力克斯兔不同發育時期皮膚及毛囊組織形態的研究

張自強，劉玉梅，位 蘭，朱雪敏，李夢云，司麗芳，李 健

（河南科技大學動物科技學院，河南 洛陽 471003）

力克斯兔是一種典型的皮肉兼用兔，其皮具有絨毛短、被毛濃密、質地柔軟、平整、輕便、美觀、牢固等優點，經濟價值很高，是裘皮工業的重要原料之一。但是在養殖過程中，由于營養、疾病、創傷或其他原因，力克斯兔的皮膚發育極易受到內外環境的影響，進而影響到兔皮的質量。目前國內外關于力克斯兔生產性能的研究多集中在皮毛性狀分析、遺傳育種改良等方面[1]；對力克斯兔皮膚疾病的鑒別診斷也多停留在臨床癥狀、大體解剖層面[2]，而關于不同發育時期力克斯兔的皮膚及其附屬結構毛囊組織形態結構的研究報道較少。本試驗選用不同胎齡和出生后不同發育時期的力克斯兔的皮膚作為研究對象，石蠟切片后H.E.染色，觀察力克斯兔的皮膚從胚胎后期到出生后的生長發育過程中形態結構的變化，研究力克斯兔的皮膚及毛囊的發育規律，以期為力克斯兔的飼養、疾病的防治和生產實踐提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗試劑 蘇木精、伊紅、多聚甲醛、無水乙醇、0.5%鹽酸酒精分化液、二甲苯，中性樹膠、石蠟。

1.2 試驗儀器 KD-BM生物組織包埋機（科迪），RM2016切片機（LEICA），KD-T電腦生物組織烤片機（科迪），顯微鏡（Olympus）。

1.3 試驗動物 力克斯兔由河南科技大學動物科技學院試驗中心提供。妊娠20、26、29 d、出生后1、15、30、60、90 d的力克斯兔各6只。

1.4 標本的采集與固定 將妊娠20、26 d和29 d的雌兔處死，分別解剖取出胚胎，然后對各個時期的胚胎用多聚甲醛進行整體固定。48 h后再分別從各個時期的胎兔背部取下1 cm2大小的皮膚組織，轉入Bousin固定液中固定，以備試驗所用。出生后的利克斯兔取材，分別在出生1、15、30、60 d和90 d力克斯兔的皮膚背部選取一塊4 cm2大小皮膚塊并用Na2S脫毛劑脫毛，然后再分別取下一塊2 cm2大小的皮膚，立即放入Bousin固定液中進行固定。

1.5 不同發育時期八點黑力克斯兔皮膚組織切片的制作及H.E.染色 固定的材料分別經梯度乙醇脫水、常規石蠟包埋，連續切片，片厚7 μm，切片隔5取1，50℃溫箱拷片，備染。H.E.染色方法：將制備好的切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各脫蠟5 min，依次入梯度酒精復水，蒸餾水浸洗5 min；入蘇木精染色液5～10 min；1%鹽酸酒精分化20～40 s，流動自來水中藍化20～30 min；伊紅染色2～3 min；梯度酒精脫水；二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各5 min，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。

2 結果

2.1 胎兒期力克斯兔的皮膚組織形態特點 胚胎20 d（圖1、圖2）力克斯兔的皮膚表面平整，皮膚的發育已經出現表皮和真皮結構，表皮為單層或雙層立方上皮，與真皮間有明顯的界限。初級毛囊原基出現，真皮細胞排列疏松，為星狀原始間充質細胞,細胞與細胞之間間隙較大且真皮內出現毛細血管，真皮厚度明顯大于表皮厚度。

胚胎26 d（圖3、圖4）皮膚進一步發育，表面平整，表皮由單層立方變為復層扁平，表皮和真皮之間初步形成凸凹相間的形態結構，真皮乳頭層出現，毛囊初步形成，真皮內梭形細胞進一步增加排列較疏松，真皮層變厚。

胚胎29 d（圖5、圖6）隨著胎齡的延長，表皮分化明顯，角質層增厚，真皮層內疏松結締組織不斷增殖出現大量膠原纖維，其結締組織中的細胞數量減少，原始毛囊（初級毛囊）延長斜向下生長形成柄棒狀結構，次級毛囊進入真皮層形成管狀鞘囊。在真皮層內可見初級毛囊和次級毛囊，兩者數目相當。皮膚內未見到發育中的汗腺和立毛肌。

2.2 出生后不同時期力克斯兔的皮膚組織形態特點 出生后1 d（圖7、圖8）真皮層可觀察到許多棒狀毛囊，并有毛干形成，毛干開始長出皮膚表面。初級毛囊根部膨大形成毛球，毛球的基部出現內凹，周圍的成纖維細胞和結締組織向內遷入形成毛乳頭，次級毛囊數目增多。表皮層中基層、棘層、顆粒層和角化層的分化完成，角化層變得更厚。真皮網狀層增厚,膠原纖維束排列成為不規則致密結締組織，此時力克斯兔的皮膚組織結構特征接近成熟。

