前列腺癌組織中 TGF-β1、Ki-67的表達變化及意義

李丹丹，王迎賓，李 驥，康紹叁，劉 巖，吳 蒙

(1唐山市協和醫院，河北唐山063000;2唐山市人民醫院;3河北聯合大學附屬醫院;4河北聯合大學病理教研室;5唐山市職業技術學院)

前列腺癌是男性常見的泌尿生殖系統惡性腫瘤，其發病率在歐美國家最高，在我國也呈逐年上升的趨勢。轉化生長因子(TGF)-β是一種多肽類細胞因子，是目前已知與腫瘤關系極為密切的代表性細胞因子之一，主要存在形式為TGF-β1，后者對不同細胞產生不同的生物學效應，即促進或抑制細胞生長［1］。在正常上皮組織中，TGF-β1具有抑制細胞增殖作用［2］，但在惡性腫瘤中卻可通過促進腫瘤血管生成調節細胞外基質狀態、誘導腫瘤細胞上皮—間質轉化、抑制免疫功能，進而促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移［3～5］。Ki-67 是增殖細胞核抗原，可以反映腫瘤細胞的增殖活性。2013年5月，我們采用免疫組化法檢測了前列腺癌組織內TGF-β1及Ki-67的表達變化，旨在進一步探討前列腺癌的發生、發展及侵襲轉移機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2005～2010年于我院手術治療的前列腺患者50例，年齡59～85歲(平均72.6歲)，術前均未行內分泌治療、放療和化療。均經病理檢查確診為前列腺癌(均為腺癌)，其中病理分級按Gleason評分標準為高分化12例、中分化17例、低分化21例;臨床分期按Whitmore-Jewett標準A+B期19例、C期13例、D期18例;有骨轉移18例。選擇同期行手術治療的25例前列腺增生(BPH)患者為對照，年齡56～87歲，平均69.8歲。兩組均留取手術時切除標本，經10%甲醛溶液固定、常規石蠟包埋。

1.2 主要試劑 即用型兔抗人TGF-β1、Ki-67單克隆抗體、免疫組化染色SP試劑盒購自武漢博士德生物工程公司;即用型DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 TGF-β1及Ki-67檢測方法 采用免疫組化SP法。取上述標本4 μm厚連續切片，經二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后行免疫組化染色。抗原修復采用高溫高壓修復法，蒸氣冒出持續3 min后自然冷卻，其后按試劑盒說明書進行DAB顯色、蘇木素復染、中性樹脂封片、顯微鏡下觀察。用PBS取代一抗作陰性對照，已知陽性切片作陽性對照。TGF-β1陽性表達主要位于細胞質、少量位于細胞核，陽性細胞判定標準為胞質呈淡黃色至棕褐色，其中染色強度以無色計0分、淡黃色計1分、棕黃色計2分、棕褐色計3分，陽性細胞數 ＜5%計0分、5%～25%計1分、26%～50%計2分、﹥50%計3分，上述兩項得分之和≥3分判為陽性染色、＜3分者判為陰性染色。Ki-67陽性表達位于細胞核，呈棕色顆粒狀，任選5個高倍視野、計數100個腫瘤細胞中陽性細胞所占百分比，即為Ki-67標記指數。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計學軟件進行數據處理。計量資料以±s表示，比較用成組t檢驗;計數資料的比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法;TGF-β1與Ki-67的相關性分析采用Mann-Whitney U檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TGF-β1、Ki-67在前列腺癌組織及 BPH 組織中的表達 前列腺癌組織及BPH組織中TGF-β1陽性表達者分別為35 例(70.00%)、6 例 (24.00%)，兩者陽性率比較，P ＜0.01(χ2=14.231);兩組織中Ki-67 標記指數分別為 20.26 ±9.15、3.80 ±2.18，兩者比較，P ＜0.01(t=-8.843)。

