參參康心膠囊對冠心病氣虛血瘀證模型小鼠TXB2、6-keto-PGF1α 的影響

劉 潔，白 鶴，劉喜平，李沛清

(1．甘肅中醫學院2011 級碩士研究生，甘肅 蘭州730000;2．甘肅中醫學院方劑教研室，甘肅 蘭州730000;3．甘肅中醫學院基礎課部，甘肅 蘭州730000)

冠心病是嚴重危害人類健康的常見病，始于冠狀動脈粥樣硬化，繼而產生管腔狹窄或閉塞，導致心肌缺血缺氧。血栓素B2(TXB2)和6 酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)是一對反映血小板聚集功能與血管收縮舒張的常用指標。文獻研究表明:TXB2/6-keto-PGF1α失衡導致冠狀動脈痙攣、血栓形成和動脈粥樣硬化，是誘發冠心病心絞痛的主要因素［1］。參參康心膠囊源于名老中醫驗方，由水蛭等3 味藥物組成，經現代制藥工藝加工而成，臨床應用多年，對冠心病、心肌梗死等心肌損傷性疾病有顯著療效［2］。本研究通過觀察參參康心膠囊對冠心病氣虛血瘀證模型小鼠TXB2、6-keto-PGF1α水平的干預作用，探究其防治冠心病的作用機制，為臨床應用提供實驗佐證。

1 材料與方法

1．1 動 物

SPF 級昆明小鼠90 只，雌雄各半，體質量(28±2)g，由甘肅中醫學院實驗動物中心提供，動物質量合格證號:SCXK(甘)2011-1163。

1．2 藥品、試劑與儀器

參參康心膠囊由人參等3 味藥物按一定比例組成，蘭州中藥現代化工程技術中心及甘肅中醫學院科研實驗中心監制，規格為每粒0．5 g，相當于生藥1 g，用時以生理鹽水溶解為質量分數120 g 生藥/L的混懸液;地奧心血康膠囊，成都地奧制藥集團有限公司產品，批號1207010，用時以蒸餾水配制成0．003 5 g/mL的混懸液。TXB2、6-keto-PGF1αes試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號20111005。UV－9100 紫外分光光度計，北京瑞利分析儀器公司產品;KDC－2044 低速冷凍離心機，科大創新股份有限公司中佳分公司產品。

1．3 動物分組

90 只小鼠依據雌雄、體質量隨機分為以下6 組:空白對照組、氣虛血瘀證模型對照組(模型對照組)、氣虛血瘀證模型+地奧心血康組(地奧心血康組)、氣虛血瘀證模型+參參康心膠囊高劑量組(參參康心高劑量組)、氣虛血瘀證模型+參參康心膠囊中劑量組(參參康心中劑量組)、氣虛血瘀證模型+參參康心膠囊低劑量組(參參康心低劑量組)。

1．4 氣虛血瘀證模型的建立與給藥

參照文獻［3-4］，采用高脂飲食、饑餓等多因素復合方法復制氣虛血瘀證模型。空白對照組給予正常飲食，模型對照組和4 個治療組給予饑餓喂養，食量為正常小鼠每日攝食量的60%，飼料為高脂飼料，造模周期為4 周。給藥量按成人常規劑量折算后的劑量。地奧心血康組灌胃地奧心血康0．076 g/kg，參參康心低、中、高劑量組依次灌胃1．5，3，6 g/kg 參參康心膠囊，空白對照組和模型對照組給予等量生理鹽水，均1 d 1 次，連續給藥4 周。

1．5 心肌缺血模型的建立

氣虛血瘀證造模周期結束后，進行心肌缺血模型的復制。6 組按30 單位/kg 劑量注射垂體后葉素，記錄注射時間，15 min 后，烏拉坦1 μg/g 麻醉小鼠，心電圖機記錄小鼠注射垂體后葉素后一定時間的Ⅱ導聯心電圖，通過軟件記錄數據，觀察心率和T 波高度變化來判斷心肌缺血造模是否成功。

1．6 檢測指標

心電圖檢測完成后，立即摘小鼠眼球取血，血液不經任何處理，于室溫放置。低溫下3 500 r/min 離心15 min，取上層血清檢測TXB2、6-keto-PGF1α含量，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。酶標儀測定吸光度值，進行數據統計。

1．7 統計學方法

采用SPASS 19．0 統計分析軟件處理。數據以均數()±標準差(s)表示，對符合正態分布的數據兩獨立樣本均數間比較用獨立樣本t檢驗;方差齊的樣本間兩兩比較采用S-N-K 檢驗，方差不齊的樣本兩兩比較采用Dunnet-t 檢驗，多個樣本間的比較采用單因素方差分析。以P＜0．05 為差別有統計學意義。

