湖南綏寧青錢柳中槲皮素、山柰素含量測定

陳丹++史蕾喆++李柯++李若存

摘 要：目的：建立綏寧青錢柳中槲皮素和山柰素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），檢測波長360 nm。結果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍呈良好的線性關系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍呈良好的線性關系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD為1.15%；山柰素99.51%，RSD為2.05%。結論：該方法可靠、便捷，可以作為控制青錢柳藥材質量的方法。

關鍵詞：青錢柳 槲皮素 山柰素 高效液相色譜法

中圖分類號： R282 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青錢柳為胡桃科青錢柳屬植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我國獨有的單種屬植物，是國家重點保護的瀕危植物之一，屬三類保護植物。青錢柳廣泛分布于江西、浙江、江蘇、安徽、福建、臺灣、湖北、四川、貴州、云南等地海拔420～2500 m的山區、溪谷或石灰巖山地。后經調研發現，我省綏寧縣[1]亦有分布。研究表明青錢柳葉中富含黃酮、三萜、甾體類化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度約為蔗糖的250倍。這些化合物成分能有效降低甘三脂和膽固醇，使其具有降血壓、降血糖、降血脂的功能，同時對增強人體免疫力、抗氧化、抗衰老有獨特作用。本文采用高效液相色譜法對綏寧產青錢柳中黃酮類化合物進行了含量測定[4-7]，為進一步開發和利用青錢柳提供依據。

1 儀器、試劑與藥材

1.1 儀器

高效液相色譜儀（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）；EC2006色譜數據處理系統（大連依利特分析儀器有限公司）。槲皮素（批號100081-200907），供含量測定用；山柰素（批號110861-201209），供含量測定用，均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純（均為湖南匯虹試劑有限公司提供），水為重蒸餾水。藥材采自湖南綏寧縣，經湖南省中醫藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為青錢柳葉。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）為流動相；檢測波長為360 nm。理論塔板數按槲皮素峰計應不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備

取槲皮素對照品、山柰素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。對照品與供試品色譜圖分別見圖1、圖2。

2.4 線性關系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL進樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，槲皮素回歸方程為：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回歸方程為：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999結果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍內具有良好的線性關系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍內具有良好的線性關系。數據見表1，表2；標準曲線圖見圖3、圖4。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測定其峰面積積分值，其結果見表3，表4。

2.6 穩定性試驗

分別精密吸取供試品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h進樣，測定其峰面積積分值，結果見表5，表6。

2.7 重復性試驗

取同一批號藥材共6份，按上述方法測定其峰面積積分值，結果見表7，表8。

2.8 回收率試驗

精密稱取槲皮素含量為1.27 mg/g、山柰素含量為2.22 mg/g藥材約0.75 g，共6份，分別精密加入槲皮素對照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素對照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述測定法項下的方法測定含量，結果見表9、表10。

2.9 不同采收時間青錢柳藥材含量測定

分別取不同采收時間青錢柳葉粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，結果見表11。

3 討論

我們對湖南省綏寧縣產青錢柳葉不同采收期的含量結果表明，槲皮素與山柰素在藥材中的總量以6月份含量最高，依據二種成分的綜合含量，結合青錢柳的生長期、采收量及產地的氣候因素等，青錢柳的采收期以6月為宜。

參考文獻

[1] 曾躍輝，劉新華，鄭紅發，等.青錢柳資源利用與開發研究[J].湖南農業科學，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青錢柳化學成分研究[J].中國中藥雜志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黃錫山，陸園園，等.青錢柳化學成分的研究[J].中成藥，2008，30（2）：238-240.

[4] 酈宏巖，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC測定青錢柳中槲皮素和山柰素的含量[J].藥學與臨床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鵬，劉韶，李新中，等.HPLC測定地錦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中藥材，2005，28（8）：666-667.

