補腎溫肺合劑抗過敏作用的實驗研究

李飛艷　李福元　陳斌　等

摘要：目的研究補腎溫肺合劑的抗過敏作用。方法采用抗血清致大鼠同種被動皮膚過敏及顱骨肥大細胞脫顆粒試驗，測量藍斑光密度并計算藍斑抑制百分率，觀察肥大細胞脫顆粒情況并計算肥大細胞脫顆粒率和抑制率。結果與陰性對照組比較，補腎溫肺合劑的高、中、低三個劑量組均能顯著降低皮膚藍斑的吸光度、顯著抑制大鼠顱骨骨膜的肥大細胞脫顆粒，但隨著劑量的加大藍斑吸光度及肥大細胞脫顆粒率均有增加的趨勢。結論補腎溫肺合劑具有抗過敏作用，且臨床等效劑量顯示的抗過敏作用最顯著。

關鍵詞：補腎溫肺合劑；抗過敏；被動皮膚過敏；肥大細胞脫顆粒

中圖分類號：R285文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）08-0062-02

補腎溫肺合劑是株洲市中醫院自制制劑，處方由淫羊藿、細辛、黃芪、防風、五味子、白術、山茱萸、大棗等9味藥組成，具有益氣固表、補腎溫肺、健脾、通利鼻竅等功效，臨床主要用于肺腎陽虛型鼻鼽的治療。鼻鼽常見鼻癢、鼻塞、流涕、噴嚏等癥狀，相當于西醫臨床的過敏性鼻炎，本文對該制劑的抗過敏作用進行了實驗研究，現報道如下。

1材料

1.1藥物補腎溫肺合劑，由湖南省株洲市中醫醫院提供，批號120502，100 mL每瓶；氯雷他定片，河南天方藥業股份有限公司，批號120311640，10mg×6片。

1.2試劑卵白蛋白，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS9006-59-1；伊文思藍，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS314-13-6；中性紅，上海朝瑞生物科技有限公司；百白破聯合疫苗，武漢生物制品研究所有限責任公司，20110624-4。

1.3動物SD大鼠，SPF級，體質量180～200 g，雌雄兼用，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2011-0003，合格證4304700494。

1.4儀器uv756CRT紫外可見分光光度計，上海佑科儀器儀表有限公司；H-1650臺式高速離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司；三目生物顯微鏡，Motic BA300，武漢麥克奧迪儀器儀表有限公司生產。

2方法

2.1對大鼠同種被動皮膚過敏反應的影響抗血清的制備：雄性 SD大鼠，4只，體重200 g。腳掌皮下注射濃度為 1% 的卵白蛋白生理鹽水0.1 mL，隔日1次，共致敏注射3次，皮下注射同時，每只腹腔注射百白破疫苗（2×1010個）[1]。末次致敏后10日于腹主動脈采血，置有蓋試管中，于冰箱過夜，離心（3000 r.min-1，10 min）分離血清，-4℃冰箱保存備用。

50只SD大鼠，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，分別為補腎溫肺合劑高、中、低劑量組，陽性藥物（氯雷他定）組，陰性（模型）對照組，灌胃給藥，灌胃體積1 mL/100 g，補腎溫肺合劑藥物組分別以相應劑量給藥，高、中、低劑量分別為28 g/kg，14 g/kg，7 g/kg，低劑量為臨床等效劑量，氯雷他定以飲用水制成臨床等效劑量的混懸液作為陽性藥物，用前搖勻，模型組以飲用水灌胃。連續灌胃3 d，第1 d灌胃后，動物背部去毛，在背中線2側各取2點，以1：10的上述抗血清稀釋液皮內注射，每點0.1 mL，各點間隔距為1.5～2.0 cm，第3 d末次灌胃后30 min，將致敏動物通過尾靜脈注射1%的伊文思藍與 2 %卵白蛋白的生理鹽水混合液進行抗原攻擊，攻擊后30 min斷頭處死，剪取藍斑皮膚，剪碎，置于預備好的含丙酮生理鹽水（7：3）液5mL的帶塞離心管中，充分搖勻，浸泡48 h，8500 r.min-1離心10 min，取上清液，在610 nm波長下測定光密度（OD）。按照文獻方法計算藍斑抑制百分率[2]

