阿奇霉素對支氣管肺炎患兒CD8+CD28-抑制性T細胞的影響

陳淼浦，鄧 力，李 薇，鐘順平東莞市虎門鎮太平人民醫院兒科，廣東 東莞 53900；廣州市兒童醫院小兒呼吸科，廣東 廣州 50080

支氣管肺炎是兒科常見的呼吸道疾病，肺炎支原體（MP）是其最為常見的病原體，阿奇霉素是治療該病常見的藥物之一［1］。已有研究表明支氣管肺炎患兒存在免疫紊亂，包括以補體（C）及免疫球蛋白（Ig）為代表的體液免疫紊亂，還包括以CD4+、CD8+T細胞亞群為代表的細胞免疫紊亂［2］。作為CD8+T細胞的重要一員，CD8+CD28-抑制性T細胞既可起到免疫增強作用，又可起到免疫抑制作用，因此被稱為調節性T細胞（Treg）[3]。有研究發現喘息性肺炎患兒的CD8+CD28-Treg降低［4］，但該細胞在MP感染性支氣管肺炎患兒的表達如何，阿奇霉素對其是否有作用等，目前均未見相關研究。為此，本研究在探索該病患兒CD8+CD28-Treg表達的基礎上，探索阿奇霉素對其作用，并與紅霉素作為對照，過程如下。

1 資料與方法

1.1 患兒資料

選取2012年1月～2014年1月期間我院就診的支氣管肺炎患兒作為觀察對象，年齡0.5～6.5歲，平均3.51±3.03歲，男35例女31例。均經血清MP抗體定量檢測確診為MP感染，經臨床表現或結合胸片確診為支氣管肺炎。如患兒合并免疫性疾病則排除。選取同期到院就診的急性上呼吸道感染患兒作為陽性對照組［5］，男37女29例，年齡3.69±3.11歲；以同期健康保健的66名健康兒童作為陰性對照組，男36女30例，年齡3.40±3.02歲。以上3組性別比例及年齡均無統計學差異。

1.2 流式細胞術檢測

清晨采集以上3組的靜脈血約2 ml，抗凝后采用Ficoll分離獲得外周血單個核細胞，隨后應用尼龍毛柱獲得T淋巴細胞，再與CD8磁珠（MACS）孵育30 min后進行磁珠而分離出CD8+CD28-抑制性T細胞。使用BD多色流式細胞儀檢測CD8+CD28-Treg所占T細胞總數的百分比。使用固定穿透劑對胞內細胞因子TGF-β1及IL-10進行染色，使用雙激光光源對TGF-β1及IL-10百分含量進行檢測[6]。

1.3 PCT及MP-IgM檢測

以上述血清作為標本，采用放射免疫法檢測PCT含量（單位為ng/ml），采用ELISA法檢測MP-IgM含量（單位為kU/L）。上述兩種試劑盒均購自南京生物工程研究所，按照試劑盒說明書進行檢測［7］。

1.4 治療方法

將以上66例支氣管肺炎患兒分為A組及B組各33例，其中A組男19例女14例，年齡3.52±3.01歲；B組男18例女15例，年齡3.52±3.01歲。A及B組性別比例及年齡同樣無統計學差異。A組給予阿奇霉素粉針，10 mg/(kg·d)靜脈滴注；B組給予紅霉素，30 mg/(kg·d)［8］。療程5 d。治療第7天采集靜脈血進行上述指標檢測。

1.5 統計學方法

定量資料采用均數±標準差表示，采用單因素方差分析進行組間的定量資料分析，治療前后的比較采用配對t檢驗，兩組間資料比較采用兩獨立樣本t檢驗，采用Pearson法對定量資料間的相關性進行分析。運用統計軟件包SPSS15.0對數據進行處理當P＜0.05認為差異有統計學意義［9］。

2 結果

2.1 3組兒童CD8+CD28-T細胞、PCT及MP-IgM含量比較

治療前，急性上感患兒CD8+CD28-T細胞、TGF-β 1、IL-10、PCT及MP-IgM與健康組兒童均無統計學差異，但支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細胞、TGF-β1、IL-10顯著低于另外兩組（P＜0.05），而PCT及MP-IGM顯著高于另外兩組（P＜0.05，表1）。

表1 治療前3組兒童CD8+CD28-T細胞及其細胞因子、PCT及MP-IGM含量比較(n=66,x±s)

