免疫學(xué)參數(shù)HLA 與腹腔子宮內(nèi)膜異位癥病因?qū)W關(guān)系

胡玉紅，徐 建

（佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003）

子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機制尚不清楚，在過去的十年間，子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展的研究中，宿主的免疫應(yīng)答因素得到了越來越多的關(guān)注。腹水中的免疫細(xì)胞大多是單核細(xì)胞，以巨噬細(xì)胞為主，還有其他免疫細(xì)胞如淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞等。所有這些細(xì)胞應(yīng)該具有正常的免疫活性，然而，當(dāng)腹腔內(nèi)尤其是巨噬細(xì)胞和NK 細(xì)胞的免疫系統(tǒng)損害了，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜的上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞清除不徹底，這可能是子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生的主要病理機制。在關(guān)于腹水中單核細(xì)胞的研究中，許多學(xué)者已經(jīng)證實，單核細(xì)胞系的炎性因子在子宮內(nèi)膜異位癥患者中過渡表達(dá)。而且，隨后的研究發(fā)現(xiàn)這些患者體內(nèi)存在著很大程度的HLA 分子表達(dá)的減弱。HLA的功能為抗原遞呈，由此提示我們可以通過對腹水中單核細(xì)胞的數(shù)量或者活性來對免疫應(yīng)答系統(tǒng)進行功能檢測。因此，免疫活性細(xì)胞的免疫應(yīng)答功能的紊亂是子宮內(nèi)膜異位癥的病因機制這一觀點得到了越來越多學(xué)者的關(guān)注。在本實驗中我們通過對子宮內(nèi)膜異位癥患者及患有其他婦科疾病的女性PF巨噬細(xì)胞的表型和免疫活性的比較來研究子宮內(nèi)膜異位癥在免疫學(xué)中的易感性。

1 材料和方法

1.1 實驗對象

實驗組為患有子宮內(nèi)膜異位癥的患者，對照組為患有其他婦科疾病的患者并在術(shù)中排除子宮內(nèi)膜異位癥。實驗對象均排除妊娠及GnRH 興奮治療的患者。

1.2 實驗材料器械

PF于術(shù)中取自患者的腹腔液保存在肝素鈉真空采血管內(nèi)（武漢博士德生物公司）中。單克隆抗體（北京博奧森生物公司），F(xiàn)ITC-標(biāo)記的抗-CD14 單抗用于標(biāo)記單核細(xì)胞。PE-標(biāo)記的抗HLA-ABC和-DR 單抗用于評價抗原遞呈。流式細(xì)胞儀用于分析實驗。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗對象分組與處理：分為由子宮內(nèi)膜異位癥患者組成的實驗組及非子宮內(nèi)膜異位癥患者組成的對照組兩組，均來自佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科。實驗組有30例患有子宮內(nèi)膜異位癥的女性（其中包括8例Ⅰ期，12例Ⅱ期，7例Ⅲ期，3例Ⅳ期患者（根據(jù)美國生殖醫(yī)學(xué)會內(nèi)異癥評分方法）與對照組33例患有其他婦科疾病的女性（其中包括15例子宮肌瘤患者，11例卵巢囊腫患者，7例宮外孕患者）并且在術(shù)中排除子宮內(nèi)膜異位癥。實驗組患者平均年齡為39歲，對照組的平均年齡為38歲，無明顯差異。實驗對象均排除妊娠，近12個月內(nèi)接受過GnRH 興奮實驗的可能和能引起腹腔炎癥可能的慢性病。PF 均取于術(shù)中行使手術(shù)前，約5mL。

1.3.2 PFMC的制取：制備腹水單個核細(xì)胞（PFMC），首先將PF樣本約2mL放入離心機中，行2000r15min后棄上清。然后以5∶1 比例加入ACK 進行紅細(xì)胞裂解。10min后再次離心2000r15min后棄上清，用PBS漂洗兩次。

1.3.3 單克隆抗體反映標(biāo)記：每種單抗5μL 分別加入200μL PFMC中在室溫下反映1h。單抗反映后每組樣本放入離心機離心后加入0.5mL PBS混勻后即檢測分析。

1.4 流式細(xì)胞儀檢測

首先用散射光法設(shè)門，用FSC（正向散射光）和SSC（側(cè)向散射光）聯(lián)合設(shè)門。檢測出通過此區(qū)域的細(xì)胞所發(fā)生的熒光強度則及此區(qū)域的細(xì)胞數(shù)量。所以可以檢測出攜帶著HLA-ABC和-DR 陽性染色的巨噬細(xì)胞和CD14陽性的巨噬細(xì)胞量，并且計算出存在的百分比。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS用Student’s t-test檢驗來比較實驗組和對照組患者體內(nèi)HLA-ABC和-DR 的表達(dá)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。總體均數(shù)比較采用單因素方差分析。利用SPSS采用logistic回歸來檢驗免疫學(xué)參數(shù)和子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 免疫參數(shù)結(jié)果與分析

