單純性單臍動脈孕婦胎盤及臍帶組織中VEGF、eNOS蛋白的表達

許雅娟，翟閃閃，劉月華，羅曉華，張瑩瑩

鄭州大學第三附屬醫院婦產科 鄭州 450052

目前關于單臍動脈(single umbilical artery，SUA)與胎兒生長受限、胎兒染色體異常、胎兒發育異常及出生后的生存質量的相關性研究逐漸引起了產科、新生兒科及超聲科等科室的重視[1-4]。人類正常臍帶中有兩條動脈一條靜脈，臍帶中僅有一條動脈的稱為 SUA。單純性單臍動脈(isolated single umbilical artery，ISUA)是指不合并畸形的SUA，胎兒結局相對復雜性SUA較好。有研究[5]表明胎盤組織中血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、內皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)的表達異常可影響胎盤循環，進而導致血氧交換障礙，從而影響胎兒生長發育。該研究通過測定VEGF及eNOS在胎盤和臍帶中的表達，分析ISUA胎兒生長發育過程中胎盤循環的供血供氧情況。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2012年1月至2013年5月鄭州大學第三附屬醫院ISUA足月分娩的孕婦37例為ISUA組，選取同期正常足月分娩孕婦40例作正常對照。2組孕婦均無高血壓、腎病、糖尿病及其他合并癥。對每個孕婦娩出的胎盤及新生兒分別進行稱重，記錄數值。

1.2 胎盤及臍帶組織中VEGF、eNOS表達的檢測采用免疫組化SP方法。取1 cm×1 cm×1 cm母面胎盤組織，取距離胎盤10 cm處的臍帶組織1 cm，多聚甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋后4 μm厚度連續切片備用。即用型VEGF鼠抗人單克隆抗體和免疫組化Max Visionx試劑盒(鼠/兔)購自福州邁新公司，eNOS兔抗人多克隆抗體(稀釋150倍使用)購自武漢博士德生物工程公司。將組織切片脫蠟至水，微波爐抗原修復，H2O2封閉內源性過氧化物酶，滴加一抗4℃過夜，按照Max Visionx試劑盒說明加入二抗，DAB顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。用PBS液代替一抗作陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照。

1.3 結果判定 VEGF、eNOS蛋白均以細胞質出現棕黃色顆粒為染色陽性細胞。使用德國Lecia顯微照像系統，每張切片選擇5個具有代表意義的高倍視野觀察eNOS、VEGF蛋白的分布及表達。采用上海山富科學儀器有限公司 Biosens Digital Imaging System V1.6圖像分析系統進行分析，以平均灰度值表示eNOS和VEGF蛋白的表達強度。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0分析，ISUA組和正常對照組胎兒出生體重、胎盤質量、胎盤和臍帶組織中eNOS和VEGF蛋白表達的比較采用兩獨立樣本t檢驗，檢驗標準α=0.05。

2 結果

2.1 2組孕婦一般情況的比較 正常對照組孕婦娩出的新生兒體重及胎盤質量均大于ISUA組，見表1。

表1 2組孕婦年齡、孕周、胎兒出生體重和胎盤重量的比較

2.2 2組胎盤及臍帶組織中VEGF、eNOS蛋白的表達情況 見表2和圖1。ISUA組和正常對照組胎盤和臍帶組織中eNOS、VEGF均有表達。胎盤組織中eNOS分布于絨毛合體滋養細胞和絨毛血管內皮細胞，VEGF主要分布于絨毛合體滋養細胞，其次是絨毛血管內皮細胞和部分間質。臍帶組織中，VEGF、eNOS主要在動脈的內皮細胞表達。

表2 2組胎盤及臍帶組織中VEGF、eNOS的表達

3 討論

研究[6]表明部分SUA妊娠會合并胎兒臍血流和動脈導管血流指標異常，給母胎的血循環造成影響。該研究結果顯示ISUA組胎盤質量和胎兒出生體重小于正常對照組，提示ISUA孕婦可能存在影響胎兒胎盤循環及胎兒生長發育的因素。

一氧化氮(nitric oxide，NO)是一種有效的血管舒張因子，對維持胎盤妊娠期間胎盤循環的低阻力高灌注狀態起著重要的作用。Sheppard等[7]認為NO通過cGMP來控制子宮、胎盤的血流。eNOS是內源性NO的重要限速酶，能正確反映NO的水平。正常妊娠時胎盤和臍帶組織中eNOS對NO的合成起著重要的調控作用。有報道[8-9]缺氧情況下胎兒胎盤循環呈高阻力，血管透壁壓力增加及血管應切力的增加，刺激eNOS的表達增加。Lyall等[10]認為胎盤eNOS表達增加是對胎盤高阻力和低灌注的一種代償反應。該研究中eNOS在ISUA組胎盤及臍帶組織中呈高表達，分析原因可能是ISUA的胎兒胎盤循環中存在缺氧情況，循環呈現高阻力和低灌注，作為低氧時機體的一種代償性保護，刺激胎盤及臍帶組織eNOS表達增加，導致NO生成增加，從而舒張血管使血管阻力降低，滿足循環的血氧需求。

圖1 2組胎盤及臍帶組織中VEGF(1)、eNOS(2)蛋白的表達(SP，×400)

VEGF是內皮細胞特異性的有絲分裂原，作為一個重要的血管形成因素，能促進胎盤及臍帶新生血管的形成與重建，其生物學功能表現在:①促進血管內皮細胞分裂，誘導纖維蛋白溶解酶原的降解，參與細胞外蛋白水解和基底膜的降解，有利于血管內皮細胞的遷移和增生。②增加血管通透性，促進包括纖維蛋白原在內的血漿蛋白的滲出，形成纖維素網絡，為血管芽延伸生長提供良好基質。劉海意等[11]認為滋養細胞因受到氧壓力的調控，在缺血缺氧狀態下可以使VEGF代償性的表達上調。Kimura等[12]發現NO具有類似低氧對VEGF的調節效應，NO通過與VEGF的關鍵性轉錄調控因子靶向定位結合后，再與VEGF啟動子調控元件結合，從而促進VEGF的轉錄，使其表達上調。該研究中ISUA組胎盤及臍帶組織中VEGF表達高于正常對照組，原因可能是ISUA的胎兒胎盤循環中存在高阻力和低灌注的缺氧狀況，刺激機體代償性地上調VEGF的表達，以促進胎盤與臍帶的新生血管形成與重建，從而降低循環阻力;也可能是在缺氧情況下，胎兒胎盤循環代償性引起eNOS的增加，使組織產生更多的NO，更多的NO刺激VEGF表達上調，從而改善循環血氧灌注。

總之，ISUA胎兒胎盤循環中可能存在缺血缺氧情況，引起母胎物質交換障礙，從而影響胎盤生長發育及胎兒生長發育。ISUA胎兒胎盤循環在低氧刺激下代償性地使VEGF與eNOS的表達增加，通過有效的調節機制，使胎兒胎盤循環的供血供氧可以達到胎兒生長發育的基本需求，使ISUA孕婦達到基本滿意的妊娠結局。ISUA孕婦應在嚴密監測下妊娠，加強ISUA孕婦分娩過程監護。嚴密隨訪胎兒出生以后生長發育過程。該研究選取的樣本量較少，作者將進一步對ISUA妊娠過程進行更大樣本量的研究，從而指導ISUA孕婦的孕期保健，提高新生兒出生體重。

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