化學抗菌劑對哈茨木霉防治魚腥草白絹病的協同作用

伍賢進，牛友芽，周 ，魏 林，李勝華，魏 麟

(1.懷化學院 生命科學系/民族藥用植物資源研究與利用湖南省重點實驗室/湘西藥用植物與民族植物學湖南省高校重點實驗室，湖南 懷化 418008;2.湖南省植物保護研究所，湖南 長沙 410125)

魚腥草(Houttuynia cordataThunb.)為三白草科蕺菜屬多年生藥食兼用草本植物[1].研究和臨床實踐表明，魚腥草具有抗菌[1，2]、抗炎[1，3]、抗病毒[1，4]、抗氧化[5]等多種藥理作用，能清熱解毒、消腫排膿、利尿通淋，可用于治療肺膿潰瘍、肺熱咳喘、熱痢熱淋、水腫、腳氣、尿路感染、白帶過多、癰腫瘡毒等癥[1].魚腥草嫩莖葉和根狀莖風味獨特、營養豐富、養生保健作用良好，是頗具特色的食品，而且根狀莖一年四季可采[1].因此，魚腥草用量很大，湖南、貴州、四川等地均進行了大面積人工栽培[1，6].野生魚腥草對病蟲害的抵抗力較強，很少發生病蟲危害，但人工栽培后白絹病的發病非常普遍，可導致成片死亡，嚴重影響產量和品質[1，6，7，8].但目前對魚腥草白絹病的防治并無十分有效的辦法[1，6，7，8，9]，而且由于安全性的需要，魚腥草病害防治用藥要求十分嚴格[1，8，9].生物防治和選擇低毒、低殘留的化學藥劑是魚腥草白絹病防治的重要措施[1，8，9].木霉菌是自然界中普遍存在的一類真菌，大多數對植物病原真菌具有拮抗作用[10，11].哈茨木霉是木霉菌屬中研究較多且已走向商品化的種群，其安全性和有效性已廣為認可，在花生、辣椒白絹病防治中已取得較好效果[12，13]，對魚腥草白絹病的防治也有報道[6，14].三唑酮是一種高效、低毒、低殘留的殺菌劑，已證明對魚腥草白絹病病原菌有一定的抑菌效果[1，8].雖然三唑酮對包括哈茨木霉在內的真菌有一定抑制作用，但也有其能增強哈茨木霉防治辣椒白絹病的報道[13]，但應用到魚腥草中效果如何還有待研究.為了能充分發揮化學防治和生物防治的各自優勢，尋找防治魚腥草白絹病的安全有效方法，本研究探討了三唑酮對哈茨木霉防治魚腥草白絹病的協同作用.

1 材料與方法

1.1 魚腥草與哈茨木霉

供試魚腥草(Houttuynia cordataThunb.)品種為懷化學院選育的“湘白魚腥草” (湖南省作物品種審定委員會，品種登記號:XPD017-2009)，用根狀莖為繁殖材料，按規范化栽培技術規程要求栽培于懷化市鶴城區楊村鄉湖南正清制藥集團魚腥草規范化栽培基地[1].

哈茨木霉(Trichoderma huzirum)T2-16 由湖南省植物保護研究所提供.

1.2 培養基

PDA 培養基:馬鈴薯200 g、蔗糖或葡萄糖20 g、瓊脂15～20 g、蒸餾水1 000 ml.

1.3 魚腥草白絹病病原菌的分離

在栽培基地取患白絹病的魚腥草植株，在超菌工作臺中用剪刀將莖剪成約0.5 cm 長的小段，將小段緣縱切面剪開，放入75%的酒精中浸泡1-2 min 后，取出放入無菌水中清洗3次，用鑷子夾入PDA 培養基中培養，每皿放入4 片，成正方形排列，于27 ±1℃恒溫培養箱中恒溫培養3 d，待培養皿中長出輻射狀的菌絲，再用接種針挑取無污染的菌絲放入另一PDA 平板培養基中再培養3 d，即分離得到白絹病病原菌.

