PRL-3與E-cad在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

隋小芳，朱英麗，范巧菊，王鳳玲

（佳木斯大學附屬第一醫院 老年病科，黑龍江 佳木斯 154003）

浸潤轉移是肺癌導致患者死亡的重要因素，PRL-3為酪氨酸蛋白磷酸酶，與多種惡性腫瘤如直腸癌［1］、胃癌［2］等的發生發展有明顯的相關性，它能夠影響腫瘤細胞的增殖、浸潤及轉移等，是近年來研究的熱點之一。E-cad是細胞黏附分子家族中鈣黏蛋白的一種亞型，在腫瘤的浸潤轉移中起到重要作用［3］。本實驗通過利用SP 法檢測50例手術切除的非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）標本及15例距癌旁5cm 的正常肺組織中PRL-3及E-cad的表達情況，來探討上述二者與NSCLC臨床分期、病理分級及淋巴結轉移的相關性。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

收集2009-01～2010-12佳木斯大學附屬第一醫院病理科保存的NSCLC標本50例為實驗組及15例距癌旁5cm的正常肺組織為對照組，標本均經福爾馬林固定、石蠟包埋處理。按組織類型分有鱗狀細胞癌29例，腺癌21例；病理分級中Ⅰ+Ⅱ級27例，Ⅲ級23例。有淋巴結轉移28例，無轉移22例；PTNM 的臨床分期中Ⅰ+Ⅱ期24例，Ⅲ+Ⅳ期26例。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑及檢測方法

鼠抗人PRL-3 多克隆抗體（sc-130355）購自Santa Cruz公司；鼠抗人E-Cadherin單克隆抗體、S-P免疫組化廣譜試劑盒（通用），DAB 顯色劑等均來自福州邁新生物技術有限公司。應用SP方法分別檢測PRL-3與E-cad在NSCLC中的表達情況。試驗步驟根據S-P 試劑盒說明書進行，用癌旁正常組織作為陽性對照，用PBS作為一抗做陰性對照。

1.2.2 結果判斷

PRL-3的染色結果根據孔梅［4］等人的評判標準，在腫瘤細胞胞漿內及胞膜上出現棕黃色顆粒為陽性表達，著色強度分為：無色（-）、淺黃色（+）、黃色及更深顏色（++），分別記為0分、1分、2分。陽性細胞數分級為：≤50%為0分、51%～75%為1分、＞75%為2 分。兩項得分相乘結果≥2分為陽性病例，余為陰性病例。

E-cad 染色結果根據熊家安［5］等人的評判標準，正常細胞中的E-cad主要定位于細胞膜，免疫組化染色示連續性分布的棕黃色顆粒狀為陽性細胞，細胞膜不著色或單純胞漿著色為陰性，切片中染色癌細胞≤25%為（+），26%～75%為（++），≥76%為（+++）。其中（++～+++）為高表達，（-～+）為低表達或異常表達。

1.3 統計學方法

采用SPSS17.0統計軟件進行統計分析。采用χ2檢驗對計數資料作比較分析，相關分析采用Spearman相關分析，以α=0.05作為顯著性檢驗水準。

2 結果

2.1 PRL-3及E-cad的表達

50例NSCLC 的免疫組化染色結果中，PRL-3陽性表達者為35例，陽性表達率為70.0%，而在15例的癌旁正常肺組織中無PRL-3 的陽性表達，兩組間差異顯著，（P＜0.01）。50例NSCLC 中E-cad有31例 出 現 低 表 達（62%）、19例高表達，高表達率僅為38.0%；而在15例癌旁正常肺組織中E-cad 為100%高表達，兩組間差異顯著（P＜0.01）。

2.2 PRL-3及E-cad與NSCLC臨床病理特征

鱗癌中PRL-3 陽性表達有21例（72.4%），腺癌中PRL-3陽性表達有14例（66.7%），兩組間差異不顯著（P=0.66）。在Ⅰ+Ⅱ級NSCLC中PRL-3的陽性表達者有18例，表達率為66.7%，在Ⅲ級NSCLC 中PRL-3的陽性表達者有17例，表達率為73.9%，兩組間差異不顯著（P=0.058）。TNM 分期中在Ⅰ+Ⅱ期中PRL-3有13例高表達，表達率為54.2%，Ⅲ+Ⅳ期中有22例高表達，表達率為84.6%，兩組間的陽性表達有明顯的差異性（P＜0.05）。PRL-3在有淋巴結轉移組中有23例呈高表達，表達率為82.1%，無淋巴結轉移組中有12例高表達，表達率為54.5%，兩組間差異顯著（P＜0.05）。