出生后15 d（圖9、圖10）可見表皮基底層為一層排列緊密呈立方狀的細胞。棘細胞層為2～3層呈不規則或多邊形細胞，比基底層細胞大，核呈圓形較大、染色較淺。顆粒層細胞由1～2層梭形細胞組成。角化層是由扁平狀細胞構成。初級毛囊的毛球上皮細胞已經分化為外根鞘和內根鞘的結構，次級毛囊發育成熟，密度進一步增大。

出生后30 d（圖11、圖12）皮膚中表皮和真皮進一步增厚，角質層更加明顯，可看到薄層皮下組織。毛干成簇分布，一般4～7根為一簇。

出生后60 d（圖13）皮膚的厚度基本不變，但角質層和皮下組織變厚。此時可見次級毛干數目大于初級毛干數目。

出生后90 d（圖14）此時皮膚厚度基本保持不變，次級毛囊密度進一步增大，皮膚發育接近完善。

3 討論

皮膚在維持機體內環境穩態和預防外來物入侵中發揮重要的作用。對于皮毛用動物而言,其皮毛有著重要的經濟價值，為了能更好的利用皮毛動物的皮和毛，科研工作者對常見的皮毛動物的皮膚及毛囊的發育過程和特點進行了大量的研究，如：Parry等研究了澳大利亞絨山羊出生后皮膚及毛囊的發育規律[3]；林吉茂等人研究了我國關中奶山羊胎兒皮膚發育的組織形態特點[4]；王博等人描述了小鼠皮膚及其毛囊早期發育的組織形態變化[5]。但是這些研究對象多集中在山羊、綿羊和模式動物小鼠上。力克斯兔作為皮肉兼用兔，其兔皮用途日益廣泛，目前對不同發育時期力克斯兔的皮膚及毛囊形態變化研究報道較少。本研究顯示，力克斯兔的皮膚和其他動物的一樣都是由表皮、真皮和皮下組織構成，其真皮乳頭層發達，由平行排列的膠原纖維束構成。胚胎20 d的皮膚表皮細胞為單層或雙層立方上皮，與真皮細胞間的界限明顯，真皮內出現大量發育中的毛細血管，此時初級毛囊的原基出現。本研究觀察到的表皮細胞和毛囊的原基的形成時間與趙玲輝[6]等的實驗結果相近，但后者并未提及毛細血管的出現。胚胎26 d時表皮的單層立方上皮變為復層扁平上皮，真皮內出現乳頭層，初級毛囊初步形成。這一實驗結果與劉立群[7]研究相似，但我們的結果顯示26 d時皮膚內沒有形成較完整的初級毛囊結構，也未見到汗腺的前體結構。胚胎29 d時，表皮角化層變厚，乳頭層明顯，可見分化的次級毛囊形成，皮膚進一步變厚。周勤飛[8]和伊俊[9]認為毛囊的形成是真皮成纖維細胞凝集后產生的趨化因子和調節因子誘導表皮細胞增生分化而形成初級毛囊，正在發育的初級毛囊靠近表皮的部分形成分支后再發育成次級毛囊。出生后1 d，力克斯兔的皮膚表皮的各層細胞基本發育完成，大多數初級毛囊和一部分次級毛囊發育基本成熟，毛囊的大小和毛干的粗細繼續發育但不會再有新的毛囊發生[10-11]。出生后15 d到出生后60 d初級毛囊密度和次級毛囊密度均在逐漸增加，但次級毛囊密度的增長速度大于初級毛囊。出生90 d時初級毛囊密度降低，次級毛囊密度增高，毛囊發育趨于穩定。

由此可知，胚胎后期（20～30 d）是力克斯兔的皮膚和其衍生物形成的重要時期，此時力克斯兔的皮膚處于不同結構的分化階段。表皮細胞由單層細胞變為多層細胞并形成了完整的表皮結構，同時真皮層也逐漸發育形成。力克斯兔的毛囊由皮膚生發層細胞強烈增殖而形成[12]并逐漸發育出現成初級毛囊和次級毛囊，出生后繼續發育直至發育完全。在皮膚和其衍生物的發育過程中，表皮先于其他組織發育，為胚胎期力克斯兔的其他組織器官的發育提供一個與外界隔離正常的良好環境。出生后的皮膚結構已基本發育完全，但真皮內的毛囊會繼續生長發育，90 d時毛囊發育處于穩定狀態。所以在力克斯兔的養殖過程中，家兔妊娠后期及仔兔出生后1個月內應加強飼養管理，保證良好的營養水平，這一階段對商品力克斯兔皮張的質量起著關鍵性的作用。

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