[6] 楊燕飛.HPLC測定金膽片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成藥，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 鄭瑁，孫蘭香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素總含量的HPLC法測定[J].中國新藥雜志，2005，14（5）：592-594.endprint

摘 要：目的：建立綏寧青錢柳中槲皮素和山柰素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），檢測波長360 nm。結果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍呈良好的線性關系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍呈良好的線性關系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD為1.15%；山柰素99.51%，RSD為2.05%。結論：該方法可靠、便捷，可以作為控制青錢柳藥材質量的方法。

關鍵詞：青錢柳 槲皮素 山柰素 高效液相色譜法

中圖分類號： R282 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青錢柳為胡桃科青錢柳屬植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我國獨有的單種屬植物，是國家重點保護的瀕危植物之一，屬三類保護植物。青錢柳廣泛分布于江西、浙江、江蘇、安徽、福建、臺灣、湖北、四川、貴州、云南等地海拔420～2500 m的山區、溪谷或石灰巖山地。后經調研發現，我省綏寧縣[1]亦有分布。研究表明青錢柳葉中富含黃酮、三萜、甾體類化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度約為蔗糖的250倍。這些化合物成分能有效降低甘三脂和膽固醇，使其具有降血壓、降血糖、降血脂的功能，同時對增強人體免疫力、抗氧化、抗衰老有獨特作用。本文采用高效液相色譜法對綏寧產青錢柳中黃酮類化合物進行了含量測定[4-7]，為進一步開發和利用青錢柳提供依據。

1 儀器、試劑與藥材

1.1 儀器

高效液相色譜儀（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）；EC2006色譜數據處理系統（大連依利特分析儀器有限公司）。槲皮素（批號100081-200907），供含量測定用；山柰素（批號110861-201209），供含量測定用，均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純（均為湖南匯虹試劑有限公司提供），水為重蒸餾水。藥材采自湖南綏寧縣，經湖南省中醫藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為青錢柳葉。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）為流動相；檢測波長為360 nm。理論塔板數按槲皮素峰計應不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備

取槲皮素對照品、山柰素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。對照品與供試品色譜圖分別見圖1、圖2。

2.4 線性關系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL進樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，槲皮素回歸方程為：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回歸方程為：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999結果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍內具有良好的線性關系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍內具有良好的線性關系。數據見表1，表2；標準曲線圖見圖3、圖4。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測定其峰面積積分值，其結果見表3，表4。

2.6 穩定性試驗

分別精密吸取供試品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h進樣，測定其峰面積積分值，結果見表5，表6。

2.7 重復性試驗

取同一批號藥材共6份，按上述方法測定其峰面積積分值，結果見表7，表8。

2.8 回收率試驗

精密稱取槲皮素含量為1.27 mg/g、山柰素含量為2.22 mg/g藥材約0.75 g，共6份，分別精密加入槲皮素對照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素對照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述測定法項下的方法測定含量，結果見表9、表10。

2.9 不同采收時間青錢柳藥材含量測定

分別取不同采收時間青錢柳葉粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，結果見表11。

3 討論

我們對湖南省綏寧縣產青錢柳葉不同采收期的含量結果表明，槲皮素與山柰素在藥材中的總量以6月份含量最高，依據二種成分的綜合含量，結合青錢柳的生長期、采收量及產地的氣候因素等，青錢柳的采收期以6月為宜。

參考文獻

[1] 曾躍輝，劉新華，鄭紅發，等.青錢柳資源利用與開發研究[J].湖南農業科學，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青錢柳化學成分研究[J].中國中藥雜志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黃錫山，陸園園，等.青錢柳化學成分的研究[J].中成藥，2008，30（2）：238-240.

[4] 酈宏巖，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC測定青錢柳中槲皮素和山柰素的含量[J].藥學與臨床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鵬，劉韶，李新中，等.HPLC測定地錦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中藥材，2005，28（8）：666-667.

[6] 楊燕飛.HPLC測定金膽片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成藥，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 鄭瑁，孫蘭香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素總含量的HPLC法測定[J].中國新藥雜志，2005，14（5）：592-594.endprint

摘 要：目的：建立綏寧青錢柳中槲皮素和山柰素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱C18（Column 200×4.6mm，5μ），流動相：甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57），檢測波長360 nm。結果：槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍呈良好的線性關系，r=0.9997；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍呈良好的線性關系，r=0.9999；平均回收率：槲皮素100.69%，RSD為1.15%；山柰素99.51%，RSD為2.05%。結論：該方法可靠、便捷，可以作為控制青錢柳藥材質量的方法。