2 結 果

2．1 各組小鼠心電圖T 波高度和心率對比

與空白對照組對比，模型對照組和各治療組心電圖的心率、T 波高度均增加，差別有統計學意義(P＜0．05 或P＜0．01 )，表明心肌缺血模型復制成功。見表1。

表1 各組小鼠心電圖T 波高度和心率對比n=10，±s

表1 各組小鼠心電圖T 波高度和心率對比n=10，±s

注:與空白對照組對比，* P ＜0．05，＊＊P ＜0．01。

組 別 劑量/(g·kg－1) 心率/(次·min－1) T 波幅度/mV空白對照組 —364．27±26．63 0．267±0．078模型對照組 — 396．80±25．27* 0．207±0．031*地奧心血康組 0．076 397．58±26．76* 0．125±0．094＊＊參參康心高劑量組 6 391．78±27．21* 0．127±0．107＊＊參參康心中劑量組 3 394．62±23．48* 0．123±0．089＊＊參參康心低劑量組 1．5 388．50±22．76* 0．128±0．082＊＊

2．2 各組小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α對比

與模型對照組對比，各治療組的TXB2含量均降低，6-keto-PGF1α含量(參參康心中劑量組除外)均升高，差別有統計學意義(P＜0．05 或P＜0．01)。各治療組之間兩指標的對比，差別均無統計學意義(P＞0．05)。見表2。

表2 各組小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α對比ng·L －1，n=10，±s

表2 各組小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α對比ng·L －1，n=10，±s

注:與模型對照組對比，# P ＜0．05，## P ＜0．01。

組 別 劑量/(g·kg－1) TXB2 6-keto-PGF1α空白對照組 — 93．69±16．78## 247．67±12．23##模型對照組 — 122．97±23．10 227．65±17．23地奧心血康組 0．076 100．64±20．07# 243．56±12．45#參參康心高劑量組 6 96．25±23．94# 245．94±10．25##參參康心中劑量組 3 100．17±21．42# 241．37±13．43參參康心低劑量組 1．5 101．57±22．06# 240．96± 9．76#

3 討 論

臨床研究證實:氣虛血瘀是冠心病中醫證型中較為常見的類型，氣虛是本虛中最常見的證候要素，血瘀是標實中最常見的證候要素［5］。氣虛血瘀型冠心病存在血管內皮功能異常，并貫穿其發生發展過程的始終［6］。改善冠心病血管內皮功能目前已成為冠心病治療研究中的一個重要靶點。

TXA2、PGI2是反應內皮功能的常用指標。TXA2和PGI2是花生四烯酸在血栓素合成酶及前列環素合成酶的作用下生成的代謝產物。PGI2是強烈的血管舒張劑和血小板聚集抑制劑，具有抑制凝血和血栓形成等防治冠心病作用，而TXA2是強烈的血管收縮劑和血小板聚集促進劑，其作用與PGI2相拮抗［7］。正常狀態下，TXA2、PGI2的含量正常，可保障管壁的收縮、血小板的聚集正常，同時保持血液循環通暢。病理狀態下，TXA2、PGI2的含量異常，可導致血管痙攣和血栓形成，也是導致心肌缺血、冠心病的重要原因。心肌缺血患者內皮功能異常，TXA2/PGI2濃度異常，會出現血小板聚集性增強，使冠脈血流量減少，心肌耗氧量增加，促使心肌梗死或心絞痛的發生和發展［8］。由于TXA2與PGI2的性質均不穩定，故常測其代謝產物TXB2和6-keto-PGF1α水平來反映TXA2和PGI2在體內的水平與活性。相關的冠心病中醫學研究［9－10］表明，TXB2水平與中醫證候之間存在一定的關系，氣虛血瘀狀態下，相對于其他指標，TXB2水平明顯升高。

本研究結果顯示:模型對照組與空白對照組對比，各項指標都存在一定的差別，提示了氣虛血瘀證可能存在血管活性物質的改變。結果表明:參參康心膠囊可以改善氣虛血瘀型心肌缺血小鼠血清TXB2和6-keto-PGF1α的失衡，從而起到治療調節作用，并且較地奧心血康組在改善6-keto-PGF1α方面存在一定的優勢，顯示了中醫藥辨證論治的優勢。從實驗結果可看出:中藥的藥物濃度與藥物療效不一定成線性關系，當超過一定量的最佳藥物濃度后，再增加藥物濃度時，藥物療效未必隨之增加。實驗結果顯示中藥組調節氣虛血瘀證可能存在不同劑量對照的靶點不同，說明了中藥和方劑起效作用可能是多靶點的，通過多方面調節起到作用。

本研究根據中醫學“方證相應”理論，采用較為符合中醫藥辨證論治的中醫證候動物模型，以益氣活血的參參康心膠囊驗證了TXB2和6-keto-PGF1α作為氣虛血瘀證冠心病的客觀變化存在，為冠心病證的本質研究及參參康心膠囊的開發應用提供了科學依據。

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