2.2 TGF-β1、Ki-67 表達與前列腺癌臨床病理參數的關系 TGF-β1表達與前列腺癌分化程度、臨床分期及骨轉移均有關，P 均 ＜0.05(χ2值分別為7.059、4.402、4.778);Fisher確切概率法顯示，高、低分化者比較P＜0.05。Ki-67標記指數與前列腺癌分化程度(t值在高、低分化者13.828，高、中分化者為-7.227 ，中、低分化者為 -9.005)、臨床分期(t值為-9.553)及骨轉移(t值為6.310)均有關，P均＜0.01。詳見表1。

表1 TGF-β1、Ki67表達與前列腺癌臨床病理參數的關系

2.3 前列腺癌組織中TGF-β1與Ki-67表達的相關性 前列腺癌組織中TGF-β1陽性和陰性表達者的Ki-67標記指數分別為 24.57 ±7.05、10.2 ±4.18，Mann-Whit-ney U 檢驗顯示，Z=-5.141(P＜0.01)。

3 討論

TGF-β是一種由112個氨基酸組成的同源二聚體蛋白，為調節細胞生長和分化的細胞因子超家族成員。幾乎所有的正常細胞和腫瘤細胞均能分泌TGF-β，后者在體內通過自分泌和旁分泌作用廣泛參與機體的各種生理病理過程。目前，在哺乳動物中僅監測到 TGF-β 的三種不同亞型，即 TGF-β1、TGF-β2和 TGF-β3，其中 TGF-β1是主要存在形式，其相關研究也最多。研究［6］發現，TGF-β1可對腫瘤表現出相反作用，其在腫瘤發生早期可通過阻斷細胞自G1期進入S期抑制腫瘤細胞生長，在腫瘤晚期則可通過刺激血管生成、促進細胞擴散、抑制免疫及合成細胞外基質等促進腫瘤的生長、浸潤及轉移而表現出惡性特征。Hsing等［7］將 TGF-β1作用于體外培養的前列腺細胞，結果發現TGF-β1具有直接誘導前列腺上皮細胞調亡的作用。另有研究［8］發現，TGF-β在前列腺癌的發生、發展中具有雙重作用，其可抑制正常前列腺上皮和早期前列腺癌細胞的增殖，而在前列腺癌進展期則可促進腫瘤的侵襲、轉移。Ki-67是一種與細胞周期相關的蛋白質，其在正常組織中不表達、在多種腫瘤細胞中高表達，其功能與有絲分裂密切相關(但確切機制尚不清楚)，目前已經被廣泛用作腫瘤細胞增殖情況的判斷指標。本研究顯示，前列腺癌組織中TGF-β1陽性表達率及Ki-67標記指數均顯著高于BPH組織。提示前列腺癌的發生可能與TGF-β1過表達引起細胞增殖與凋亡失衡、細胞生長失去控制后癌變密切相關。

研究［9］發現，半數以上前列腺癌患者的血漿TGF-β1濃度升高與前列腺癌浸潤、精囊腺累及、淋巴轉移相關;TGF-β1可促進前列腺癌細胞的生長、增加前列腺癌的侵襲能力［10，11］。此外，TGF-β1與信號調節蛋白可促進癌細胞的骨轉移［12］，而當骨組織被吸收溶解時從骨基質中釋放出來，進一步為腫瘤細胞的生長和定植提供營養［13］。Ki-67標記指數與腫瘤細胞的增殖及腫瘤的臨床分期、轉移、預后密切相關［14］。本研究結果顯示，TGF-β1表達和Ki-67標記指數均隨前列腺癌分化程度降低、臨床分期進展及骨轉移的出現而增高，且二者在前列腺癌組織中的表達具有相關性。提示TGF-β1表達越高，前列腺癌細胞的增殖能力越強;在進展期的前列腺癌組織中，TGF-β1可促進癌細胞增殖及腫瘤的臨床進展。

綜上所述，前列腺癌組織中TGF-β1和Ki-67表達上調，此在前列腺癌的發生、發展、侵襲轉移中具有重要作用。

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