關鍵詞：青錢柳 槲皮素 山柰素 高效液相色譜法

中圖分類號： R282 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）09（c）-0234-04

青錢柳為胡桃科青錢柳屬植物Cyclocarya paliurus（Bata1）Iljinsk.它是我國獨有的單種屬植物，是國家重點保護的瀕危植物之一，屬三類保護植物。青錢柳廣泛分布于江西、浙江、江蘇、安徽、福建、臺灣、湖北、四川、貴州、云南等地海拔420～2500 m的山區、溪谷或石灰巖山地。后經調研發現，我省綏寧縣[1]亦有分布。研究表明青錢柳葉中富含黃酮、三萜、甾體類化合物、皂苷和香豆精等化合物[2-3]，其中三萜皂甙是主要甜味成分，甜度約為蔗糖的250倍。這些化合物成分能有效降低甘三脂和膽固醇，使其具有降血壓、降血糖、降血脂的功能，同時對增強人體免疫力、抗氧化、抗衰老有獨特作用。本文采用高效液相色譜法對綏寧產青錢柳中黃酮類化合物進行了含量測定[4-7]，為進一步開發和利用青錢柳提供依據。

1 儀器、試劑與藥材

1.1 儀器

高效液相色譜儀（PE200）；C18（Column 200×4.6 mm，5μ）色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）；EC2006色譜數據處理系統（大連依利特分析儀器有限公司）。槲皮素（批號100081-200907），供含量測定用；山柰素（批號110861-201209），供含量測定用，均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純（均為湖南匯虹試劑有限公司提供），水為重蒸餾水。藥材采自湖南綏寧縣，經湖南省中醫藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為青錢柳葉。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（43∶57）為流動相；檢測波長為360 nm。理論塔板數按槲皮素峰計應不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備

取槲皮素對照品、山柰素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1ml含槲皮素30 μg、山柰素48 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。對照品與供試品色譜圖分別見圖1、圖2。

2.4 線性關系考察

精密吸取槲皮素（C=30.4 μg/mL）、山柰素（C=48.46 μg/mL）的混合對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL進樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，槲皮素回歸方程為：Y=3198.1485X-23.8827，r=0.9997；山柰素回歸方程為：Y=3395.1112X-8.467，r=0.9999結果表明槲皮素在0.0608～0.3648 μg范圍內具有良好的線性關系；山柰素在0.0969～0.5815 μg范圍內具有良好的線性關系。數據見表1，表2；標準曲線圖見圖3、圖4。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測定其峰面積積分值，其結果見表3，表4。

2.6 穩定性試驗

分別精密吸取供試品溶液10 μL，于0、4、8、12、24 h進樣，測定其峰面積積分值，結果見表5，表6。

2.7 重復性試驗

取同一批號藥材共6份，按上述方法測定其峰面積積分值，結果見表7，表8。

2.8 回收率試驗

精密稱取槲皮素含量為1.27 mg/g、山柰素含量為2.22 mg/g藥材約0.75 g，共6份，分別精密加入槲皮素對照品溶液（c=0.95 mg/mL）、山柰素對照品（c=1.76 mg/mL）1.0 mL，按上述測定法項下的方法測定含量，結果見表9、表10。

2.9 不同采收時間青錢柳藥材含量測定

分別取不同采收時間青錢柳葉粉末（過三號篩）約1.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25 mL，精密加入鹽酸5 mL，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉移至50 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，結果見表11。

3 討論

我們對湖南省綏寧縣產青錢柳葉不同采收期的含量結果表明，槲皮素與山柰素在藥材中的總量以6月份含量最高，依據二種成分的綜合含量，結合青錢柳的生長期、采收量及產地的氣候因素等，青錢柳的采收期以6月為宜。

參考文獻

[1] 曾躍輝，劉新華，鄭紅發，等.青錢柳資源利用與開發研究[J].湖南農業科學，2008（4）：142-144.

[2] 易醒，石建功，周光雄，等.青錢柳化學成分研究[J].中國中藥雜志，2002，27（1）：43-45.

[3] 李俊，黃錫山，陸園園，等.青錢柳化學成分的研究[J].中成藥，2008，30（2）：238-240.

[4] 酈宏巖，朱惠芬，耿秋霞，等.HPLC測定青錢柳中槲皮素和山柰素的含量[J].藥學與臨床研究，2009，17（4）：300-302.

[5] 雷鵬，劉韶，李新中，等.HPLC測定地錦草中槲皮素、山柰素的含量[J].中藥材，2005，28（8）：666-667.

[6] 楊燕飛.HPLC測定金膽片中山柰素和槲皮素的含量[J].中成藥，2005，27（11）：1263-1265.

[7] 鄭瑁，孫蘭香，王紫秋，等.油菜花粉中槲皮素和山柰素總含量的HPLC法測定[J].中國新藥雜志，2005，14（5）：592-594.endprint