喉癌組織中survivin和caspase-7的表達與相關性研究

張美佳，張愛華，萬 歆，王新安，牟基偉

（佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003）

喉癌是耳鼻喉癌癥中發生率最高的一種，且喉癌的發生率還在逐年上升［1］。已有研究證實，喉癌及其他多種癌癥的發生、發展都與細胞凋亡相關基因存在一定的相關性［2，3］。通過對細胞凋亡相關基因的檢測可以對癌癥的分期分型等工作提供指導和幫助。因此，通過免疫組化法對比不同分期和分級的喉癌組織中survivin與caspase-7的表達變化，總結survivin與caspase-7的表達與喉癌的關系，對喉癌的檢測和治療具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 標本

收集2011-12～2014-01經病理證實的喉癌標本72例，及正常喉部黏膜組織10例。其中I期患者2例，Ⅱ期患者14例，Ⅲ期患者27例（T1N1M0患者3例、T2N1M0患者4例、T3N0M0患者20例）Ⅳ期患者29例（T4N2M0患者2例、T4N3M0患 者2例、T4N1M0患 者6例、T4N0M0患 者19例）；聲門上型22例、聲門型41例、聲門下型9例。所有病理均為行放化療治療。

1.2 試劑

Survivin和caspase-7試劑盒均由上海生工公司提供。

1.3 檢測步驟

嚴格按照說明書進行操作，對材料進行取材、固定、包埋及脫水脫蠟等操作；使用3%H2O2孵育樣品10min，滅活內源性過氧化物酶；使用PBS 沖洗樣品后滴加封閉液孵育15min；滴加一抗，4℃過夜；使用PBS沖洗樣品后滴加二抗，37℃孵育15min；使用PBS沖洗樣品后滴加DAB顯色液，避光孵育5min。

1.4 結果判定

顯微鏡下觀察不同樣品的染色強度，survivin和caspase-7染色陽性細胞的細胞質以黃色或棕黃色為主。對染色層度進行計分：無色計0分，淡黃色計1分，黃色計2分，棕黃色計3分。每個樣品隨機選取5個不重復事業，計算陽性細胞所占比重及陽性計分，無陽性細胞計0分，0%～10%計1分，10%～50%計2分，50%～75%計3分，＞75%計4分。

1.5 統計學方法

采用SPSS 18.0軟件分析，計數資料采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman相關分析法。P＜0.05為具有統計學差異。

2 結果

2.1 survivin和caspase-7在喉癌組織及正常組織中的表達

survivin及caspase-7在喉癌組織中的陽性率均與喉正常組織存在統計學極顯著差異（P＜0.01），見表1。

表1 survivin及caspase-7在不同組織中表達陽性率比較

由上表可知，在兩種蛋白的表達水平比較中發現，在喉癌組織中，survivin及caspase-7的表達陽性率均與喉正常黏膜組織存在極顯著差異（P＜0.01），其中survivin表達量顯著增加，caspase-7 表達量顯著降低。提示，survivin 及caspase-7的表達與喉癌的發生具有相關性。

2.2 survivin及caspase-7在喉癌組織中的表達與喉癌分級分期的關系

不同的喉癌的發生部位及不同分化程度喉癌組織中survivin及caspase-7的陽性率均存在顯著差異，見表2。

表2 survivin及caspase-7在喉癌組織中的表達與病理參數關系

由上表可知，survivin及caspase-7的陽性率在不同發病部位及不同臨床分期均具有統計學差異（P＜0.05，P＜0.01）。在不同部位的喉癌類型比較中發現，聲門下型的survivin陽性率最高而聲門型最低；而在caspase-7陽性率的比較發現，其在聲門型中的表達率最高，而聲門上型的表達率最低。在不同臨床分期的比較中發現，隨著臨床分期的升高，survivin的陽性率也隨之升高，而caspase-7則呈現相反的趨勢，隨著病情的嚴重，表達率逐漸下降。

2.3 survivin及caspase-7表達的相關性

在喉癌組織中，survivin及caspase-7的表達具有顯著相關性（r=0.631，P＜0.05），兩者呈負相關，見表3。

表3 survivin及caspase-7在喉癌組織中的表達相關性

由上表可知，survivin的表達與caspase-7的表達負相關，在喉癌組織中survivin陽性而caspase-7陰性的概率最高，說明在喉癌組織中普遍呈現survivin表達而caspase-7不表達的現象。且證實survivin的表達與caspase-7 的表達負相關。可作為臨床檢測依據。

