SYSMEX CS5100血凝分析儀性能評估及凝血六項參考區間的調整

閆宏斌， 鄭善鑾， 郝曉柯

(第四軍醫大學附屬西京醫院檢驗科，陜西西安710032)

凝血酶原時間(prothrombin time，PT)、活化部分凝血活酶時間(activated partial thromboplastin time，APTT)、凝血酶時間(thrombin time，TT)纖維蛋白原(fibrinogen，FIB)、D-二聚體(D-dimer，DD)和纖維蛋白原降解產物(fibrinogen degradation product，FDP)的聯合檢測，可以更全面了解人體凝血系統和纖溶系統的功能，特別是在出血性疾病和血栓病方面有重要的臨床意義。我們對新引進的SYSMEX CS5100全自動血凝分析儀(簡稱CS5100)進行了全面的性能評價，并在此基礎上建立了本實驗室的臨床參考區間。

材料和方法

一、研究對象

收集陜西地區健康成人222名血漿樣本，其中男120例，女102例，年齡20～79歲。均為2013年5至6月來第四軍醫大學附屬西京醫院體檢中心進行體檢的健康體檢者，經查看最終體檢報告篩選各項檢測指標均未見異常改變。參照臨床實驗室標準化協會(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)H21-A5 文件［1］規定采集血漿，將枸櫞酸鈉(0.11 mol/L)1份與靜脈全血9份混合，為避免產生氣泡，1500×g離心10～15min分離出血漿樣本待檢。

二、儀器和試劑

CS5100(日本 SYSMEX公司)。德國SIEMENS 公司 PT、APTT、TT、FIB、DD 試劑盒、質控品、緩沖液。日本一化FDP試劑盒、質控品。

三、方法

1.精密度試驗 參照美國臨床實驗室標準化委員會(National Committee for Clinical Laboratory Standards，NCCLS)EP5-A2 文件的要求，分別選取正常和異常的質控品或混合血漿檢測 PT、APTT、TT、FIB、DD和 FDP，了解儀器的重復性。(1)批內精密度:用同一批號的試劑對正常和異常3個水平混合血漿檢測，2 h內連續測定10次，計算批內均值()、標準差(s)和變異系數(coefficient of variation，CV);(2)批間精密度:選取3個水平質控品近20 d的質控數據，計算20 d質控數據、s和CV。

2.準確性試驗 CS5100經校準、日常維護保養后，使用配套德靈各水平的定值質控品，PT、APTT為3個水平，FIB、TT為1個水平，DD、FDP為2個水平，驗證其準確性，重復測定3次，對測定的數據計算出相對偏倚(Bias%)。

3.線性范圍試驗 根據CLSI對線性評價的要求，選取多個高濃度患者的血漿充分混合，重復測定5次，取平均值作為接近預期上限的高濃度血漿(H)，用配套稀釋液分別按100%、80%、60%、40%、20%、0%進行稀釋，分別測定FIB、DD和FDP，每個稀釋度重復測定2次，計算相關系數(r)值。

4.血漿樣本攜帶污染率試驗 將精密度驗證的質控品水平3的8、9、10號結果標示為H1、H2、H3，質控品水平 1 的 1、2、3 號結果標示為L1、L2、L3，按公式求攜帶污染率。

5.可比性實驗 用該儀器與廠家已知性能經過校正的SYSMEX CA7000(A2390)分析系統［簡稱CA7000(A2390)］平行檢測20份血漿，其中包含正常、異常的樣本，進行PT、APTT、FIB、TT等6個項目的對比，按1→20、20→1排序檢測2次，檢測后對檢測結果進行相關性分析。

6.參考區間驗證 嚴格按照試劑說明書進行試劑配置，用CS5100對選取的表面健康者222名進行PT、APTT、TT 、FIB 、DD和FDP檢測，計算r值(落在參考范圍內的樣本數/總的試驗樣本數)，要求r＞0.95。檢測前和檢測時均用正常和異常質控進行監控，須在樣本采集后2 h內完成檢測。

