JAB1、β-catenin與大腸癌生物學行為之間的關系

張守武，鄧躍華

(安徽醫科大學第一附屬醫院普外科，安徽合肥 230022)

在全世界范圍內，大腸癌在男性個體及女性個體的最常見癌癥發病率中分別位于第3位及第2位，每年新增病例約120萬，對伴有腫瘤轉移的病例，5年生存率只有5% ～8%［1］。近年來，雖然各種治療腫瘤的方案不斷創新及改進，但大腸癌的治愈率依然不容樂觀。目前，希望通過對大腸癌基因等方面相關研究，為大腸癌靶向治療提供可能，從而提高大腸癌的診斷率及治愈率。

1 材料與方法

1.1 標本收集 選擇安徽醫科大學第一附屬醫院2009年12月—2011年12月期間收治的94例大腸癌患者的術后標本，所有患者臨床及病理資料完整，術前未經任何抗腫瘤治療，術后均病理確診，所有病例均無同時患有其他惡性腫瘤。選擇同組病例癌旁正常組織(距腫瘤邊緣約5 cm)標本94例作對照組。每例腫瘤標本均各取大腸癌組織和癌旁黏膜組織兩塊，其中大腸癌組織位于腫瘤生長良好，無壞死區域處，癌旁組織取自距離腫瘤5 cm以上的部位處的黏膜。

1.2 主要試劑 一抗:濃縮型兔抗人JAB1多克隆抗體(貨號:bs-0126R)、濃縮型兔抗人β-catenin多克隆抗體(貨號:bs-0076R)及二抗試劑盒及底物顯色液(DAB顯色試劑盒)均購于北京博奧森生物技術有限公司，磷酸緩沖液和枸櫞酸鹽緩沖液均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 實驗方法 (1)標本及切片的制備:標本經10%中性甲醛溶液固定5 d，依次進行酒精脫水、石臘包埋，每個檢測蠟塊進行連續切片5～6張(厚度約4 μm)，并行免疫組織化學染色;(2)采用常規免疫組化SP法;(3)結果判斷:染色結果根據染色強度和著色面積進行判斷。JAB1主要定位于細胞核，部分定位于細胞漿;β-catenin主要定位于正常黏膜上皮細胞膜。用細胞數得分和強度得分的乘積作為判斷表達結果，積分≤1為陰性，＞1為陽性。染色強度分為4級:無著色0級計0分，淺黃色1級計1分，棕黃色2級計2分，棕褐色3級計3分。在400倍光鏡下隨即觀察5個不同視野，根據陽性細胞占總細胞的百分比分為5級:＜5%為0級;5% ～25%為1級;25% ～50%為2級;50% ～75%為3級;＞75%為 4 級，分別取對應值 0，1，2，3，4。

1.4 統計學處理 應用統計學軟件SPSS13.0處理數據。實驗結果主要為分類資料，各組及組間比較用χ2檢驗或Fisher確切概率法，相關性檢驗采用分類變量關聯性分析(交叉分類2×2表關聯性分析)。顯著性水準α=0.05。

2 結果

2.1 JAB1、β-catenin在大腸癌及癌旁組織中的表達情況 經過免疫組化染色后，大腸癌及癌旁組織JAB1陽性顆粒主要顯色于細胞核，部分定位于細胞漿(圖1，2)，陽性顆粒呈淺棕色到深褐色。94例大腸癌組織中有76例陽性表達(80.9%)，癌旁組織中有13例陽性表達(13.8%)，JAB1在大腸癌組織中的表達率明顯高于癌旁組織(χ2=86.686，P＜0.001)。

β-catenin主要定位于正常黏膜上皮細胞膜，其表達結果按Maruyama［2］方法判斷，細胞膜表達陽性結果大于70%稱為正常表達，小于70%稱為表達缺失，細胞質或細胞核陽性表達大于10%稱為胞質或胞核陽性表達，胞質或胞核陽性表達稱為異位表達，表達缺失及異位表達統稱為表達異常(圖3，圖4)。在94例大腸癌組織中β-catenin異常表達數為61例(64.9%)，癌旁組織異常表達數為26例(27.7%)，二者差異有明顯統計學意義 (χ2=26.209，P ＜0.001)，見表1。

表1 JAB1、β-catenin在大腸癌及癌旁組織中的表達情況

2.2 JAB1、β-catenin在大腸癌組織中的表達與臨床病理參數間的關系

2.2.1 JAB1 在低分化型大腸癌中的陽性表達率為94.3%，高于中、高分化型中的 79.7%(χ2=5.634，P=0.018);在淋巴結轉移陽性的病例中表達率為94.6%，高于淋巴結轉移陰性的病例的73.7%(χ2=8.344，P=0.004);在 Dukes分期 C 期+D期中的陽性表達率為93.2%，在A期+B期中陽性表達率為70.0%，差異具有統計學意義(χ2=8.124，P=0.004)。JAB1的表達與患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯統計學意義(P＞0.05)，見表2。

圖1 JAB1在大腸癌組織中的陽性表達(SP×200)

圖2 JAB1在癌旁組織中的陽性表達(SP×200)

圖3 β-catenin在大腸癌組織細胞質中的異常表達(SP×200)

