血清Hepcidin 和白介素6 在膽道閉鎖合并貧血患兒中的臨床意義及其關系

高 飛，鄭 浩，趙學芹，顧曉瓊，邱先桃，王潔琳，陳小娟，郭彩嬌

膽道閉鎖是由于肝臟內外膽管纖維化導致膽汁排出障礙所致，該病在亞洲發病率較高。雖然Kasai 手術能夠解決部分膽道閉鎖患兒膽管梗阻及膽汁引流問題，且可獲得較好的短期療效，但日后患兒肝臟、膽管炎癥和纖維化仍會持續進行，大多數膽道閉鎖行Kasai 手術患兒最終因為嚴重的肝硬化和門靜脈高壓威脅生命而需要進行肝移植手術［1］。因此，探討膽道閉鎖的病因對預防和治療該病顯得尤為重要。目前膽道閉鎖病因尚不清楚，但多傾向于大量細胞因子尤其是炎性因子。Hepcidin 是一種分子量較小的多肽，由肝臟生成并分泌，其與炎性反應、體內鐵代謝及貧血存在密切關系，近年來已引起人們廣泛關注［2］。白介素6 (IL－6)作為具有代表性的炎性細胞因子，在膽道閉鎖形成的兩個病理過程中(膽管炎性反應和肝纖維化過程)均發揮了重要作用。本研究采用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測膽道閉鎖合并貧血患兒血清Hepcidin 和IL－6 水平，旨在探討Hepcidin 和IL－6 在膽道閉鎖合并貧血患兒中的臨床意義及其關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012 年5 月—2014 年2 月我院收治的50 例膽道閉鎖合并貧血患兒作為觀察組，以Hb ＜120 g/L 作為貧血的診斷標準，排除肝硬化〔天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)/血小板(PLT)比值指數(APRI) ＜0.945［3］〕、腫瘤及其他原因導致的貧血。選擇同期50 例體檢健康者作為對照組，均無貧血、肝膽疾病病史。兩組受檢者男女比例均為1∶1。

1.2 方法 兩組受檢者均于清晨空腹抽血，采用Sysmex－5000 血細胞分析儀檢測患者Hb、PLT，剩余全血3 000 r/min離心10 min，分離血清，采用HITACH 7600 生化分析儀檢測血清AST 水平，確保觀察組納入患者的APRI ＜0.945。剩余血清置－80 ℃冰箱保存，采用ELISA 檢測兩組受檢者血清Hepcidin 和IL－6 水平，Hepcidin 試劑盒購自美國DRG 公司，IL－6 試劑盒購自R＆D 公司，操作嚴格按照說明書進行。

1.3 統計學方法 應用SPSS 13.0 統計學軟件進行數據處理，計量資料以(x ±s)表示，采用兩獨立樣本t 檢驗;變量間相關性采用Spearman 相關性分析。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清Hepcidin 及IL－6 水平 觀察組血清Hepcidin 及IL－6水平均高于對照組，差異有統計學意義 (P ＜0.05，見表1)。

表1 兩組血清Hepcidin 和IL－6 水平比較Table 1 Comparison of the levels of serum Hepcidin and IL－6 between the two groups

2.2 相關性分析 將觀察組患兒Hb 分別與血清Hepcidin、IL－6進行相關性分析，結果顯示膽道閉鎖合并貧血患兒的Hb與Hepcidin、IL－6 均無直線相關關系(P ＞0.05);觀察組患兒血清Hepcidin 與IL－6 進行相關性分析，結果顯示膽道閉鎖合并貧血患兒血清Hepcidin 與IL－6 呈正相關(r =0.385，P＜0.05)。