2.2對大鼠顱骨骨膜肥大細胞脫顆粒的影響抗血清的制備、動物分組及給藥同“2.1”，各組動物以相應藥物連續灌胃3 d，末次給藥后30 min，在各動物頭部皮下注射1：20的抗血清0.1 mL，24 h后進行抗原攻擊，攻擊后30 min處死動物，剪去顱頂皮膚，剪下顱蓋骨，立即浸泡于無水乙醇中，1h后移至甲醇溶液中過夜，用0.24%的中性紅無水乙醇溶液染色30 min，自來水沖洗后細心剝離骨膜，小心平鋪于載玻片上，封片，高倍鏡檢。選擇肥大細胞密度較高的區域，記錄100個肥大細胞中脫顆粒肥大細胞數，按照文獻法計算肥大細胞脫顆粒百分率及抑制率[3]。

2.3統計方法SPSS11.5統計軟件，組間用t檢驗，結果用（x±s）表示。

3結果

3.1對大鼠同種被動皮膚過敏反應的影響與陰性對照組比較，補腎溫肺合劑高、中、低三個劑量組的光密度及氯雷他定組均有顯著性差異，且補腎溫肺合劑隨著劑量的增加其光密度有增大的趨勢。

4討論

過敏性鼻炎屬于由IgE抗體介導的Ⅰ型變態反應性疾病，其發病機理是由于過敏原進入機體后，機體產生IgE抗體，抗體與肥大細胞結合，處于致敏狀態，當相應的過敏原再次進入機體，與致敏的肥大細胞結合，引起肥大細胞脫顆粒，釋放過敏化學介質，使局部血管通透性增加。本文通過大鼠局部血管對伊文思藍的通透性、及引起顱骨骨膜肥大細胞脫顆粒率考察藥物的抗過敏作用，實驗結果表明補腎溫肺合劑各劑量組均能減小肥大細胞脫顆粒率、減輕過敏動物血管通透性，減少伊文思藍染料的滲出，具有良好的抗過敏作用，但是就本文中的3個劑量而言，補腎溫肺合劑表現出了藥效與劑量之間的負相關關系，以低劑量的抗過敏作用最佳，并與陽性藥物氯雷他定作用相比無差異。補腎溫肺合劑現臨床使用每天3次，每次20mL，本文中低劑量即為臨床等效劑量，因此臨床使用該制劑無需以加大用量以求得更好療效，至于其抗過敏作用與劑量之間的負相關關系的原因還有待于進一步研究。

參考文獻：

[1]曾憲斌，馮林.消風散顆粒對肥大細胞脫顆粒的抑制作用[J].江西中醫學院學報，2008，20（1）：70-71.

[2]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海：上海科學技術出版社，2006：747.

[3]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海：上海科學技術出版社，2006：747-748.

（收稿日期：2014-05-07）

摘要：目的研究補腎溫肺合劑的抗過敏作用。方法采用抗血清致大鼠同種被動皮膚過敏及顱骨肥大細胞脫顆粒試驗，測量藍斑光密度并計算藍斑抑制百分率，觀察肥大細胞脫顆粒情況并計算肥大細胞脫顆粒率和抑制率。結果與陰性對照組比較，補腎溫肺合劑的高、中、低三個劑量組均能顯著降低皮膚藍斑的吸光度、顯著抑制大鼠顱骨骨膜的肥大細胞脫顆粒，但隨著劑量的加大藍斑吸光度及肥大細胞脫顆粒率均有增加的趨勢。結論補腎溫肺合劑具有抗過敏作用，且臨床等效劑量顯示的抗過敏作用最顯著。

關鍵詞：補腎溫肺合劑；抗過敏；被動皮膚過敏；肥大細胞脫顆粒

中圖分類號：R285文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）08-0062-02

補腎溫肺合劑是株洲市中醫院自制制劑，處方由淫羊藿、細辛、黃芪、防風、五味子、白術、山茱萸、大棗等9味藥組成，具有益氣固表、補腎溫肺、健脾、通利鼻竅等功效，臨床主要用于肺腎陽虛型鼻鼽的治療。鼻鼽常見鼻癢、鼻塞、流涕、噴嚏等癥狀，相當于西醫臨床的過敏性鼻炎，本文對該制劑的抗過敏作用進行了實驗研究，現報道如下。

