CD147 和FGF-2 在鼻咽癌中的表達及臨床意義

鼻咽癌是我國常見的惡性腫瘤之一，在頭頸部惡性腫瘤中占首位。鼻咽部固有膜內淋巴管網豐富，易早期發生淋巴道轉移，預后較差。研究鼻咽癌的發生、發展機制，探尋鼻咽癌轉移指標是當前研究的熱點。基質金屬蛋白酶刺激因子（CD147）是一種相對分子質量為50×103～60×103的高度糖基化單鏈跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。有研究發現，CD147 高表達于多種腫瘤中，促進腫瘤的浸潤和轉移[1]。成纖維細胞生長因子-2（fibroblast growth factor-2，FGF-2）是成纖維細胞生長因子家族中的重要一員，可促進腫瘤血管生成和細胞增殖。CD147 與FGF-2 在鼻咽癌中的表達及其相關性，迄今國內尚少見報道。本研究采用免疫組織化學（免疫組化）方法檢測CD147 和FGF-2 在鼻咽癌中的表達，并初步探討二者間的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究所用標本全部取自本院2009 年5 月至2012 年8 月就診患者，均經鼻咽部活檢病理確診，共81 例。其中男47 例，女34 例；年齡16～76 歲，平均（47.11±10.20）歲，≥60 歲27 例，＜60 歲54 例。有淋巴結轉移49 例，無淋巴結轉移32例；組織學類型：低分化鱗癌45 例，未分化癌36 例；按鼻咽癌2008年臨床分期[2]：Ⅰ期11 例，Ⅱ期22 例，Ⅲ期35 例，Ⅳ期13 例。同時選取同期43 例經病理證實為鼻咽慢性炎癥組織作為對照。本研究得到深圳市第五人民醫院倫理委員會的批準，且征得所有研究對象知情簽字同意。

1.2 試劑與方法 所有標本均經10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續切片。采用免疫組化鏈霉素抗生素蛋白-過氧化物酶連結法（SP 法），即用型兔抗人CD147 多克隆抗體、兔抗人FGF-2 多克隆抗體、SP 試劑盒、3，3-二氨基聯苯胺（DAB）顯色劑均購自北京中杉生物公司。嚴格按試劑盒說明書方法染色，儀器采用ROCHE全自動免疫組化染色系統，型號Bench Mark GX。用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照，采用已知強陽性表達的乳腺癌組織作為陽性對照。

1.3 結果判斷標準 所有免疫組化染色結果均由2 位病理醫師盲法閱片判斷。每張切片至少在高倍鏡（×400）下觀察10 個不同視野來判斷結果。CD147 以細胞膜及胞漿內出現棕黃色顆粒為陽性結果，FGF-2 以胞漿內出現棕黃色顆粒為陽性結果。參照Salvesen 等[3]的標準采用半定量方法將染色強度分為4 級：不著色為0 分，黃色為1 分，棕黃色為2 分，黃褐色為3 分。將陽性細胞的比例也分為4 級：陽性細胞數小于或等于10%為0 分，＞10%～40%為1 分，＞40%～70%為2 分，＞70%為3 分。2 種評分相加，0～1分為陰性（-），2 分為弱陽性（+），3～4 分為中等陽性（++），5～6 分為強陽性（+++）。統計時（-）為陰性，其余為陽性。

1.4 統計學處理 應用SPSS13.0 統計軟件進行數據分析。計數資料組間比較采用χ2檢驗； 兩個變量相關性采用Spearman′s 等級相關分析。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 CD147、FGF-2 在鼻咽癌與鼻咽炎組織中的表達 CD147 的陽性表達位于細胞膜及胞漿，呈棕黃色顆粒（圖1）。81 例鼻咽癌組中CD147 蛋白陽性表達62 例，陽性表達率為76.54%；43 例鼻咽炎組中CD147 蛋白陽性表達9 例，陽性表達率為20.93%，兩組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。FGF-2 的陽性表達均位于胞漿，呈棕黃色顆粒（圖2）。81 例鼻咽癌組中FGF-2 蛋白陽性表達56 例，陽性表達率為69.14%，鼻咽炎組中陽性表達6 例，陽性表達率為13.95%，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

圖1 CD147 在鼻咽癌細胞膜和胞漿中的陽性表達（SP 二步法，×200）

圖2 FGF-2 在鼻咽癌細胞胞漿中的陽性表達（SP 二步法，×400）

表1 CD147 和FGF-2 在鼻咽癌與鼻咽炎組織中的表達（n）

2.2 鼻咽癌組中CD147、FGF-2 表達與臨床病理特征的關系通過CD147 和FGF-2 蛋白在鼻咽癌中的表達及與臨床病理特征的比較發現，CD147 與臨床分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05），與患者年齡、性別及組織學類型等臨床特征無關（P＞0.05）；FGF-2 僅與淋巴結轉移有關（P＜0.05），而與患者年齡、性別、組織學類型及臨床分期等臨床特征無關（P＞0.05），見表2。

