中藥商陸利尿作用的實(shí)驗(yàn)研究

賈金萍，邢 婕，秦雪梅(山西大學(xué)中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，太原 030006)

中藥商陸(Radix Phytolaccae)為商陸科植物商陸(Phytolacca acinosa Roxb.)或垂序商陸(Phytolacca americana L.)的干燥根，為傳統(tǒng)中藥，歷版中國藥典均有收載，具有瀉下逐水、解毒散結(jié)之功效，用于水腫漲滿，大便秘結(jié)，小便不利;外治癰腫。臨床上常用于腎性、心源性及肝性腹水［1，2］。第二軍醫(yī)大學(xué)的易揚(yáng)華教授發(fā)現(xiàn)商陸皂苷及其皂苷元均無利尿作用［3］。目前，有關(guān)商陸利尿活性部位系統(tǒng)研究還未見報(bào)道。本文研究了商陸不同部位的利尿作用，比較其作用強(qiáng)度，為探討傳統(tǒng)中藥商陸的利尿活性部位及機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康Wistar大鼠，雄性，體重(250±20)g，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.1.2 藥物與試劑 商陸:采購于河南省禹州市中藥材市場，經(jīng)山西省藥品檢驗(yàn)所中藥室鑒定為商陸科植物垂序商陸(Phytolacca americana L.)的干燥根;氫氯噻嗪(山東魯南制藥廠);生理鹽水(山東華魯制藥有限公司);其他試劑均為分析純。

1.1.3 儀器 5 L超臨界萃取裝置:江蘇華安超臨界萃取公司生產(chǎn);大鼠代謝籠:淮北正華生物儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 商陸不同部位制備 取商陸藥材粗粉5 000 g，依次用超臨界CO2流體、正丁醇、水提取;收集超臨界CO2萃取部位(S-1-1);再將正丁醇、水提取提取液濃縮至膏狀，真空干燥后，得到正丁醇部位(S-1-2)及水部位(S-1-3)。另取商陸藥材細(xì)粉70 g，經(jīng)熾灼燃燒灰化至恒重，得到商陸灰分(S-1-4)。再將正丁醇提取物(S-1-2)分成兩份，分別以溶劑法和酸堿法進(jìn)行分離。一份采用溶劑法分離，即將正丁醇提取物依次用乙醚、乙酸乙酯超聲振蕩提取，分別濃縮，干燥，得到乙醚部位(S-2-1)、乙酸乙酯部位(S-2-2)及正丁醇?xì)堄嗖课?S-2-3)。另一份采用酸堿法分離，將正丁醇提取物采用酸、堿及陽離子交換樹脂處理，得到兩部分，其中一部分經(jīng)檢測主要含生物堿成分，即商陸粗生物堿部位(S-3-1)。另一部分經(jīng)檢測主要含皂苷類成分，即商陸粗皂苷部位(S-3-2)。再將商陸粗生物堿和商陸粗皂苷按商陸生藥材量1∶1混合得到商陸粗生物堿和粗皂苷的混合部位(S-3-3)。樣品制備流程見圖1。

圖1 樣品制備流程圖Figure 1 The process of preparation of different fractions

1.2.2 供試藥液的制備 將1.2.1得到的商陸各部位用含0.3%CMC-Na生理鹽水配制成相當(dāng)于商陸原藥材17 g/100 ml的混懸液。陽性對照藥氫氯噻嗪，配制成 0.4 mg/ml的0.3%CMC-Na 生理鹽水液，備用。

1.2.3 篩選合格實(shí)驗(yàn)動物 取健康雄性Wistar大鼠，體重(250±20)g，按照隨機(jī)數(shù)表放入已標(biāo)號的代謝籠(l只/籠)，喂養(yǎng)1-2 d，自由飲水，觀察大鼠尿量是否穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)前18 h禁食，自由飲水。用藥前按2.5 ml/100 g生理鹽水灌胃大鼠，收集2 h的尿量，尿量超過生理鹽水灌胃量40%者為合格動物［4，5］。

1.2.4 利尿?qū)嶒?yàn)［6-8］經(jīng)篩選合格的大鼠，隨機(jī)分組，其中包括空白組(0.3%CMC-Na生理鹽水)，陽性對照組(氫氯噻嗪)及商陸各部位組。實(shí)驗(yàn)前大鼠18 h禁食不禁水。實(shí)驗(yàn)時(shí)，先以2.5 ml/100 g灌胃給予生理鹽水，30 min后，分別按2.5 ml/100 g灌胃給予0.3%CMC-Na生理鹽水、氫氯噻嗪及商陸各部位。給藥后壓迫大鼠下腹，使膀胱內(nèi)余尿排盡，置代謝籠中，開始計(jì)時(shí)，每隔1 h記錄1次尿量，記錄7 h，分別計(jì)算0-2 h尿量，2-7 h及0-7 h累積尿量。