3 討論

目前，對腫瘤的認識已得到了巨大的發展，大部分研究者均認為喉癌及其他種類的發生不僅是細胞的復制功能不受調控導致復制過快，其發生也與細胞凋亡比例降低相關［4］。Survivin是一種已知的功能最為強大的凋亡一直因子，與多種腫瘤的發生具有密切關系［5］。Survivin可抑制細胞凋亡途徑中的caspase-7蛋白活性發揮抗凋亡作用，其在多少惡性腫瘤組織中均有表達，而在正常組織中表達量極低或不存在表達［6］。而caspase-7蛋白則是細胞凋亡途徑中的重要蛋白之一，參與了細胞凋亡的發生，當caspase-7蛋白的表達及活性受到抑制時，細胞凋亡的發生便會受到抑制［7～9］。目前尚無研究對喉癌組織的Survivin及caspase-7的表達關系進行研究，僅有對喉癌組織中survivin和VEGF的表達研究，或其他癌癥中survivin和caspase-7 的研究［10，11］。因此，研究Survivin及caspase-7在喉癌組織中的表達關系，對了解喉癌、治療喉癌具有重要意義。

研究證實，喉癌組織中的survivin 蛋白表達量顯著提高，提示survivin 表達量的升高可能是喉癌發生的原因之一，且通過不同臨床分期喉癌組織中survivin表達量的對比研究發現，隨著臨床分期的增加，患者survivin的表達量也隨之增加，這一結果與其在其他癌癥中的表現相符。而caspase-7的表達量則是與survivin相反，其在健康人群的喉組織中的檢測率為100%，提示其是細胞凋亡途徑中的重要組成部分，當caspase-7的表達受到抑制時便會導致癌癥的發生。同時，研究對survivin以caspase-7的相關性研究證實了在喉癌組織中survivin的表達與caspase-7的表達負相關?？赡艿脑蚴莝urvivin的表達不僅抑制了caspase-7的活性，同時對caspase-7的表達產生了負面影響。

綜上所述，在喉癌組織中Survivin及caspase-7的表達與在正常組織細胞中存在有統計學極顯著差異（P＜0.05）。Survivin與caspase-7 的表達負相關，提示可能是survivin的過量表達不僅抑制了caspase-7 的活性，不同抑制了caspase-7的表達，從而導致了癌癥的發生。

［1］杜靈彬，毛偉敏，陳萬青，等.中國2003～2007年喉癌發病率和死亡率分析［J］.中華流行病學雜志，2012，33（4）：395-398

［2］葉飛，黃桂球，傅敏儀，等.SOX2蛋白在喉癌組織中的表達及臨床意義［J］.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013，27（3）：136-139

［3］YU S，ZHANG G，LI J.Effects of Celecoxib on COX-2Expression and Caspase-3 Activity in Laryngocarcinoma Hep-2 Cells［J］.Journal of Hubei University of Medicine，2011，1：007

［4］Liu J，Sheng W，Xie Y，et al.The in vitro and in vivo antitumor activity of adenovirus-mediated interleukin-24expression for laryngocarcinoma［J］.Cancer Biotherapy and Radiopharmaceuticals，2010，25（1）：29-38

［5］Guo Q，Li Y.Research on the expression of Survivin and PTEN in laryngeal squamous cell carcinoma transplanted on the back sides of nude mice treated by gold throat tablets［J］.Lin chuang er bi yan hou tou jing wai ke za zhi=Journal of clinical otorhinolaryngology，head，and neck surgery，2012，26（24）：1134-1137，1143

［6］Altieri D C.12Survivin［J］.Targeted Therapies in Oncology，2013，197

［7］李珂，郝艷，王建亭，等.Omi／HtrA2和caspase-7在喉癌組織中的表達及相關性［J］.山西醫科大學學報，2011，42（7）：583-586

［8］Brentnall M，Rodriguez-Menacol L，De Guevara R L，et al.Caspase-9，caspase-3and caspase-7have distinct roles during intrinsic apoptosis［J］.BMC cell biology，2013，14（1）：32

［9］Lamkanfi M，Kanneganti T D.Caspase-7：aprotease involved in apoptosis and inflammation［J］.The International Journal of Biochemistry ＆Cell Biology，2010，42（1）：21-24

［10］白云飛，覃潔，彭詩東.喉癌組織中Survivin和VEGF 的表達及其臨床意義［J］.中國耳鼻咽喉顱底外科雜志，2012，18（1）：5-9

［11］涂毅，姚峰，魏文，等.乳腺癌中survivin的表達及其與Caspase-7和腫瘤病理特征的關系［J］.腫瘤防治研究，2010（1）：70-73