1材料

1.1藥物補腎溫肺合劑，由湖南省株洲市中醫醫院提供，批號120502，100 mL每瓶；氯雷他定片，河南天方藥業股份有限公司，批號120311640，10mg×6片。

1.2試劑卵白蛋白，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS9006-59-1；伊文思藍，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS314-13-6；中性紅，上海朝瑞生物科技有限公司；百白破聯合疫苗，武漢生物制品研究所有限責任公司，20110624-4。

1.3動物SD大鼠，SPF級，體質量180～200 g，雌雄兼用，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2011-0003，合格證4304700494。

1.4儀器uv756CRT紫外可見分光光度計，上海佑科儀器儀表有限公司；H-1650臺式高速離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司；三目生物顯微鏡，Motic BA300，武漢麥克奧迪儀器儀表有限公司生產。

2方法

2.1對大鼠同種被動皮膚過敏反應的影響抗血清的制備：雄性 SD大鼠，4只，體重200 g。腳掌皮下注射濃度為 1% 的卵白蛋白生理鹽水0.1 mL，隔日1次，共致敏注射3次，皮下注射同時，每只腹腔注射百白破疫苗（2×1010個）[1]。末次致敏后10日于腹主動脈采血，置有蓋試管中，于冰箱過夜，離心（3000 r.min-1，10 min）分離血清，-4℃冰箱保存備用。

50只SD大鼠，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，分別為補腎溫肺合劑高、中、低劑量組，陽性藥物（氯雷他定）組，陰性（模型）對照組，灌胃給藥，灌胃體積1 mL/100 g，補腎溫肺合劑藥物組分別以相應劑量給藥，高、中、低劑量分別為28 g/kg，14 g/kg，7 g/kg，低劑量為臨床等效劑量，氯雷他定以飲用水制成臨床等效劑量的混懸液作為陽性藥物，用前搖勻，模型組以飲用水灌胃。連續灌胃3 d，第1 d灌胃后，動物背部去毛，在背中線2側各取2點，以1：10的上述抗血清稀釋液皮內注射，每點0.1 mL，各點間隔距為1.5～2.0 cm，第3 d末次灌胃后30 min，將致敏動物通過尾靜脈注射1%的伊文思藍與 2 %卵白蛋白的生理鹽水混合液進行抗原攻擊，攻擊后30 min斷頭處死，剪取藍斑皮膚，剪碎，置于預備好的含丙酮生理鹽水（7：3）液5mL的帶塞離心管中，充分搖勻，浸泡48 h，8500 r.min-1離心10 min，取上清液，在610 nm波長下測定光密度（OD）。按照文獻方法計算藍斑抑制百分率[2]

2.2對大鼠顱骨骨膜肥大細胞脫顆粒的影響抗血清的制備、動物分組及給藥同“2.1”，各組動物以相應藥物連續灌胃3 d，末次給藥后30 min，在各動物頭部皮下注射1：20的抗血清0.1 mL，24 h后進行抗原攻擊，攻擊后30 min處死動物，剪去顱頂皮膚，剪下顱蓋骨，立即浸泡于無水乙醇中，1h后移至甲醇溶液中過夜，用0.24%的中性紅無水乙醇溶液染色30 min，自來水沖洗后細心剝離骨膜，小心平鋪于載玻片上，封片，高倍鏡檢。選擇肥大細胞密度較高的區域，記錄100個肥大細胞中脫顆粒肥大細胞數，按照文獻法計算肥大細胞脫顆粒百分率及抑制率[3]。

2.3統計方法SPSS11.5統計軟件，組間用t檢驗，結果用（x±s）表示。

3結果

3.1對大鼠同種被動皮膚過敏反應的影響與陰性對照組比較，補腎溫肺合劑高、中、低三個劑量組的光密度及氯雷他定組均有顯著性差異，且補腎溫肺合劑隨著劑量的增加其光密度有增大的趨勢。