PF巨噬細(xì)胞CD14 為陽性，其中HLA-ABC和-DR的表達(dá)在子宮內(nèi)膜異位癥患者和對照組患者有很大的不同。子宮內(nèi)膜異位癥患者體內(nèi)HLA-ABC和-DR 的FI明顯低于對照組的。

2.2 HLA-ABC表達(dá)的結(jié)果分析

經(jīng)過流式細(xì)胞儀分析，CD14陽性的PF 巨噬細(xì)胞中表達(dá)HLA-ABC的百分比是：子宮內(nèi)膜異位癥實驗和對照組中分別為（98.7±1.0），（97.1±5.7），無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。HLA-ABC的FI在實驗組和對照組中的數(shù)據(jù)分別為（21.3±1.7），（12.9±1.5）。有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 HLA-DR

經(jīng)流式細(xì)胞儀分析，表達(dá)HLA-DR 的在CD14陽性的PF巨噬細(xì)胞中的百分比在實驗組和對照組中分別是（88.3±6.5），（75.2±5.0），有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。HLAABC的FI在實驗組和對照組中的數(shù)據(jù)分別為（2.9±0.5），（2.3±0.5）。有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組免疫參數(shù)經(jīng)流式細(xì)胞儀分析結(jié)果（±s）

表1 兩組免疫參數(shù)經(jīng)流式細(xì)胞儀分析結(jié)果（±s）

HLA 表達(dá)的結(jié)果分析：通過Student’s t-test計算得出在兩組數(shù)據(jù)中，巨噬細(xì)胞表達(dá)HLA-ABC 的百分比P＞0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。而兩組PF 巨噬細(xì)胞HLAABC 的FI，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。兩組中巨噬細(xì)胞表達(dá)HLA-DR 的百分比，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。兩組HLA-DR 的FI，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。logistic回歸證明這些免疫學(xué)參數(shù)是子宮內(nèi)膜異位癥的危險因素。

3 討論

關(guān)于巨噬細(xì)胞的宿主免疫應(yīng)答與子宮內(nèi)膜異位癥關(guān)系的研究得到了越來越多的關(guān)注。對于PF中的巨噬細(xì)胞的功能活性的研究，我們通過對HLA 的表達(dá)的檢測來估測抗原遞呈系統(tǒng)的功能。在免疫監(jiān)測系統(tǒng)中，存在于腹腔空洞內(nèi)的巨噬細(xì)胞會在外來抗原入侵時，在做出最初的免疫應(yīng)答過程中起到調(diào)節(jié)作用。在此過程中，HLA和協(xié)同刺激因子共同作用于以T 細(xì)胞的趨化作用為主要功能的免疫應(yīng)答的抗原的遞呈過程。近期的研究表明，因為巨噬細(xì)胞膜鑲嵌有脂筏，脂筏是一種可以識別兩種細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)。當(dāng)巨噬細(xì)胞遞呈抗原與T 細(xì)胞時，協(xié)同刺激因子做為一種黏附因子，集聚在脂筏上或附近并且與T 細(xì)胞上的配合基結(jié)合。由此，巨噬細(xì)胞膜上的脂筏與T 細(xì)胞膜的間隙變小，HLA 位于脂筏的中心，其可更快的將抗原信息遞呈給T 細(xì)胞。子宮內(nèi)膜異位癥患者PF巨噬細(xì)胞中HLA-ABC和-Dr細(xì)胞的FI降低以及HLA-Dr陽性細(xì)胞在巨噬細(xì)胞中的百分比的降低，說明子宮內(nèi)膜異位癥患者體內(nèi)抗原遞呈能力不足和對外源組織（如內(nèi)膜組織）免疫應(yīng)答功能減弱使得內(nèi)膜組織在腹腔內(nèi)殘留。子宮內(nèi)膜異位癥患者PF中巨噬細(xì)胞表達(dá)HLA 的減少的原因并不清楚。可能是因為內(nèi)異癥患者體內(nèi)的PB（外周血）中的巨噬細(xì)胞在變成PF 中的巨噬細(xì)胞前HLA 就已經(jīng)減弱；或者可能因為是腹腔內(nèi)的內(nèi)膜組織上的免疫抑制因子（如轉(zhuǎn)化生長因子）減弱了PF 巨噬細(xì)胞上HLA 的表達(dá)。通過logistic回歸證明了免疫學(xué)參數(shù)中HLA-ABC和-DR表達(dá)的降低與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生有關(guān)系。

經(jīng)血逆流學(xué)說及上皮化生學(xué)說均為子宮內(nèi)膜異位癥重要病理機制，無論那種學(xué)說是正確的，免疫損害，尤其是巨噬細(xì)胞免疫功能的損害可以更準(zhǔn)確的說明子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生原因。PF巨噬細(xì)胞中HLA 這種免疫學(xué)參數(shù)的紊亂可以為子宮內(nèi)膜異位癥的種植或上皮化生這些學(xué)說做出免疫學(xué)解釋。同樣對子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展有重要意義。

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