2.8%～4.7%之間，平均含量為3.4%，含量最低的是11號品種（2.8%），其次是9號品種（2.9%），含量最高的是7號品種（4.7%）；氨基酸含量變化范圍在2.1%～5.1%之間，平均含量為3.3%，含量最高的是3號品種（5.1%）和10號品種（5.1%），其次是12號品種（4.2%），含量最低的是7號品種（2.1%）。而3號品種的EGCG含量也較高，既是高EGCG材料也是高茶多酚材料。

2.3 高EGCG茶樹品種的鮮葉產量及其所制紅茶的感官評價

表1 15個茶樹品種的主要生化成分含量 （%）Table 1 Main biochemical component contents of 15 tea bush varieties

由2.1可知，編號1、3和6的品種的EGCG含量較高，其鮮葉產量分別為199.32、86.70和135.20 kg/667m2；其中1號品種的產量約為3號品種的2.3倍，屬于高產品系，6號品種的產量約為3號品種的1.6倍，產量也較高。

以高EGCG含量品種的茶葉為原料制作紅茶，結果表明：3號品種的感官評價得分最高，為90.3分，表現出外形緊實棕潤、湯色紅艷、香氣花香顯、滋味濃強、葉底紅艷的特點；其次是1號品種，感官評價得88.9分，表現出外形緊實棕潤、湯色紅亮、香氣較高、滋味濃較爽、葉底較紅的特點；第三是6號品種，得88.1分，表現出外形顆粒較緊結、勻凈、尚烏，湯色較紅亮，香氣高鮮、有甜香、花香顯，滋味濃，葉底軟、勻、紅亮的特點。

3號品種是高茶多酚和高EGCG材料，所以其在制作紅茶方面占有較大優勢。而1號和6號品種憑其高含量的EGCG成分，制出的紅茶品質也較為優異。

3 結論與討論

EGCG是茶多酚的主要組成成分之一，占茶多酚總量的40%左右。茶葉新梢中的EGCG含量通常在6%～13%之間，根據國內外茶葉市場的要求，鄭紅發[14]等將EGCG含量大于10%的茶樹品種稱為高EGCG茶樹品種。而在云南省茶區的茶樹品種中，前人篩選到的EGCG含量超過10%的茶樹品種鮮為少見。因此，根據云南省當地的實際情況，研究中將EGCG含量大于9%的品種稱為高EGCG茶樹優異品種。在所研究的15個茶樹材料中，符合高EGCG品種條件的有1號、3號和6號品種。

茶多酚是茶葉中生化物質含量最高的成分，對茶的湯色、濃度等有重要影響，在茶葉品質中起決定因素。但是對于不同的茶產品，對茶多酚含量的要求有所不同，茶多酚主要影響茶湯的滋味，適宜的茶多酚含量可以增加綠茶中的滋味和鮮爽度，過量的茶多酚則會使綠茶過于苦澀。阮宇成等[15]研究了綠茶中茶多酚對鮮爽度的影響，結果表明茶多酚含量在20%～24%之間，適制綠茶；龔雨順等[16]的研究則表明茶多酚含量越大，紅茶品質越好，茶多酚含量大于24%的品種適制紅茶；茶多酚含量在36%以上的品種適制高檔紅茶。

氨基酸是茶湯品質的又一影響因子，是決定茶湯鮮爽度的主要因素，通常以游離氨基酸的形式存在于茶樹的根部，進而隨著維管束組織向茶葉新梢聚集，所以茶葉經過加工后其氨基酸含量極易發生變化。陳宗懋等[17]研究表明，氨基酸的含量與綠茶品質呈正相關的關系，氨基酸含量越高，綠茶的鮮爽度越好，綠茶的品質越好。氨基酸在紅茶中也能增強鮮爽度，使茶葉棕潤，提升紅茶品質。唐明熙[18]等研究了茶葉中氨基酸的含量變化和茶葉適制性的影響，指出由于茶樹的品種、生長環境和茶樹新梢的萌發程度不同，氨基酸含量存在較大差異。氨基酸含量大于3.5 %的品種適制綠茶；氨基酸含量小于2.5%的品種適制紅茶。研究所選的15個茶樹品種均適制紅茶，其中4號、5號和13號品種適制高檔紅茶；適制綠茶的有3號、9號、10號、11號、12號和14號品種；紅綠茶兼制的有3號、9號、10號、11號、12號和14號品種。綠茶要求鮮葉的顏色要綠、氨基酸含量適宜，加工出來的綠茶才顏色較好，鮮爽度較好；而紅茶要求湯色金黃透亮，故對茶多酚含量要求較高，而對茶氨酸含量沒有具體要求。

