原子吸收光譜法測定血清中鋰含量

盧永翎 杭太俊 李丙英 王 敏 張義華

（1.南京師范大學金陵女子學院，江蘇 南京 210097；2.中國藥科大學藥物分析教研室，江蘇 南京 210009；3.江蘇恩華藥業股份有限公司，江蘇 徐州 221007）

碳酸鋰是典型的心境穩定劑，不僅能抗躁狂發作，還能預防雙相情感性精神障礙的復發。碳酸鋰治療窗較窄，美國精神病學協會推薦有效濃度為0.5～1.2mmol/L，最佳治療范圍為0.6～0.7mmol/L，所以臨床治療時需對患者進行血鋰濃度監測，避免出現中毒反應。血清中鋰離子的測定主要采用火焰原子發射法（AES）［1］、火焰原子吸收法（AAS）［2－4］和離子選擇電極法（ISE）［5］，但已有文獻的報道中樣品均采用直接稀釋的方法測定，血清中的蛋白質及內源性物質可能會對測定造成干擾，并且中國國內也暫無對碳酸鋰口服制劑的藥動學參數報道。本試驗擬優化樣品預處理條件，去除蛋白，并添加一定量的鉀離子消除電離干擾，建立血清中鋰離子的AAS測定法，并用于碳酸鋰片在中國健康人體內單次給藥的藥代動力學研究，為臨床合理用藥提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 儀器

火焰法原子吸收分光光度計：AAS6000型，江蘇天瑞儀器股份有限公司；

電子天平：BS21S型，德國賽多利斯股份公司。

1.2 藥品與試劑

受試制劑：碳酸鋰片（250mg/片），批號：20080403，江蘇聯環藥業股份有限公司；

碳酸鋰對照品：純度＞99%，批號：20081006，江蘇恩華藥業股份有限公司；

硝酸：優級純，南京化學試劑有限公司；

高氯酸、氯化鉀、氯化鈉：分析純，南京化學試劑有限公司；

水為本實驗室自制去離子水。

1.3 方法

1.3.1 AAS分析條件 波長為670.8nm，燈電流為2mA，狹縫寬度為0.2nm，乙炔氣流量為2.0L/min，空氣流量為5.6L/min。

1.3.2 血清樣品處理方法 精密吸取血清樣品0.8mL置2mL的聚塑離心管中，精密加入1%硝酸（或在標準曲線與質量控制樣品制備時加入相應標準溶液）80μL，再精密加入7%高氯酸溶液0.3mL，渦旋1min，高速（16 000×g）離心1 0min，精密量取上清0.9mL置10mL聚丙烯塑料管中，精密加入氯化鉀溶液3.5mL（以K計1.2mg/mL），搖勻，進行AAS分析。

1.3.3 標準溶液配制

（1）碳酸鋰標準溶液：取碳酸鋰對照品適量（約5 32mg），精密稱定，置50mL燒杯中，滴加稀硝酸（1∶1）直至碳酸鋰完全溶解，過量0.2mL，用去離子水適量稀釋后定量轉移至50mL量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，再用1%硝酸溶液分別定量稀釋配制成鋰離子濃度分別為1.0，2.0，4.0，10.0，20.0，40.0，80.0，120.0μg/mL 的 系 列 標 準 溶液。

1.3.4 血清中鋰離子的AAS專屬性試驗 在本試驗條件下，分別測定空白血清、空白血清添加鋰離子標準溶液（1 μg/mL）及受試者服藥1h后血清樣品的吸光度。

1.3.5 血清中鋰離子的穩定性試驗 分別考察血清樣本在－20℃冰箱冷凍保存90d、經3次凍融或室溫放置8h，處理后血清樣本室溫放置24h4種條件下的穩定性。

1.3.6 分析方法質量驗證 在低、中、高不同濃度水平（0.4，2.0，8.0μg/mL）分別考察了血清樣本的回收率、精密度和準確度。

1.3.7 藥代動力學研究試驗方案 選擇20例健康男性志愿者為受試者，年齡（25.6±2.2）歲，身高（170.5±4.7）cm，體質量（65.0±5.1）kg。于試驗前晚入住I期病房，并禁過夜，早晨空腹口服碳酸鋰片250mg，溫開水250mL送服，于服藥前（0h）和 服 藥后 0.25，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，12，24，36，48和72h采集靜脈血5mL，置于裝有促凝劑的試管中，靜置15min后在4℃條件下離心分取血清，于－20℃保存待測。試驗期間禁止劇烈活動，禁止吸煙、飲酒或含藥物、酒精的飲料等。受試者均簽署知情同意書，試驗方案和知情同意書均經上海市精神衛生中心倫理委員會審批同意。采用DAS 2.0計算軟件，以非房室模型的統計矩方法處理血藥濃度數據并計算參數。

