氟尿嘧啶和奧沙利鉑對消化道腫瘤的協同抑制作用

聶 磊，柏 帥，劉 衛，張志國

5－氟尿嘧啶(5－FU)和奧沙利鉑(L－OHP)在消化道腫瘤的化療中應用最為廣泛，大部分的化療方案中均有這兩種藥物。雖然消化道的胚胎來源和組織結構相同并且大部分都是腺癌(除食管癌)，但5－FU和L－OHP對胃癌、結腸癌、直腸癌的抑制作用以及聯合用藥是否優于單藥，各文獻報道相差較大［1－3］。因此，筆者收集了消化道腫瘤患者的腫瘤細胞進行體外培養，采用MTT法檢測并計算各化療藥物對腫瘤細胞的抑制率，為臨床醫師選擇化療方案，實現個體化治療提供依據。

1 資料與方法

1．1 儀器與試劑 超凈工作臺(蘇凈集團安泰公司);CO2細胞培養箱(Forma Scientific);倒置顯微鏡(上海長方光學儀器有限公司);MB－580多功能酶標分析儀(深圳市匯松科技發展有限公司);壓力蒸汽滅菌器(沈陽利港凈化設備有限公司);胎牛血清(Gibico);DMEM培養基(Hyclone);雙抗(Hyclone);MTT(Sigma);二甲基亞砜(天津市廣成化學試劑有限公司)。

1．2 標本 自2011－01—2011－10，筆者所在科消化道腫瘤患者58例，未經放化療。術中切取新鮮消化道腫瘤標本，胃癌31例，結腸癌15例，直腸癌12例;男38例，女20例;年齡29～83歲，平均54歲。

1．3 化療藥物 奧沙利鉑(浙江海正藥業股份有限公司，批號120503)，5－FU(天津金耀氨基酸有限公司，批號1201131)。所用化療藥物均用培養基配成10倍血漿藥物峰濃度的溶液，具體藥物濃度為奧沙利鉑51 μg/ml，氟尿嘧啶1000 μg/ml。

1．4 標本處理 手術室無菌操作取得癌組織，放入裝有培養液的培養瓶內，超凈工作臺內取出腫瘤組織，于盛有DMEM的平皿清洗并修剪去除非腫瘤組織，用眼科剪剪成約1 mm3碎塊，加入約2 ml 0．2%膠原酶，置于37℃培養箱內進行消化，1次/h取出吹打組織，使組織塊盡量分散，用200目篩網過濾，濾液1500 r/min離心10 min，棄上清用完全培養液重懸制成單細胞懸液，活細胞計數并調整細胞濃度約為5×105個/ml。接種細胞于 96 孔板中，每孔 180 μl，5%CO2培養箱中培養24 h。取出培養板，設空白對照組(培養液)、細胞對照組(腫瘤細胞)以及化療藥物組(腫瘤細胞+化療藥)，各組設4個復孔，試驗組分別加入各種抗腫瘤藥物20 μl，對照組加20 μl培養基，將培養板置37 ℃，5%CO2培養箱中培養，24 h后，取出培養板，每孔加入5 mg/ml的MTT 20 μl，培養箱中繼續培養 6 h。棄上清后，每孔加入100 μl DMSO，使紫藍色甲瓚沉淀完全溶解，用酶標儀在570 nm波長處檢測各孔的OD值計算抑制率，抑制率(IR)=(細胞對照孔平均OD值－加藥孔平均OD值)/(細胞對照孔平均OD值－空白對照孔平均OD值)×100%。抑制率≥50%為高度敏感，30%≤抑制率＜50%為中度敏感，抑制率＜30%為耐藥。

1．5 統計學分析 抑制率以平均值±標準差表示。采用SPSS12．0統計軟件進方統計學分析，組間計量資料比較采用t檢驗。采用金正均法判斷兩種藥物的相互作用［4］，該分析方法的公式為:q=IR(A+B)/(IRA+IRB－IRA×IRB)。其中，IR為藥物對腫瘤細胞的抑制率，A和B分別指5－FU和LOHP，IRA和IRB分別是單用藥的抑制率，IR(A+B)為聯合用藥的抑制率。q≥1．15表示兩藥合用時產生協同作用;q≤0．85表示兩藥合用產生拮抗作用。

2 結果

5－FU和L－OHP以及兩藥聯用對腫瘤細胞的抑制率見表1。結果表明，5－FU和L－OHP聯用對三種腫瘤細胞的抑瘤作用優于單一用藥，兩藥具有協同作用。

表1 5－FU和L－OHP體外腫瘤細胞抑制率(±s，%)

表1 5－FU和L－OHP體外腫瘤細胞抑制率(±s，%)

注:與5－FU組比較，aP"0．05;與 L－OHP組比較，bP"0．05。

腫瘤名稱n 腫瘤細胞抑制率5－FU L－OHP 5－FU+L－OHP q胃癌 31 39．8 ±13．6 14．4 ±3．4 55．1 ±12．0a，b 1．16結腸癌 15 40．7 ±15．4 13．6 ±3．1 61．25 ±16．4a，b 1．23直腸癌 12 59．6 ±14．5 45．6 ±19．4 67．2 ±19．4a，b 1．28

3 討論

化療在綜合治療消化道腫瘤中占有重要的地位，尤其在防止其復發方面作用顯著。但腫瘤是一個異質性、多態性、分化不均勻的細胞群體，腫瘤對各種化療藥物的敏感性存在著明顯的個體差異，這些都會影響消化道腫瘤化療效果［5］。目前臨床抗腫瘤藥的應用都是經驗用藥，或者參照指南用藥，存在很大的盲目性，療效也不確切，因此，為了提高療效、避免耐藥性的產生和減少不良反應，化療藥物敏感性檢測已成為提高療效的重要手段。

5－FU是細胞S期特異性藥物，是一種嘧啶類似物，在細胞內轉化成不同的細胞毒性代謝產物，與DNA和RNA結合，最終通過抑制DNA合成導致細胞周期停滯和細胞死亡。L－OHP為第3代鉑類抗腫瘤藥物，以DNA為靶作用部位，阻斷其復制和轉錄。在臨床消化道腫瘤治療藥物的選擇上，5－FU和L－OHP常作為一線用藥，或聯用或單用。MTT法簡單、快速、處理樣本量大、結果與臨床化療敏感和耐藥具有高一致性高等優點，自20世紀90年代以來被用于大部分臨床腫瘤細胞化療藥敏試驗［6－8］。因此，筆者選擇了5－FU和L－OHP兩種化療藥物，采用MTT法進行了腫瘤細胞藥物敏感性測定。實驗結果表明，直腸癌細胞對5－FU和L－OHP都敏感，而胃癌和結腸癌細胞對5－FU敏感，但對L－OHP不敏感。聯合用藥后三種腫瘤細胞對藥物都高度敏感，兩藥聯用具有協同作用。

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