咖啡堿是一種藥理活性成分，在茶葉中的含量比較穩定，受茶葉加工、儲存的影響不大[19]。咖啡堿在茶葉中主要表現為苦味，對茶的滋味有一定的影響，與茶葉的品質呈正相關[20]。咖啡堿在茶葉中的含量隨茶樹的生長環境不同有所差異。茶樹的生長環境溫度越低，越有利于咖啡堿等含氮物質的積累。咖啡堿主要被應用在臨床醫學上，有提神和鎮痛等作用，但是醫學所用咖啡堿大多通過化學合成而來，有一定的毒副作用。而茶葉中所含的咖啡堿不具有藥學上的毒副作用，因此可通過選育茶樹優良品種獲得高咖啡堿茶樹品種，可為咖啡堿的提取和相關研究提供原料。水浸出物與茶湯的薄厚、濃度有密切關系，與綠茶的品質呈正相關。

[1]唐曉波，劉曉軍，王小萍，等.高EGCG茶樹品種的篩選及開發[J].浙江農業科學，2010，（1）：60-62.

[2]吳 警，劉春瑩，郭久寧，等.綠茶和發酵茶的茶多酚組成比較[J].安徽農業科學，2011，39（9）：5343-5419.

[3]熊立瑰，劉仲華，黃建安.茶兒茶素研究進展[J].茶葉通訊，2011，38（1）：27-31.

[4]李兆基，吳 棱，康 遙，等.一種茶多酚中兒茶素類化合物的分類方法[P].中國專利：1319597A，2001-10-31.

[5]陳 科，羅招陽.EGCG的特性及抗腫瘤作用[J].美國中華臨床醫學雜志，2006，8（2）：238-240.

[6]李 哲，朱 松，王洪新.酶法酰化兒茶素EGCG及其產物在大豆油中的抗氧化性[J].食品科學，2013，（8）：1-4.

[7]張星海.兒茶素富集和EGCG單體純化新工藝研究[J].茶葉，2002，28（3）：136-137.

[8]范小兵，殷夢龍，林 濤，等.一種沒食子兒茶素沒食子酸脂單體的純化方法[P].中國專利：1733753A，.2006-02-15.

[9]李彩蓉，蔡 飛，楊 曉，等.EGCG對糖尿病大鼠腎氧化應激的影響[J].咸寧學院學報（醫學版），2005，19（4）：283-285

[10]葛 建，林 芳，李明擲，等.表沒食子兒茶素沒食子酸脂（EGCG）生物活性研究進展[J].安徽農業大學學報，2011，38（2）：156-163.

[11]林金科，陳榮冰，陳常頌，等.高酯型兒茶素含量的茶樹資源篩選研究[J].茶葉科學，2005，25（1）：30-36.

[12]鄭紅發，黃亞輝.高EGCG茶的研究與開發[J].茶葉通訊，2007，34（1）：16-20.

[13]宛曉春.茶葉生物化學[M].北京：中國農業出版社，2003.

[14]鄭紅發，黃亞輝，黃懷生，等.高EGCG茶資源篩選及適制地域研究[J].福建茶葉，2006，（2）：15-17.

[15]阮宇成，王月根.綠茶滋味醇鮮濃的生化基礎[J].茶葉通訊，1987，15（4）：1-3.

[16]龔雨順，劉仲華，黃健安.茶葉中兒茶素制備純化研究進展[J].茶葉通訊，2003，1（1）：15-18.

[17]陳宗懋.茶氨酸的降壓功能[J].中國茶葉，2001，（4）：26-32.

[18]唐明熙.茶樹鮮葉中氨基酸含量變化對茶類適制性的影響[J].氨基酸和生物資源，1996，18（1）：14-43.

[19]謝吉林，肖海軍，孫魯云，等.滇西南茶區曬青毛茶中咖啡堿質量分數的分布規律研究[J].云南農業大學學報（自然科學版），2013，28（6）：851-856.

[20]張明澤，林金科，吳亮宇，等.外源誘導物ZMZ對茶樹新梢咖啡堿及其他生化成分含量的影響[J].福建茶葉，2013，35（1）：25-26.