圖4 β-catenin在大腸癌旁組織細胞質中的表達(SP×200)

表2 JAB1、β-catenin在大腸癌組織中的表達與臨床病理參數間的關系

2.2.2 β-catenin 在低分化型大腸癌中的異常表達率為91.4%，高于中、高分化型中的72.9%(χ2=4.686，P=0.030);在淋巴結轉移陽性的病例中異常表達率為98.2%，高于淋巴結轉移陰性的病例的76.3%(P=0.001);在Dukes分期C期+D期中的異常表達率為90.9%，在A期+B期中異常表達率為64.0%，差異具有統計學意義(χ2=9.454，P=0.002)。β-catenin的表達與患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯統計學意義(P＞0.05)，見表2。

2.3 JAB1和β-catenin在高、中分化大腸癌組織表達的關系 在59例高、中分化大腸癌組織中，JAB1陽性表達有47例，其中β-catenin陽性表達數為43例;JAB1陰性表達有12例，其中β-catenin陰性表達數為16例。采用分類變量的關聯性分析(交叉分類2×2表關聯性分析)提示JAB1和βcatenin在高、中分化大腸癌組織中表達存在關聯(P=0.001，r=0.432)，見表3。

表3 JAB1和β-catenin在高、中分化大腸癌組織表達的關系

3 討論

c-Jun是早期原癌基因，JAB1即為c-Jun的激活結構域結合蛋白-1，是c-Jun參與轉錄的共同激活因子，同時也是作為COP9信號轉導體(CSN)構成的第5個亞單位［3］。CSN復合體是一個質量約450 kDa，包括8個核心亞基CSN1-CSN8降大小的順序，這些亞基在不同物種是高度保守的，CSN復合體在植物和動物的發展是必不可少的。以前許多研究表明，JAB1可使生物體內的某些蛋白含量減少，如細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑 p27kip1(P27)，P53，西尼羅河病毒的衣殼蛋白和Smad4，從而導致細胞增殖，減少細胞凋亡，以致腫瘤的發生［4-6］。許多研究已經證明，JAB1/CSN5人類各種癌癥中過度表達，包括垂體腫瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺、NPC及許多其他腫瘤［7］。此外，JAB1/CSN5過度表達與喉鱗狀細胞癌及肝癌的淋巴結轉移相關。

通過本實驗研究得出JAB1在大腸癌組織中的表達率明顯高于癌旁組織，JAB1在低分化型大腸癌中的陽性表達率高于中、高分化型的;在淋巴結轉移陽性的病例中表達率高于淋巴結轉移陰性的;在Dukes分期C期+D期中的陽性表達率高于在A期+B期的，差異具有統計學意義，但JAB1的表達與患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯統計學意義。結合以前學者的研究，因此，JAB1作為促癌基因，在促進大腸癌中的發生、發展等方面扮演者重要角色。

Monga等［8］通過 β-catenin在肝細胞中的研究得出:Wnt/β-catenin信號轉導途徑在肝細胞生長及再生過程中扮演許多重要角色，調節著細胞的增殖、凋亡、氧化應激及分化，在不同的肝臟腫瘤中，β-catenin的低表達將導致肝臟細胞變異生長。Zhang等［9］研究得出 FoxM1可以直接結合 β-catenin，且提高其在細胞的定位水平及轉錄翻譯過程，這一機制在腫瘤細胞形成的過程中起著重要作用，FoxM1-β-catenin相互作用可以控制Wnt靶基因的表達，導致神經膠質瘤的形成。

Schütz等［10］研究表明在大腸癌的發生及形成過程中，Wnt/腺瘤型息肉等位基因(APC)/β-catenin信號轉導途徑發揮著重要作用，CSN5/JAB1可以使β-catenin含量減少，從而是細胞的增殖及凋亡減少，促進大腸癌的發生及發展。

在本實驗中發現在大腸癌組織中異常表達數高于癌旁組織異常表達數，在低分化型大腸癌中的異常表達率高于中、高分化型的，在淋巴結轉移陽性的病例中異常表達率高于淋巴結轉移陰性的，在Dukes分期C期+D期中的異常表達率高于A期+B期中異常表達率，差異具有統計學意義。但βcatenin的表達與患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯統計學意義。因此可見β-catenin在正常細胞調節著細胞的生長發育，而腫瘤細胞中表達下調或發生變異，導致腫瘤的形成及發展。

另外，在此實驗中得出JAB1和β-catenin在高、中分化大腸癌組織中表達存在關聯，且國外學者Anke等也同樣證實JAB1與β-catenin相互作用促進大腸癌的發生及發展，但兩者相互作用的具體機制尚待進一步研究。

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［4］ Nishimoto A，Lu L，Hayashi M，et al.JAB1 regulates levels of endothelin type A and B receptors by promoting ubiquitination and degradation［J］.Biochem Biophys Res Commun，2010，391(4):1616-1622.

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［8］ Monga SP.Role of Wnt/β-catenin signaling in liver metabolism and cancer［J］.Int J Biochem Cell Biol，2011，43(7):1021-1029.

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［10］ Schütz AK，Hennes T，Jumpertz S，et al.Role of CSN5/JAB1 in Wnt/β-catenin activation in colorectal cancer cells［J］.FEBS Letters，2012，586(11):1645-1651.