2.2 支氣管肺炎患兒治療前后CD8+CD28-T細胞、PCT及MP-IgM含量變化

治療前A及B組支氣管肺炎患兒的CD8+CD28-T細胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IGM均無統計學差異。治療第7天，A及B組的CD8+CD28-T細胞、TGF-β 1及IL-10呈不同程度回升，而PCT及MP-IgM回落。治療后A組CD8+CD28-T細胞、TGF-β1及IL-10均顯著高于B組（P＜0.05），且PCT及MP-IGM顯著低于B組（P＜0.05，表2）。

表2 治療前后A及B組支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細胞、PCT及MP-IGM含量對比(n=33,x±s)

2.3 相關性分析

相關性分析結果提示CD8+CD28-T細胞、TGF-β 1、IL-10三者均與PCT及MP-IgM呈顯著負相關性，其中CD8+CD28-T細胞及TGF-β1與MP-IGM的相關性最強（表3）。

表3 CD8+CD28-T細胞及其細胞因子與PCT、MP-IGM的相關性分析

3 討論

MP是一種介于細菌和病毒之間的可獨立存活的最小病原微生物［10］。目前多數觀點認為MP導致支氣管肺炎的發病機制主要有直接侵犯呼吸道與免疫反應誘導的間接免疫-病理損傷兩大類型［11］。在參與支氣管肺炎免疫紊亂的T細胞亞群中，CD8+T細胞起到重要作用。根據細胞膜是否表達CD28分子，CD8+T細胞可分為CD8+CD28+殺傷性T細胞及CD8+CD28-抑制性T細胞，后者是維持呼吸道免疫穩定的關鍵因素［12］。與CD4+CD25+Treg類似，CD8+CD28-Treg也分泌TGF-β1及IL-10，后兩者是Treg執行免疫抑制的重要細胞因子［13］。作為大環內酯類，阿奇霉素及紅霉素治療支氣管肺炎的常用藥物［14-18］，但兩者的免疫調節效果如何，對CD8+CD28-Treg哪個更顯優勢，目前尚缺少探討。

本研究發現，急性上感患兒CD8+CD28-T細胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM與健康組兒童均無統計學差異，但支氣管肺炎患兒CD8+CD28-T細胞、TGF-β1及IL-10顯著低于、而PCT及MP-IgM顯著高于急性上感及健康兒童組，其中CD8+CD28-T細胞亞群降低，與柴少卿[19]報道的一致。以上結果說明CD8+CD28-T細胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM五者在上感及支氣管肺炎存在差異性表達，同時說明：與上感比較，以上五項對支氣管肺炎診斷有一定的特異性。相關性分析結果提示CD8+CD28-T細胞、TGF-β1、IL-10三者均與PCT及MP-IgM呈顯著負相關性，其中CD8+CD28-T細胞及TGF-β1與MP-IgM的相關性最強，這說明CD8+CD28-T細胞、TGF-β1及IL-10含量越高，則PCT及MP-IgM含量越低，對病情恢復越有利，間接說明CD8+CD28-T細胞所起的免疫抑制作用可能是抗炎的藥理學基礎，其所分泌的TGF-β1及IL-10可能是抑炎的主要細胞因子，因此以上三者可能是對支氣管肺炎患兒有利的指標，而PCT及MP-IgM則說明炎癥程度，是相對不利的指標。

治療前兩組支氣管肺炎患兒的CD8+CD28-T細胞、TGF-β1、IL-10、PCT及MP-IgM均無統計學差異，說明兩組分組具有均衡性及可比性。從治療的反應看，治療后A及B組的CD8+CD28-T細胞、TGF-β1及IL-10呈不同程度回升，而PCT及MP-IgM回落。治療后A組CD8+CD28-T細胞、TGF-β1及IL-10盡管尚未完全回升至健康組兒童的水平，但均已顯著高于治療前并顯著高于B組，且PCT及MP-IgM已顯著低于B組；而作為對照藥物的紅霉素組，該組患兒CD8+CD28-T細胞、TGF-β1及IL-10較治療前并無統計學差異，且顯著低于阿奇霉素，說明該藥對此三項指標的改善并不明顯，間接提示此三者可能不是阿奇霉素的靶性淋巴細胞。作為評價感染程度的指標，阿奇霉素及紅霉素組患兒的PCT及MP-IgM在治療后均顯著低于治療前，說明兩藥的均可降低支氣管及肺泡內炎癥，但結果提示治療的PCT及MP-IgM以阿奇霉素組下降更為顯著，說明阿奇霉素效果更好，該結果與朱慶齡[16]報道的具有一致性。

