ODC G316A多態性與乳癌患者生存的關系*

許林平，買 玲，馬 杰，郭永軍#

1)鄭州大學附屬腫瘤醫院科研外事科 鄭州 450003 2)鄭州大學附屬腫瘤醫院腫瘤研究院 鄭州 450003 3)鄭州大學附屬腫瘤醫院分子病理科 鄭州 450003

乳癌是女性最常見的惡性腫瘤。乳癌死亡人數居癌癥相關死亡人數的第2位，僅次于肺癌[1]。多胺廣泛表達于多種組織包括乳癌組織[2]。研究[3-4]顯示多胺可以影響癌癥形成的多種過程，如轉錄、RNA穩定、離子門控通道等;抑制多胺的合成與減少細胞增殖、誘導細胞凋亡和抑制腫瘤形成等密切相關。鳥氨酸脫羧酶(ornithine decarboxylase，ODC)是多胺合成過程中最重要的限速酶[5]。在包括乳癌在內的人類多種上皮源性惡性腫瘤中，多胺水平和ODC活性升高;在動物模型中已證實多胺水平和ODC活性的升高可以促進腫瘤的發展，而抑制其活性則可以抑制腫瘤的發展[6-9]。2000年，在人類ODC基因的調控區內首次發現了一個功能性的單核苷酸多態性位點(SNP)，即G316A，其位于兩個重要的基因調控區(Myc/Max/Mad蛋白結合區)內，已證實這一SNP的改變可通過影響Myc/Max/Mad蛋白的結合，進而影響ODC的表達[10]。該研究中作者收集了150例乳癌患者的術后蠟塊，采用巢式PCR和限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)檢測進行ODC G316A的分型，并隨訪收集患者的臨床數據和生存時間，旨在觀察以ODC G316A進行分型后患者生存期是否有差異，為乳癌防治提供新的靶點。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2002年1月至2003年12月鄭州大學附屬腫瘤醫院經手術治療的150例乳癌患者手術切除組織的蠟塊。以死亡作為終點事件，隨訪截止到2013年8月1日，共有刪失66例。150例患者均為女性，年齡30～72歲，中位年齡48.6歲。腫瘤分期:Ⅰ期45例，Ⅱ期54例，Ⅲ期51例;51例有乳癌家族史。

1.2 DNA提取 利用 QIAamp DNA FFPE Tissue Kits(Qiagen公司)，按說明書步驟從150例乳癌患者蠟塊中提取DNA。

1.3 引物設計 從GenBank上查找ODC G316A基因的序列并應用Primer Premier 5.0軟件進行引物設計，引物序列及擴增產物大小見表1。

表1 兩對引物序列及擴增產物大小

1.4 巢式PCR-RFLP檢測 先應用巢式PCR擴增出 ODC G316A基因，再利用 RFLP進行 ODC G316A 分型。反應體系:12.5 μL 2 × PCR Buffer，5 μL 2 mmol/L dNTPs，上、下游引物各 1 μL，0.1 μL KOD，2.4 μL 蒸餾水，1 μL DNA。反應條件:95 ℃ 2 min;95℃進行40個循環，共0.5 min;62℃ 1 min;最后72℃延伸5 min;所有的反應均在PerkinElmer 2400 thermocycler(California，USA)上完成。收集PCR產物，加入PstⅠ酶，進行毛細管電泳，應用德國凱杰毛細管電泳儀進行分析。ODC G316A AG的患者可以得到3個峰:178、50和120 bp，ODC G316A GG的患者只能得到1個峰:178 bp，而ODC G316A AA的患者可以得到2個峰:50和120 bp。

1.5 統計學處理 應用SPSS 17.0處理數據。采用log-rank檢驗比較不同ODC G316A分型患者的生存曲線，檢驗水準α=0.05。

2 結果

150例乳癌患者至隨訪結束有84例患者去世，其中ODC G316A GG患者36例，ODC G316A AA/AG患者48例。150例患者中，ODC G316A AA/AG型72例，ODC G316A GG型78例。中位生存時間是105.4(79.0 ～126.0)個月。ODC G316A GG 患者比ODC G316A AA/AG患者具有更長的生存時間[109.7(86.0 ～ 128.0)個月 vs 100.6(78.0 ～122.0)個月;χ2=9.567，P=0.002]。進一步分析發現，Ⅰ期患者至隨訪結束無死亡病例;Ⅱ期患者中，ODC G316A GG與ODC G316A AA/AG患者的中位生存時間差異無統計學意義[117.2(88.0～130.0)個月 vs 111.8(48.0 ～130.0)個月;χ2=0.012，P=0.914];Ⅲ期患者中，ODC G316A GG 患者比 ODC G316A AA/AG患者具有更長的生存時間[124.0(68.0 ～124.0)個月 vs 100.0(46.0 ～100.0)個月;χ2=5.187，P=0.023]。

3 討論

ODC基因位于人類第2號染色體。ODC G316A是位于ODC區域的一個功能性SNP位點。有調查[11]表明，這一多態性位點在不同種族之間的頻率有較大差異。流行病學調查[12]發現，在白種人中ODC AA個體對前列腺癌的易感性高于ODC GG個體，特別是在吸煙者中，ODC AA個體的易感性較ODC GG 個體高 5.35倍。之后有研究[13-14]證實ODC分型對于結腸癌患者的預后有重要的指導意義。

該研究結果顯示，ODC G316A GG患者比ODC G316A AA/AG患者具有更長的生存時間;進一步分析發現，Ⅱ期患者中ODC G316A GG與ODC G316A AA/AG患者的中位生存時間差異無統計學意義，而Ⅲ期患者中，ODC G316A GG患者比ODC G316A AA/AG患者具有更長的生存時間。提示以ODC G316A進行分型有助于篩選出高危復發和轉移患者，對延長患者生存期和乳癌術后進行風險評估以及制定相應的治療和隨訪方案具有一定的臨床應用價值。

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