4討論

過敏性鼻炎屬于由IgE抗體介導的Ⅰ型變態反應性疾病，其發病機理是由于過敏原進入機體后，機體產生IgE抗體，抗體與肥大細胞結合，處于致敏狀態，當相應的過敏原再次進入機體，與致敏的肥大細胞結合，引起肥大細胞脫顆粒，釋放過敏化學介質，使局部血管通透性增加。本文通過大鼠局部血管對伊文思藍的通透性、及引起顱骨骨膜肥大細胞脫顆粒率考察藥物的抗過敏作用，實驗結果表明補腎溫肺合劑各劑量組均能減小肥大細胞脫顆粒率、減輕過敏動物血管通透性，減少伊文思藍染料的滲出，具有良好的抗過敏作用，但是就本文中的3個劑量而言，補腎溫肺合劑表現出了藥效與劑量之間的負相關關系，以低劑量的抗過敏作用最佳，并與陽性藥物氯雷他定作用相比無差異。補腎溫肺合劑現臨床使用每天3次，每次20mL，本文中低劑量即為臨床等效劑量，因此臨床使用該制劑無需以加大用量以求得更好療效，至于其抗過敏作用與劑量之間的負相關關系的原因還有待于進一步研究。

參考文獻：

[1]曾憲斌，馮林.消風散顆粒對肥大細胞脫顆粒的抑制作用[J].江西中醫學院學報，2008，20（1）：70-71.

[2]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海：上海科學技術出版社，2006：747.

[3]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海：上海科學技術出版社，2006：747-748.

（收稿日期：2014-05-07）

摘要：目的研究補腎溫肺合劑的抗過敏作用。方法采用抗血清致大鼠同種被動皮膚過敏及顱骨肥大細胞脫顆粒試驗，測量藍斑光密度并計算藍斑抑制百分率，觀察肥大細胞脫顆粒情況并計算肥大細胞脫顆粒率和抑制率。結果與陰性對照組比較，補腎溫肺合劑的高、中、低三個劑量組均能顯著降低皮膚藍斑的吸光度、顯著抑制大鼠顱骨骨膜的肥大細胞脫顆粒，但隨著劑量的加大藍斑吸光度及肥大細胞脫顆粒率均有增加的趨勢。結論補腎溫肺合劑具有抗過敏作用，且臨床等效劑量顯示的抗過敏作用最顯著。

關鍵詞：補腎溫肺合劑；抗過敏；被動皮膚過敏；肥大細胞脫顆粒

中圖分類號：R285文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）08-0062-02

補腎溫肺合劑是株洲市中醫院自制制劑，處方由淫羊藿、細辛、黃芪、防風、五味子、白術、山茱萸、大棗等9味藥組成，具有益氣固表、補腎溫肺、健脾、通利鼻竅等功效，臨床主要用于肺腎陽虛型鼻鼽的治療。鼻鼽常見鼻癢、鼻塞、流涕、噴嚏等癥狀，相當于西醫臨床的過敏性鼻炎，本文對該制劑的抗過敏作用進行了實驗研究，現報道如下。

1材料

1.1藥物補腎溫肺合劑，由湖南省株洲市中醫醫院提供，批號120502，100 mL每瓶；氯雷他定片，河南天方藥業股份有限公司，批號120311640，10mg×6片。

1.2試劑卵白蛋白，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS9006-59-1；伊文思藍，上海朝瑞生物科技有限公司，CAS314-13-6；中性紅，上海朝瑞生物科技有限公司；百白破聯合疫苗，武漢生物制品研究所有限責任公司，20110624-4。

1.3動物SD大鼠，SPF級，體質量180～200 g，雌雄兼用，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2011-0003，合格證4304700494。

1.4儀器uv756CRT紫外可見分光光度計，上海佑科儀器儀表有限公司；H-1650臺式高速離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司；三目生物顯微鏡，Motic BA300，武漢麥克奧迪儀器儀表有限公司生產。

2方法

2.1對大鼠同種被動皮膚過敏反應的影響抗血清的制備：雄性 SD大鼠，4只，體重200 g。腳掌皮下注射濃度為 1% 的卵白蛋白生理鹽水0.1 mL，隔日1次，共致敏注射3次，皮下注射同時，每只腹腔注射百白破疫苗（2×1010個）[1]。末次致敏后10日于腹主動脈采血，置有蓋試管中，于冰箱過夜，離心（3000 r.min-1，10 min）分離血清，-4℃冰箱保存備用。