通過本研究筆者認為，CD8+CD28-T細胞、TGF-β1及IL-10三者下降是MP感染相關性支氣管肺炎患兒的重要免疫學特征，并且與PCT及MP-IgM呈顯著相關性；阿奇霉素對提高CD8+CD28-T細胞含量及下調PCT及MP-IgM的效果均優于紅霉素。

［1］黃安鳳,張偉萍.阿奇霉素聯合克林霉素治療小兒支原體肺炎的臨床研究［J］.河北醫藥,2014,36(3):369-71.

［2］楊文青,呂曉麗,李銳成,等.實時熒光定量PCR檢測肺炎支原體DNA在小兒肺炎診斷中的應用價值［J］.國際檢驗醫學雜志,2014,35(4):416-8.

［3］劉春生.CD8+CD28-調節性T細胞與白細胞降低性肺炎病原菌的相關性［J］.長治醫學院學報,2013,27(4):253-6.

［4］王素梅,潘同國,楊玉梅.喘息性肺炎患兒外周血CD137和CD28及T細胞亞群的表達研究［J］.河北醫藥,2010,32(19):2678-9.

［5］黃 鶯.匹多莫德聯合維生素AD滴劑佐治兒童反復呼吸道感染的療效及對機體免疫功能的影響［J］.兒科藥學雜志,2013,19(7):16-9.

［6］李禹兵,侯 蕊,趙銀利.CD8+CD28-調節性T細胞在急性白血病中的水平及臨床意義［J］.現代腫瘤醫學,2013,21(11):2561-3.

［7］朱 宏,計雪強,繆美華,等.肺炎支原體抗體的定量檢測及臨床意義［J］.國際檢驗醫學雜志,2007,28(9):788-9,792.

［8］金 燕.阿奇霉素與紅霉素治療小兒支原體肺炎的療效觀察及其肺炎支原體對免疫球蛋白、T淋巴細胞亞群細胞因子的影響［J］.細胞與分子免疫學雜志,2010,26(6):593-4.

［9］袁遠宏,肖政輝,張 慧,等.膿毒癥急性腎損傷患兒T細胞亞群變化及臨床意義［J］.兒科藥學雜志,2013,19(7):1-4.

［10］朱中梁,馬 娟,汪宏良.兩種方法檢測肺炎支原體的對比研究［J］.臨床肺科雜志,2013,18(5):886-8.

［11］石小華.肺炎支原體抗體與熒光定量PCR檢測法的比較［J］.檢驗醫學與臨床,2010,7(5):412-3.

［12］李雅舒,王 莉,陳曉玲.CD8～+CD28～-調節性T細胞的生物學特性及其與疾病的相關性研究進展［J］.免疫學雜志,2012,28(8):722-5.

［13］趙曉東.CD4～+CD25～+調節性T細胞與兒科疾?。跩］.兒科藥學雜志,2007,13(4):1-3.

［14］吳風棟,胡 勇,陳堅強.克拉霉素與阿奇霉素治療小兒支原體肺炎臨床對照觀察［J］.兒科藥學雜志,2012,18(11):4-6.

［15］曹廷容,楊 宏,雷 琴,等.肺炎支原體感染合并支氣管哮喘患兒血清總IgE及IL-5的檢測及意義［J］.海南醫學院學報,2013,19(2):241-3.

［16］魏 瑋.阿奇霉素連續和間歇給藥治療支原體肺炎的療效及耐藥性分析［J］.南方醫科大學學報,2010,30(8):1918-20.

［17］劉迪軍,鄭 彬,蔡保歡,等.中西醫結合治療小兒支原體肺炎及細胞因子變化［J］.南方醫科大學學報,2010,30(3):626-8.

［18］韓曉華,路素坤,李書秀,等.肺炎支原體23SrRNA基因突變及其所致肺炎的臨床分析［J］.中國醫科大學學報,2011,40(2):162-3.

［19］柴少卿,季 偉.喘息性肺炎患兒外周血中共刺激分子CD28及淋巴細胞亞群的變化［J］.內蒙古醫學雜志,2010,42(12):1425-8.

［20］朱慶齡,楊聲坪,葉新華,等.阿奇霉素與紅霉素治療小兒支原體肺炎的系統評價［J］.兒科藥學雜志,2013,19(11):10-5.