7.參考區間的確立 對于未通過參考區間驗證的項目，根據222例樣本檢測結果計算95%可信區間。

三、統計學方法

采用SPSS 11.0軟件進行統計分析，計量資料呈正態分布，用±s表示。兩組間比較采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、精密度試驗

CS5100的重復性和穩定性檢測結果見表1、表2。各項目批內 CV 均＜3.0%，PT、APTT、TT和FIB的批間 CV＜5.0%，DD和 FDP的批間CV＜6.3% 符合CLIA'88提出的血凝分析儀指標質量分析要求。

表1 CS5100重復性測定結果(批內)

表2 CS5100重復性測定結果(批間)

二、準確度實驗

根據NCCLS相關標準，PT、APTT、FIB的總允許誤差分別為±15% 、±15%、±20%，TT、DD和FDP的總允許誤差暫參照FIB標準執行。結果顯示，CS5100的偏差均在允許誤差范圍內。見表3。

三、線性實驗

各濃度的DD、FIB和FDP測定值和標準值之間具有良好的線性關系，r值分別為0.997 4、0.999 8、0.996 8，均＞0.975，表明測定值和理論值高度相關，a 值分別為0.983 0、1.022 4、0.990 6，在所要求的1±0.05范圍內，見圖1。

表3 CS5100準確度實驗測定結果

圖1 CS5100線性實驗

四、攜帶污染實驗

PT、APTT、TT、FIB、DD和 FDP 的攜帶污染率均＜2.0%，見表4。儀器自潔系統良好。

五、與CA7000(A2390)的比對

2 種系統對 PT、APTT、TT、FIB、DD和 FDP 的回歸方程的R2均＞0.975，回歸斜率＞0.95而＜1.05。見圖2。

表4 CS5100攜帶污染率

圖2 CS5100與CA7000(A2390)的能力比對線性回歸圖

六、參考區間驗證結果

TT、DD和FDP的r均＞0.95，表明廠家推薦的參考區間適用于本實驗室。PT、APTT、FIB的r＜0.95，其推薦參考區間不符合本實驗室參考區間要求，需要重新建立PT、APTT、FIB的實驗室參考區間。見表5。

七、PT、APTT、FIB實驗室參考區間的建立

對222名健康體檢者的生理、生化指標的觀察值采用正態分布法，求PT、APTT、FIB的95%參考區間的上下限。PT的下限值為－1.96s=11.66－1.96×0.658≈10.4，PT的上限值為+1.96s=11.66+1.96×0.658≈13.0，本實驗室PT參考區間為10.4～13.0 s。APTT的下限值為－1.96s=24.91－1.96×2.761≈19.5，APTT的上限值為+1.96s=24.91+1.96×2.761≈30.3，本實驗室APTT(以白陶土為激活劑)參考區間為19.5～30.3 s。FIB的下限值為－1.96 s=2.60－1.96× 0.489≈1.6，FIB 的上限值為+1.96 s=2.60－1.96×0.489≈3.6，本實驗室 FIB 參考區間為1.6～3.6 g/L。

八、222名不同性別健康成人凝血指標的檢測結果

不同性別健康成人凝血各指標差異均無統計學意義(P＞0.05)。見表6。

表5 CS5100參考區間驗證結果

表6 性別分組凝血指標結果比較(±s)

表6 性別分組凝血指標結果比較(±s)

女性組 102 11.6±0.70 24.8±2.1 2.58±0.59 17.8±2.13 0.08±0.09 0.50±0.43 P值＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05