E-cad與NSCLC在鱗癌和腺癌中低表達為65.5%和57.1%，兩種組織學類型間差異不顯著（P＞0.05）。在Ⅰ～Ⅱ級中低表達率為44.4%，在Ⅲ級中低表達率為82.6%，兩組間差異顯著（P＜0.01）。在Ⅰ+Ⅱ期中低表達率為41.7%，在Ⅲ+Ⅳ期中低表達為80.8%，兩組間差異顯著（P＜0.01）。在有淋巴結轉移中的低表達為78.6%，在無淋巴結轉移中的低表達為40.9%，兩組間差異有顯著性，P＜0.01。見表1，圖1～4。

表1 PRL-3與E-cad的表達與臨床病理特征的關系

圖1 PRL-3在鱗癌中的表達（×200）

圖2 PRL-3在腺癌中的表達（×200）

圖3 E-cad在腺癌中的表達（×200）

圖4 E-cad在鱗癌中的表達（×200）

2.3 PRL-3與E-cad之間的相互關系

在50例NSCLC中PRL-3陽性表達而E-cad低表達者27例，經Spearman相關分析表明，PRL-3與E-cad呈負相關關系（χ2=11.36，P＜0.01，相關系數r=-0.48）。見表2。

表2 PRL-3與E-cad表達之間的關系

3 討論

PRL-3基因定位于人類第8號染色體q24.3上，許多試驗表明，PRL-3對細胞的增殖分化以及腫瘤細胞的浸潤轉移有顯著的相關性。有學者研究發現，轉染了PRL-3基因后的B16細胞增殖數比對照組明顯升高，且細胞由上皮型轉變為纖維狀，其細胞構型發生了改變［6］。張平［7］等人在研究PRL-3的表達與非小細胞肺癌的淋巴結轉移相關性時就發現有淋巴結轉移組表達率明顯高于無轉移組，說明PRL-3的過表達對腫瘤的浸潤轉移是有影響的。我們的試驗分別從非小細胞肺癌的組織類型，病理分級，臨床分期及淋巴結轉移情況來分析PRL-3的表達情況，發現PRL-3的表達在不同的組織類型、病理分級中無顯著差異性，但PRL-3的表達隨著臨床分期的增高以及出現淋巴結轉移而明顯增高，出現這樣的現象提示PRL-3可能對NSCLC 的浸潤轉移有促進作用。

E-cadherin基因為鈣黏蛋白中的一種亞型，與E-cad結合的連環蛋白中尤以β-catenin最為重要，它們共同形成E-cad／cat復合體，主要介導組織之間的相互黏附作用，約束細胞的遷移能力，保持組織細胞的結構完整性。有研究顯示，在肺癌中E-cad的表達明顯降低，其低表達與腫瘤的臨床分期及淋巴結轉移情況相關聯［9］。通過我們的研究發現，E-cad的表達與NSCLC的病理分級，臨床分期及淋巴結轉移有關，而與腫瘤的組織分型不相關，說明E-cad的低表達或異常表達與腫瘤的發生發展是密切相關的。

在本次試驗中，PRL-3在非小細胞肺癌中的陽性表達率達70.0%，而E-cad的低表達率為62.0%，通過我們的分析顯示兩者為負相關。有實驗研究表明，過表達的PRL-3一方面能夠使得腫瘤細胞增殖，另一方面能夠誘導E-cad的表達下調。對于PRL-3 下調E-cad的作用機制，有人認為Snail轉錄抑制因子在此過程中起到重要的作用，過表達的PRL-3能使Snail轉錄抑制因子表達增多，而表達增多的Snail與E-cadherin基因啟動子結合直接抑制E-cad的轉錄，使得E-cad的表達下調［10］。E-cad在腫瘤細胞中的低表達或異常表達，破壞了E-cad／cat復合體的結構完整性，使得組織細胞的黏附功能遭到破壞，最終導致腫瘤細胞的浸潤轉移，因此我們分析PRL-3與E-cad在腫瘤的生物學特性中具有相當重要的作用。聯合檢測兩者在非小細胞肺癌中的表達情況具有重要的臨床指導意義，為肺癌的治療及預后判斷提供相應的依據。

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