2 結果與討論

2.1 方法學試驗結果

血清中鋰離子的AAS專屬性試驗結果見表1，表明內源性物質對測定無干擾。穩定性試驗結果表明：血清樣本在－20℃冰箱冷凍保存90d、經3次凍融或室溫放置8h，處理后血清樣本室溫放置24h4種條件下各樣本均未發生明顯改變，穩定性良好。血清樣本的回收率、精密度和準確度結果（見表2）表明，低、中、高不同濃度水平均符合要求。

表1 血清中鋰離子的AAS專屬性試驗Table 1 AAS specificity test of serum samples for the determination of lithium

表2 鋰離子血清樣品分析方法質量驗證結果Table 2 Quality control results for the determination of lithium in human serum （x－±s，n＝5）

2.2 口服碳酸鋰片后血清鋰離子的藥代動力學參數

20名男性健康受試者單劑量口服250mg碳酸鋰片（以Li計約為47mg）后鋰離子的平均血藥濃度—時間曲線見圖1。鋰離子的主要藥代動力學參數分別為：Cmax（2.09±0.46）μg/mL；Tmax（1.5±0.8）h；T1/2（21.8±4.9）h；AUC0－72（23.3±4.4）h·μg/mL；AUC0－"（28.1±5.0）h·μg/mL；CL （29.1±4.9）mL/min；Vd（0.8±0.2）L/kg。

2.3 試驗期間的不良事件

試驗期間，20例受試者中有2例發生了不良事件，主要為口干和尿路感染，程度為輕度。不良事件中有1例被判為不良反應，表現為口干。不良事件在一定時間內自行緩解，無需藥物治療。試驗前后實驗室、ECG檢查和生命體征觀察的情況未發生有臨床意義的改變。

圖1 受試者口服碳酸鋰片后血清鋰的平均濃度—時間曲線（n＝20）Figure 1 The serum concentration-time profiles of lithium in Chinese volunteers with lithium carbonate tablet

2.4 樣品預處理條件優化

已有文獻［6］報道，樣本溶血或者放置時間過長均使血鋰濃度偏高，所以血清樣本應避免溶血；血樣采集后須盡快分離血清，冷凍保存待測。本試驗采用高氯酸沉淀蛋白法進行樣品預處理，相對于文獻［2～4］中血清樣品稀釋后直接測定法，供試液中蛋白含量顯著降低，既可使防止樣本間差異導致的測定變異，又減少了內源性物質對AAS測定的影響。

在原子吸收光譜中，影響堿金屬元素測定的因素主要為電離干擾，會使吸光度降低，應補充自由e﹣和易解離的元素，如Cs、Rb和K等［7］，推薦使用鉀離子的最終濃度為1～2mg/mL時，可抑制鋰的電離。人血清鉀正常值為3.5～5.5mmol/L，相當于在本試驗條件下鉀濃度為19～3 0μg/mL，取3位不同受試者的空白血清添加2μg/mL鋰離子標準溶液，分別測定不添加鉀、添加鉀終濃度為1mg/mL以及添加鉀終濃度為1.5mg/mL 3種條件下的吸光度，計算相對標準偏差（RSD），結果依次為2.2%，0.5%，0.7%，結果表明當鉀離子終濃度約為1mg/mL時，鋰離子響應穩定，重現性好。

3 結論

本試驗通過對血清樣品進行預處理后，減少了內源性物質對測定的干擾，該方法的專屬性、精密度、準確度和回收率均良好。采用本法測定20名男性健康受試者單次口服碳酸鋰片后的血鋰濃度，以非房室模型的統計矩方法處理所得藥動學參數可為中國臨床用藥提供依據，但是血鋰濃度個體差異較大，在鋰鹽治療時應使給藥方案個體化，并進行血鋰濃度監測，確保安全。

1 Palladino A Jr，Longenecker R G，Lesko L J.Lithium test-dose methodology using flame photometry：problems and alternatives［J］.J.Clin Psychiatry，1983，44（1）：7～9.

2 Lee C F，Yang Y Y，Hu O Y.Single dose pharmacokinetic study of lithium in Taiwanese/Chinese bipolar patients［J］.Aust N Z J Psychiatry，1998，32（1）：133～136.

3 Frye M A，Kimbrell T A，Dunn R T，et al.Gabapentin does not alter single-dose lithium pharmacokinetics［J］.J.ClinPsychopharmacol，1998，18（6）：461～464.

4 Emami J，Tavakoli N.Formulation of sustained-release lithium carbonate matrix tablets：influence of hydrophilic materials on the release rate and in vitro-in vivo evaluation［J］.J.Pharm Pharmaceut Sci.，2004，7（3）：338～344.

5 Metzger E，Ammann D，Asper R，et al.Ionselectiveliquidmembraneelectrode for the assay of lithiumin bloodserum ［J］.Anal Chem.，1986，58（1）：132～135.

6 郭新勝，高元法，吳效梅，等.不同條件標本對血鋰濃度測定結果的影響［J］.中國醫院藥學雜志，2003，23（11）：704～705.

7 李昌厚.原子吸收分光光度計儀器及應用 ［M］.北京：科學出版社，2006：195～201.