1.4 哈茨木霉協同化學抗菌劑的篩選

根據魚腥草化學防治的情況[1，8，9]，以下化學抗菌劑用于協同抗菌劑的候選.50% 多菌靈可濕性粉劑、25%甲霜靈可濕性粉劑 (上海脫聯化工有限公司)，15%三唑酮可濕性粉劑 (江蘇七洲綠色化工有限公司)，70%施普樂甲托超微復合可濕性粉劑 (簡稱“甲托”，天津施普農藥技術發展有限公司)，40%土凈凈粉劑(山西臨汾有機化工廠).

分別將5種化學抗菌劑配制濃度為50 μg/ml的PDA 培養基，將白絹病病原菌和哈茨木霉T2-16 接種到培養基中培養觀察菌絲的生長情況及菌核出現的情況，篩選出白絹病生長抑制性強但對哈茨木霉T2-16的生長的抑制性較弱的化學抗菌劑，每種抗菌劑均重復3次.

1.5 化學抗菌劑與哈茨木霉對魚腥草白絹病病原菌協同抑制作用

在PDA 平板培養基上，一端接種已培養3 d的直徑為5 mm的哈茨木霉菌塊，對稱一端接種相同條件下培養3 d的直徑亦為5 mm的魚腥草白絹病病原菌塊，在25℃下恒溫培養，觀察哈茨木霉對白絹病病原菌生長的影響情況.另用含有濃度為50 μg/ml 篩選出的化學抗菌劑的PDA 平板培養基上重復同樣操作.兩種培養基下均以不接種哈茨木霉為對照，所有處理均在25℃下恒溫培養，觀察菌苔的生長情況以及菌核的出現情況，每個處理均重復5次.

1.6 魚腥草白絹病的協同防治

1.6.1 哈茨木霉孢子粉制劑的制備

將稻草秸稈粉碎成粉末，按照1∶0.6 比例加入濃度為5%的(NH4)2SO4溶液，攪拌均勻，用罐頭瓶分裝，高壓蒸汽滅菌并冷卻至室溫后接種哈茨木霉，27±1℃恒溫箱中培養培養7 d，即得到深綠色木霉孢子粉制劑，培養期間每天將罐頭瓶搖勻.

1.6.2 白絹病菌核制備

將白絹病病原菌絲在PDA 平板培養基中培養7 d至菌絲上布滿深褐色顆粒狀菌核.

1.6.3 魚腥草白絹病的防治

將生長良好的盆栽魚腥草接種白絹病菌核培養3 d后分成A、B、C、D 四組，每組四盆，進行如下處理:A組每盆噴灑濃度為250 μg/ml的三唑酮溶液;B組每盆按30 g/m2播撒哈茨木霉孢子粉;C組每盆同時噴灑250 μg/ml的三唑酮溶液和播撒30 g/m2哈茨木霉孢子粉;D組盆為對照，不做任何處理.觀察防治效果.

防治效果= (對照發病率-處理發病率)/對照發病率×100%

2 結果與分析

2.1 哈茨木霉和魚腥草白絹病病原菌在PDA 培養基的生長情況

圖1說明，哈茨木霉和魚腥草白絹病病原菌均能在PDA 培養基上迅速生長，培養5 d 就幾乎能將直徑為9 cm的培養皿長滿.

圖1 哈茨木霉和魚腥草白絹病病原菌在PDA 培養基中的生長情況

2.2 化學抗菌劑對魚腥草白絹病病原菌和哈茨木霉生長的影響

表1顯示不同化學抗菌劑對魚腥草白絹病病原菌生長的影響差異較大，土凈凈的抑制作用最強，其次為三唑酮和甲托，而甲霜靈和多菌靈的抑制作用則不很明顯.而對于哈茨木霉，5種化學抗菌劑均能抑制其生長，作用大小依次為土凈凈＞甲托＞甲霜靈＞多菌靈＞三唑酮(表2).鑒于三唑酮對哈茨木霉生長的抑制作用較小，而且對魚腥草中白絹病病原菌生長的抑制作用較強，故可作為和哈茨木霉協同防治魚腥草白絹病的化學抗菌劑.