2 結(jié)果

2.1 商陸不同極性部位對大鼠尿量的影響

商陸超臨界CO2萃取物(S-1-1)、商陸正丁醇提取物(S-1-2)、商陸水提取物(S-1-3)及商陸灰分(S-1-4)對生理鹽水負(fù)荷大鼠累積排尿量的影響，結(jié)果見圖2。從0-2 h累積尿量得出，S-1-1不僅沒有促進(jìn)大鼠排泄尿量的作用，還有一定的抑制趨勢。S-1-2有一定的利尿作用，但沒有氫氯噻嗪強(qiáng)。S-1-3及S-1-4均有一定的利尿趨勢，可能與其中含有無機(jī)鹽成分有關(guān)。從2-7 h累積尿量得出，S-1-2與空白對照組、氫氯噻嗪組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，說明S-1-2有明顯的利尿作用。其他組均與空白對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。從0-7 h累積尿量看，S-1-2與氫氯噻嗪作用相當(dāng)，與空白組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，說明S-1-2能顯著增加生理鹽水負(fù)荷大鼠的尿量，且與氫氯噻嗪相比利尿作用緩和持久。而S-1-1與空白組比較沒有顯著性差異(P＞0.05)，與氫氯噻嗪組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，說明S-1-1沒有利尿作用;S-1-3及S-1-4均與空白組和氫氯噻嗪組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，說明S-1-3和S-1-4對生理鹽水負(fù)荷大鼠尿量有一定影響。

圖2 商陸不同極性部位對大鼠排尿量的影響Figure 2 Effect of different fractions of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

2.2 商陸正丁醇提取物不同萃取部位對大鼠尿量的影響

從圖3得出，通過0-2 h，2-7 h及0-7 h大鼠的累積尿量，商陸乙醚提取物(S-2-1)、乙酸乙酯提取物(S-2-2)與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)，與氫氯噻嗪組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，說明S-2-1、S-2-2無利尿作用。而正丁醇?xì)堄辔?S-2-3)，在0-2 h與空白對照組相比差異均無顯著性(P＞0.05)，與氫氯噻嗪組有顯著性差異;在2-7 h，與空白對照組有顯著性差異，說明S-2-3具有一定的利尿作用;從0-7 h累計(jì)尿量看，S-2-3與空白對照組和氫氯噻嗪組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說明S-2-3有一定利尿趨勢。

圖3 商陸正丁醇部位的不同萃取部位對大鼠尿量的影響Figure 3 Effect of different fractions of n-butylalcohol fractions of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

2.3 商陸粗生物堿與粗皂苷對大鼠尿量的影響

從圖4 看出，商陸粗皂苷(S-3-1)和商陸粗生物堿(3-3-2)對生理鹽水負(fù)荷大鼠無利尿作用。而商陸總皂苷和總生物堿混合物(S-3-3)在0-7 h的利尿作用與氫氯噻嗪相當(dāng)(P＞0.05)，而0-2 h利尿作用比氫氯噻嗪組弱，在2-7 h利尿作用強(qiáng)于氫氯噻嗪(P＜0.05)。說明S-3-3的利尿作用與S-1-2作用一致，能顯著增加生理鹽水負(fù)荷大鼠的尿量，但與氫氯噻嗪相比利尿作用緩和持久。

圖4 商陸粗皂苷、粗生物堿對大鼠尿量的影響Figure 4 Effect of crude alkaloids and crude saponins of Phytolacca americana L.on urinary volume in rats

3 討論

中藥商陸國內(nèi)外自古均用作利尿劑，在臨床上廣泛用于治療腎性、心源性及肝性腹水。但目前缺乏對商陸利尿作用物質(zhì)基礎(chǔ)的研究。通過本研究表明，商陸利尿的物質(zhì)基礎(chǔ)可能是商陸正丁醇提取物中商陸粗皂苷和粗生物堿的混合物，而且發(fā)現(xiàn)商陸粗皂苷和粗生物堿單獨(dú)使用對大鼠尿量沒有明顯的影響，推測可能是商陸粗生物堿和粗皂苷成分之間相互協(xié)同、相互促進(jìn)類似復(fù)方的作用，并驗(yàn)證了商陸在臨床上用于治療水腫的合理性。同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)商陸粗皂苷能導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)腹瀉的現(xiàn)象，而與粗生物堿混合使用后，大鼠糞便正常，說明商陸成分之間存在減毒的作用。并再次驗(yàn)證了商陸皂苷無利尿作用。另外，商陸灰分對大鼠排尿量有一定影響，但作用較弱，說明商陸中無機(jī)成分不是商陸利尿的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，可能起附加作用，與文獻(xiàn)報(bào)道［9-11］一致;商陸與氫氯噻嗪相比，商陸利尿作用緩和持久，故可避免西藥利尿作用快帶來的電解質(zhì)紊亂等副作用，尤其對于治療慢性水腫疾病研究具有一定價(jià)值。

［1］國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草精選本(上冊)［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998:372-381.

［2］李忠芳，田耀平.中藥商陸的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，19(5):108-112.

［3］易揚(yáng)華，王祝祿.商陸有效成分研究［J］.中草藥，1984，15(2):7-11.

［4］ 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:33.

［5］王蕾，姚東云，馬紅梅，等.中藥利尿藥理實(shí)驗(yàn)動物篩選方法探討［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2006，16(11):694-696.

［6］孫艷，張琳，王啟隆，等.4種茶葉水提物的利尿作用［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，28(12):973-975.

［7］吳燕，歐陽臻，趙明，等.桂苓神術(shù)湯及其有效部位的利尿作用［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(4):169-172.

［8］武蕾蕾，才玉婷，常樂，等.錦燈籠醇提取物對大鼠的利尿作用研究［J］.牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，32(2):2-6.

［9］ 原思通，王祝舉，程明.中藥商陸的研究進(jìn)展(Ⅰ)［J］.中藥材，1991，14(1):46-49.

［10］原思通，王祝舉，程明.中藥商陸的研究進(jìn)展(Ⅱ)［J］.中藥材，1991，14(3):46-48.

［11］原思通，王祝舉，程明.中藥商陸的研究進(jìn)展(Ⅲ)［J］.中藥材，1991，14(4):42-45.