3 討論

膽道閉鎖病因不同，但臨床表現相同。貧血作為該病的伴隨癥狀，可能參與膽道閉鎖的整個發病過程。多數研究者認為，炎癥狀態下體內巨噬細胞等產生的IL－6、IL－1 等細胞因子刺激肝細胞合成Hepcidin，促使Hepcidin 表達升高。過度表達的Hepcidin 可與小腸上皮基底面和肝細胞、巨噬細胞表面的特定蛋白結合，使之內化降解，導致腸道吸收鐵減少，巨噬細胞與干細胞釋放鐵受阻導致鐵利用障礙，臨床上出現貧血及肝臟內鐵過度負荷［4］。過度負荷的鐵作為一種強力催化劑，可以啟動或催化Haber－Weiss 反應［5］，促進氧自由基的產生，導致肝細胞亞細胞膜磷脂過氧化反應，特別是對線粒體和微粒體膜的過氧化損傷，而其反應產物可加重炎性反應及刺激肝星形細胞，促進膠原的合成，形成肝纖維化，進而可發展為肝硬化。與此同時，Hepcidin 是由肝臟合成并分泌的，肝細胞的病變可能會影響Hepcidin 的合成，該結論得到多數研究的支持，Detivaud 等［6］首先發現隨著肝硬化程度加重，肝臟Hepcidin 的mRNA 和尿Hepcidin 水平均明顯下降。因此，本研究中入選的研究對象以APRI ＜0.945 作為肝纖維化的排除標準。另外，IL－6作為炎性因子，除了導致肝細胞大量壞死外，還可促進成纖維細胞增生和I、Ⅲ型膠原mRNA 表達，引起細胞外基質增多［7］;參與轉化生長因子(TGF)、腫瘤壞死因子(TNF)相互作用并形成正反饋循環，加劇肝纖維化的進程［8］。

國內外大量文獻顯示，貧血與Hepcidin 及IL－6 存在相關性，如Detivaud 等［6］的研究結果顯示，Hepcidin mRNA 合成水平 與 血Hb 水 平 呈 正 相 關;Sharma 等［9］研 究 結 果 顯 示，Hepcidin與Hb 呈負相關;而本研究結果顯示，Hb 與Hepcidin、IL－6均無直線相關關系。這可能與研究對象不同有關，本研究入選的研究對象包含鐵儲備顯著減少的典型缺鐵性貧血患兒，另外與樣本量小也有關。綜上所述，膽道閉鎖合并貧血患兒Hepcidin 的異常增多引起鐵代謝、炎性因子的異常變化，無論是通過內分泌機制還是體循環均對肝臟纖維化的進程起到了重要作用，為膽道閉鎖的病因學研究提供了一條新的思路。

1 曹志清，湯紹濤，阮慶蘭. 膽道閉鎖治療研究現狀［J］. 中華小兒外科雜志，2005，26 (6):326－328.

2 Luukkonen S，Punnonen K. Serum pro－hepcidin concentrations andtheir responses to oral iron supplementation in healthy subjeets manliest considerable inter－individual variation ［J］. Clin Chem Lab Med，2006，44 (11):1361－1362.

3 賀小張，張明滿，李英存，等. 天冬氨酸轉氨酶和血小板比值對膽道閉鎖肝纖維化預測價值的研究［J］. 中華小兒外科雜志，2013，34 (3):176－179.

4 Martinelli AL，Ramalho LN，Zucoloto AS. Hepatic stellate cells in hepatitis C patients:Relationship with liver iron deposits and severity of liver disease ［J］. J Gastroenteml Hepatol，2004，19 (1):91－98.

5 Hunter HN，Fulton DB，Ganz T，et al. The solution structure of human hepcidin，a peptide hormone with antimicrobial activity that is involved in iron uptake and hereditary hemochromatosis ［J］. J Biol Chem，2002，277 (40):37597－37603.

6 Detivaud L，Nemeth E，Boudjema K，et al. Hepcidin 1evels in humans are correlated with hepatic iron stores，hemoglobin 1evels，and hepatic function ［J］. Blood，2005，106 (2):746－748.

7 Novobrantseva TI，Majeau GR，Amatucci A，et al. Attenuated liver fibrosis in the absence of B cells ［J］. J Clin Invest，2005，115(11):3072－3082.

8 陳曉紅，何有成，周元平，等. TGF－β1、TNF－α 及IL－6 與肝纖維化的關系［J］. 上海免疫學雜志，2001，21 (6):364－365.

9 Sharma S，Nemeth E，Chen YH，et al. Involvement of hepcidin in the anemia of multiple myeloma ［J］. Clin Cancer Res，2008，14 (11):3262－3267.