表2 CD147 和FGF-2 與鼻咽癌各臨床病理特征的關系

2.3 鼻咽癌組織中CD147 與FGF-2 蛋白表達的相關性 通過對鼻咽癌CD147、FGF-2 蛋白表達的半定量數據進行相關分析顯示，CD147 與FGF-2 在鼻咽癌中的表達呈正相關[相關系數（r）=0.387，P＜0.05]，見表3。

表3 鼻咽癌組織中CD147 與FGF-2 表達的相關性

3 討 論

腫瘤的發生與發展是一個多因素參與、多步驟完成的過程，侵襲和轉移是導致腫瘤難以治愈的重要因素。CD147 分子又名細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子，是一類屬于免疫球蛋白超家族（immunoglobulin superfamily，IGSF）的跨膜糖蛋白[4]。CD147 在人體內廣泛分布，通過細胞-細胞及細胞-間質黏附作用不僅參與機體多種不同的生理功能，還與腫瘤的增殖、浸潤、轉移密切相關[5]。目前認為，CD147 能刺激腫瘤周圍的成纖維細胞產生基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs），從而促進腫瘤的侵襲與轉移。同時，它也可以通過一種旁分泌方式作用于血管內皮細胞，調節內皮細胞的MMPs 表達。MMPs 是一組重要的細胞外基質降解酶，通過對細胞外基質中不同成分的降解，促進腫瘤新生血管的形成，在腫瘤浸潤、轉移中起重要作用。本實驗結果顯示，鼻咽癌組織中CD147 陽性表達率明顯高于鼻咽炎組織（P＜0.05）。通過分析其與臨床病理特征的關系發現，CD147 的陽性表達率在腫瘤Ⅲ～Ⅳ期與有淋巴結轉移組中均顯著高于Ⅰ～Ⅱ期與無淋巴結轉移組（P＜0.05），提示CD147 過表達與鼻咽癌的發生、發展過程密切相關。這一結果說明，CD147 在鼻咽癌浸潤轉移過程中可能通過刺激其周圍的成纖維細胞產生MMPs 來降解細胞外基質，調節內皮細胞MMPs 的產生而促進腫瘤新生血管生成，從而促使腫瘤細胞侵襲周圍正常組織并向遠處轉移。該結果與文獻報道頭頸部腫瘤研究結果基本一致[6-8]。

FGF-2 是體內非常重要的促血管生長因子之一[9]。FGF-2 廣泛分布于人體的多種組織，具有多種生物學功能[10-11]。有研究表明，FGF-2 可通過促進腫瘤細胞增殖、血管生成，抑制腫瘤凋亡，利于腫瘤侵襲和轉移，在腫瘤的發生、發展中起著重要作用[12-15]。本實驗結果顯示，鼻咽癌組織中FGF-2 的陽性表達率明顯高于鼻咽炎組織（P＜0.05）；通過分析其與臨床病理學的關系發現，FGF-2的陽性表達與患者淋巴結轉移及臨床分期有關（P＜0.05），與患者年齡、性別、組織學類型無關（P＞0.05），提示FGF-2 在鼻咽癌的發生、發展過程中可能發揮重要作用。FGF-2 可能通過纖維母細胞生長因子受體信號傳導通路，一方面增加各種蛋白水解酶和膠原酶的分泌，降解基底膜和包繞腫瘤的基質，突破基質屏障，促進腫瘤生長擴散；另一方面促進淋巴管增生、增加淋巴管通透性或改變淋巴管內皮細胞黏附性及表面趨化因子的表達等途徑，促進鼻咽癌細胞的淋巴結轉移。

綜上所述，本研究初步探討了CD147 和FGF-2 蛋白這2 種基礎作用機制不同的指標在鼻咽癌中的關系。在對CD147 與FGF-2表達的相關性分析中發現，二者呈正相關（r=0.387，P＜0.05）。這一結果說明二者之間可能存在某種共同通路，從而產生協同或相加作用，共同參與鼻咽癌的發生、發展與轉移。CD147 與FGF-2 的高表達可能通過多種胞內信號傳導分子活化相關傳導途徑，產生多種生物學效應，以增加腫瘤的遷移能力，促進脈管生長，提高鼻咽癌組織的惡性侵襲性，是鼻咽癌淋巴結轉移的重要影響因素之一。因此，通過免疫組化方法聯合檢測CD147 和FGF-2 的表達，對鼻咽癌的診斷、臨床分期以及臨床預后判斷具有積極意義。

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