50只SD大鼠，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，分別為補腎溫肺合劑高、中、低劑量組，陽性藥物（氯雷他定）組，陰性（模型）對照組，灌胃給藥，灌胃體積1 mL/100 g，補腎溫肺合劑藥物組分別以相應劑量給藥，高、中、低劑量分別為28 g/kg，14 g/kg，7 g/kg，低劑量為臨床等效劑量，氯雷他定以飲用水制成臨床等效劑量的混懸液作為陽性藥物，用前搖勻，模型組以飲用水灌胃。連續灌胃3 d，第1 d灌胃后，動物背部去毛，在背中線2側各取2點，以1：10的上述抗血清稀釋液皮內注射，每點0.1 mL，各點間隔距為1.5～2.0 cm，第3 d末次灌胃后30 min，將致敏動物通過尾靜脈注射1%的伊文思藍與 2 %卵白蛋白的生理鹽水混合液進行抗原攻擊，攻擊后30 min斷頭處死，剪取藍斑皮膚，剪碎，置于預備好的含丙酮生理鹽水（7：3）液5mL的帶塞離心管中，充分搖勻，浸泡48 h，8500 r.min-1離心10 min，取上清液，在610 nm波長下測定光密度（OD）。按照文獻方法計算藍斑抑制百分率[2]

2.2對大鼠顱骨骨膜肥大細胞脫顆粒的影響抗血清的制備、動物分組及給藥同“2.1”，各組動物以相應藥物連續灌胃3 d，末次給藥后30 min，在各動物頭部皮下注射1：20的抗血清0.1 mL，24 h后進行抗原攻擊，攻擊后30 min處死動物，剪去顱頂皮膚，剪下顱蓋骨，立即浸泡于無水乙醇中，1h后移至甲醇溶液中過夜，用0.24%的中性紅無水乙醇溶液染色30 min，自來水沖洗后細心剝離骨膜，小心平鋪于載玻片上，封片，高倍鏡檢。選擇肥大細胞密度較高的區域，記錄100個肥大細胞中脫顆粒肥大細胞數，按照文獻法計算肥大細胞脫顆粒百分率及抑制率[3]。

2.3統計方法SPSS11.5統計軟件，組間用t檢驗，結果用（x±s）表示。

3結果

3.1對大鼠同種被動皮膚過敏反應的影響與陰性對照組比較，補腎溫肺合劑高、中、低三個劑量組的光密度及氯雷他定組均有顯著性差異，且補腎溫肺合劑隨著劑量的增加其光密度有增大的趨勢。

4討論

過敏性鼻炎屬于由IgE抗體介導的Ⅰ型變態反應性疾病，其發病機理是由于過敏原進入機體后，機體產生IgE抗體，抗體與肥大細胞結合，處于致敏狀態，當相應的過敏原再次進入機體，與致敏的肥大細胞結合，引起肥大細胞脫顆粒，釋放過敏化學介質，使局部血管通透性增加。本文通過大鼠局部血管對伊文思藍的通透性、及引起顱骨骨膜肥大細胞脫顆粒率考察藥物的抗過敏作用，實驗結果表明補腎溫肺合劑各劑量組均能減小肥大細胞脫顆粒率、減輕過敏動物血管通透性，減少伊文思藍染料的滲出，具有良好的抗過敏作用，但是就本文中的3個劑量而言，補腎溫肺合劑表現出了藥效與劑量之間的負相關關系，以低劑量的抗過敏作用最佳，并與陽性藥物氯雷他定作用相比無差異。補腎溫肺合劑現臨床使用每天3次，每次20mL，本文中低劑量即為臨床等效劑量，因此臨床使用該制劑無需以加大用量以求得更好療效，至于其抗過敏作用與劑量之間的負相關關系的原因還有待于進一步研究。

參考文獻：

[1]曾憲斌，馮林.消風散顆粒對肥大細胞脫顆粒的抑制作用[J].江西中醫學院學報，2008，20（1）：70-71.

[2]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海：上海科學技術出版社，2006：747.

[3]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海：上海科學技術出版社，2006：747-748.

（收稿日期：2014-05-07）