討 論

目前，國內越來越多的醫院已經采用了全自動血凝分析系統，而且隨著科技的發展，全自動血凝儀為我們提供了高性能、高精密度和高效率的自動化分析水平，同時也準確地為臨床提供有價值的檢驗結果。盡管血凝儀在裝機時儀器廠商已提供了儀器性能的初步參數，但由于各實驗室之間的差異，在儀器使用前必須對性能參數重新評估。本研究參照國際血液學標準化委員會(International Council for Standardization in Haematology，ICSH)制定的評價內容，對CS5100進行精密度、準確度、線性范圍、攜帶污染率、比對實驗等方面的評價。研究表明，以CLIA'88的室間質評能力(PT)為參考標準［2］，TT、DD和 FDP由于無室間質評能力要求，因此TT、DD和FDP批內CV參照廠家標準，批間參照FIB標準(本實驗室對TT、DD和FDP的室內質控經過2年的累計，發現與FIB的CV很接近，故暫按FIB的室間質評標準判斷)進行評價。PT、APTT的批內CV符合規定允許誤差(3.75%)的1/4，FIB的批內CV符合允許誤差(5.0%)的1/4，TT、DD和FDP的批內CV允許值符合廠家標準(10.0%、7.8%、10.0%)。PT、APTT 的批間 CV 符合允許誤差(5.0%)的 1/3，TT、FIB、DD和 FDP 的批間 CV符合允許誤差(6.67%)的1/3，說明該儀器具有良好的重復性和穩定性。準確度實驗表明偏差在允許范圍內，提示儀器具有較高的準確度。線性實驗和攜帶污染實驗也表明儀器具有良好的檢測線性關系和自潔系統，比對實驗中可見與CA7000(A2390)的相關性良好，保證了實驗室結果的一致性。各實驗室均應根據自己實驗條件的不同建立自己實驗室的參考區間［3］。此外，由于各實驗室在儀器、試劑、環境和地域人群等方面有所不同，所以本實驗室進一步建立了適用于自己實驗室的參考區間。首先對廠家推薦的PT、APTT、TT、FIB、DD和FDP的參考區間進行驗證，以結果r＞0.95為判斷標準，TT、DD和FDP的推薦參考區間適用于本實驗室，而PT、APTT、FIB的r值分別為0.81、0.81、0.91，因此通過統計方法計算其參考區間分別為10.4～13.0 s、19.5～30.3 s、1.6～3.6 g/L。此外，男、女之間血凝指標各參數值的差異無統計學意義(P＞0.05)，與相關文獻報道一致。

PT、APTT分別為外源性和內源性凝血因子的首要檢測指標［4］，TT主要是對血中循環抗凝物質如肝素等的篩查［5］，FIB主要用于纖溶篩查［6］，DD不僅可作為急性腦梗死病程判斷及療效觀察的有用指標［7］，而且還是一種最簡便、可靠的急性肺栓塞篩選指標［8］，DD在臨床上已被視為體內高凝狀態和纖溶亢進的分子標志物，對高凝狀態和血栓性疾病的診斷及預后判斷有一定實用價值，FDP聯合DD檢測可以區分原發和繼發性的纖溶亢進，上述6種指標不僅可用于凝血功能的篩選，而且可應用于口服抗凝藥物的監控、肝素和溶栓治療的監控以及彌漫性血管內凝血的篩查等，因此，本研究在進行系統的儀器性能評估后，進一步驗證了廠家推薦的參考區間，建立起適用于本實驗室的臨床凝血項目參考區間，旨在為臨床提供更加精準、可靠、有價值的檢驗結果，在協助臨床診斷、療效觀測方面具有重要意義。

［1］Clinical and Laboratory Standards Institute.Collection，transport，and processing of blood specimens for testing plasma-based coagulation assays［S］.H21-A5，CLSI，2008.

［2］馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎［M］.上海:上海科技文獻出版社，2007:89.

［3］馮厚梅，孫德華，鄭 磊，等.Sysmex CA7000全自動凝血儀性能評價［J］.檢驗醫學，2011，26(1):58-62.

［4］Alban S，Lühn S.Prothrombin time for detection of contaminated heparins［J］.N Engl JMed，2008，359(25):2732-2734.

［5］Berntorp E，Salvagno GL.Standardization and clinical utility of thrombin-generation assays［J］. Semin Thromb Hemost，2008，34(7):670-682.

［6］Peyvandi F，Palla R.Fibrinogen concentrates［J］.Clin Adv Hematol Oncol，2009，7(12):788-790.

［7］馮清洲.急性腦梗死D－二聚體測定的臨床研究［J］.中國實用醫藥，2006，1(1):70-71.

［8］翟航榮，趙偉男，王利全.D－二聚體在診斷肺栓塞中的價值研究［J］.中國醫學創新，2009，6(4):20-21.