表1 不同化學抗菌劑對魚腥草白絹病病原菌生長直徑的影響(單位:cm)

表2 不同化學抗菌劑對中哈茨木霉生長直徑的影響(單位:cm)

2.3 三唑酮協同哈茨木霉對魚腥草白絹病病原菌生長的影響

表3說明，哈茨木霉對魚腥草白絹病菌生長有很強的拮抗作用，無哈茨木霉時培養4-5 d 病菌即長滿培養皿并形成菌核，7 d 后菌核密布，而接種了哈茨木霉的培養皿在生長第2 d 兩種菌的菌落就開始接觸，之后白絹病病原菌菌落逐漸變小，到第5 d 病菌菌落僅為對照的1/2，且菌絲細弱、色淡、不產生菌核，到第7 d 時，病原菌菌絲幾乎全部死亡.

表3 哈茨木霉對魚腥草白絹病病原菌生長的抑制作用

用50 μg/ml 三唑酮配制的PDA 培養基的培養結果見表4，比較表3和表4結果明顯發現，加入三唑酮后魚腥草白絹病病原菌生長所受抑制作用更明顯，病菌衰退時間變短，菌核出現的時間也進一步推遲，說明哈茨木霉與三唑酮對魚腥草白絹病病原菌的生長抑制作用具有明顯的正協同作用.

表4 哈茨木霉及三唑酮對魚腥草白絹病病原菌生長的協同抑制作用

2.4 三唑酮與哈茨木霉對魚腥草白絹病的協同防治作用

表5顯示，未經三唑酮或哈茨木霉防治的對照魚腥草均發生了白絹病，說明接種十分成功，三唑酮、哈茨木霉對魚腥草弊絹病均有明顯的防治作用，可降低發病率，延遲發病時間.從防治率和延遲發病時間兩方面看，三種處理的防治效果依次均為:三唑酮+哈茨木霉＞三唑酮＞哈茨木霉，說明三唑酮與哈茨木霉在魚腥草白絹病防治上具有良好的正協同作用.

表5 哈茨木霉與三唑酮對魚腥草白絹病的協同防治作用

3 討論

白絹病是魚腥草主要病害，且整個生育期都能危害，嚴重時能造成大面積減產.雖然化學藥劑對魚腥草白絹病具有較好的防治效果，但存在著持效期短，環境污染等問題[1，8，9].而且，因為藥用和食用的特殊要求，安全性是魚腥草化學防治需要考慮的首要問題，人工栽培魚腥草白絹病的防治是一個較大的難題.本試驗結果表明，土凈凈、甲托、三唑酮等化學抗菌劑對魚腥草白絹病病原菌生長有較強的抑制作用，哈茨木霉對魚腥草白絹病病原菌生長和魚腥草白絹病的發生也有較強的抑制作用，這與前人的研究結果一致[1，6，9].已有研究發現，三唑酮對木霉防治辣椒白絹病有較好的協同作用[13].本研究表明，三唑酮對魚腥草白絹病病原菌的生長有較強的抑制作用，但對哈茨木霉菌生長的抑制作用則較小，而且三唑酮與哈茨木霉在防治魚腥草白絹病方面具有明顯的正協同作用，這一研究結果為魚腥草生產中提供了一個相對高效、安全的白絹病防治方案.

化學抗菌劑與哈茨木霉協同防治魚腥草白絹病可同時發揮化學抗菌劑起效快、生物防治持續時間久的兩種優勢，而且哈茨木霉還有促進魚腥草生長發育的作用[14].因此，根據本研究和前人研究結果，在魚腥草人工栽培中多使用哈茨木霉對于提高生產效益是十分有利的.但鑒于白絹病的發病特點，在魚腥草生產中，還必須貫徹“預防為主、綜合防治”的策略，充分發揮物理防治、生物防治、化學防治的各自優勢，做到取長補短、優勢互補，才能使白絹病控制達到理想狀態，且符合中藥材和食品的生產要求.

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