培土生金法對脾虛證反復呼吸道感染小鼠免疫功能的影響

白井林 劉薇薇 張同園

（1.天津中醫藥大學，天津 300193；2.天津中醫藥大學第二附屬醫院，天津 300153）

·實驗報告·

培土生金法對脾虛證反復呼吸道感染小鼠免疫功能的影響

白井林1劉薇薇2張同園2

（1.天津中醫藥大學，天津 300193；2.天津中醫藥大學第二附屬醫院，天津 300153）

目的觀察對脾氣虛證反復呼吸道感染（RRTI）小鼠血清IgA、脾細胞白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-4（IL-4）、γ干擾素（IFN-γ）分泌的影響，探討培土生金法干預脾氣虛證RRTI小鼠免疫系統的機制。方法用苦寒瀉下法建立脾氣虛證RRTI小鼠模型，治療組小鼠分別給予不同的藥物處理，用藥8 d后，眼球取血，脫頸椎處死小鼠，無菌取脾臟，加PBS液研磨后離心取上清液。結果培土生金法可提高脾虛證RRTI小鼠血清IgA、脾細胞IL-2、IL-4、IFN-γ分泌水平（P＜0.05）。結論培土生金法可以提高脾氣虛證RRTI小鼠血清IgA、脾細胞IL-2、IL-4、IFN-γ分泌水平，改善脾氣虛證RRTI小鼠免疫作用。

反復呼吸道感染 培土生金法 免疫球蛋白 白細胞介素

反復呼吸道感染（RRTI）是指l年以內發生上、下呼吸道感染的次數頻繁，超出正常發病頻次范圍，是兒科常見的一種臨床現象［1］。因小兒先天稟賦不足，病情反復發作，故患兒易出現面色少華，厭食，大便溏等脾虛證。中醫學認為，培土生金法，借五行相生的理論，培補脾土，使脾的功能強健，以治療肺臟虧虛的方法。中醫學所論之“脾”包涵著豐富的免疫學內容，脾虛證與機體免疫器官、非特異性免疫、體液免疫、細胞免疫等方面異常改變均有顯著相關性［2］。脾臟是體內外周的主要免疫器官，在維持機體正常免疫功能方面發揮作用。本研究探討培土生金法對脾虛證RRTI小鼠免疫

功能的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 昆明種小鼠，體質量18~22 g，雌雄各半，共40只，清潔級，21 d齡幼鼠，由天津中醫藥大學動物中心提供。所有動物進食、飲水、活動正常，確認為健康小白鼠，再將小鼠分籠分組（雌雄異籠），采用混合配方喂養，自由進食水，每3日更換墊料，保持小鼠飼養籠內清潔衛生、室內光照充足、環境通風。室溫控制在20~24℃，相對濕度控制在50%~60%。

1.2 主要試驗儀器 100%大黃制劑：大黃購自天津中醫藥大學第二附屬醫院（產品批號：1304013），提取大黃蒽醌類成分（天津中醫藥大學實驗中心）。參苓白術顆粒（北京漢典制藥有限公司生產，3 g/袋）。匹多莫德顆粒 （浙江仙琚制藥股份有限公司生產，規格2 g：0.4 g/袋）、0.9%氯化鈉注射液、PBS液。測定試劑盒血清IgA、白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-4（IL-4）、γ干擾素 （IFN-γ）（由天津科瑞杰生物技術開發有限公司提供并負責測定）。LD4-2離心儀，電子天平。以上實驗儀器均由天津中醫藥大學實驗室（國家級實驗室）提供。

1.3 模型及分組 根據隨機分組法，將40只實驗小鼠隨機分為4組，分別為參苓白術散組10只、匹多莫德組10只、正常組10只、模型組10只。用苦寒瀉下的100%大黃（蒽醌類成分提取）水煎劑0.5 mL/20 g/d，灌胃8 d。正常組小鼠毛發順滑，雙目有神，反應靈敏，飲食飲水正常，體質量日漸增加，模型組小鼠喂飼100%大黃水煎液第2日出現大便便質變稀，于第4日逐漸出現攝食量、飲水量減少，活動量較前減少，易受驚嚇，出現扎堆現象，隨著灌服大黃水煎劑的時間延長，這種現象更為明顯，個別出現脫肛、活動緩慢、反應遲鈍。脾氣虛造模成功后，參苓白術散組和匹多莫德顆粒組開始灌胃給藥，每日2次，每次0.5 mg/10 g體質量。正常組及模型組每日均以等量生理鹽水灌胃，給藥1周后，禁食禁水1 d，眼球取血，脫頸椎處死后，于無菌臺上取小鼠脾臟，在0℃的操作臺上放入PBS液研磨脾臟。于分離器中分離脾細胞上清液。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0統計統計，計量資料以（±s）表示，多個樣本比較采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 脾氣虛模型建立 見表1。經單因素方差分析，造模前各組間體質量差異無統計學意義（P＞0.05）。灌服100%大黃水煎液的3組間體質量差異無統計學意義（P＞0.05）。與正常組比較差異有統計學意義 （P＜0.05）。

表1 不同組別脾虛模型建立前后小鼠體質量變化（±s）

表1 不同組別脾虛模型建立前后小鼠體質量變化（±s）

造模前各組比較，P＞0.05；造模后各組與正常組比較，P＜0.05。

體質量（g）2 2 . 2 0 0 ± 2 . 4 4 0 2 7 . 5 0 0 ± 2 . 4 1 5 2 3 . 9 0 0 ± 1 . 9 1 1（n = 1 0） 造模后 2 6 . 0 0 0 ± 2 . 9 8 1匹多莫得顆粒組 造模前 2 2 . 9 0 0 ± 2 . 5 5 8（n = 1 0） 造模后 2 5 . 3 0 0 ± 2 . 2 1 3模型組 造模前 2 3 . 0 0 0 ± 1 . 6 3 2（n = 1 0） 造模后 2 4 . 2 0 0 ± 2 . 3 9 4組別正常組 造模前（n = 1 0） 造模后參苓白術散組 造模前

2.2 參苓白術散對脾虛證RRTI小鼠脾細胞IL-2、IL-4、IFN-γ的影響 見表2。實驗研究顯示脾細胞IL-2參苓白術散組與正常組、模型組、匹多莫德顆粒組比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；脾細胞IL-4參苓白術散組與正常組、模型組、匹多莫德顆粒組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；脾細胞IFN-γ參苓白術散組與正常組、模型組、匹多莫德顆粒組比較，差異有統計學意義P＜0.05。參苓白術散可以提高脾虛證RRTI小鼠脾細胞IL-2、IL-4、IFN-γ水平。

表2 不同組別小鼠脾細胞IL-2、IL-4、IFN-γ含量（±s）

表2 不同組別小鼠脾細胞IL-2、IL-4、IFN-γ含量（±s）

與參苓白術散組比較，△P＜0.05。

組別 n I F N -γ I L -2 I L -4正常組 1 0 0 . 8 2 2 ± 0 . 2 3 1△參苓白術散組 1 0 1 . 1 2 7 ± 0 . 2 4 4△匹多莫德顆粒組 1 0 0 . 9 0 5 ± 0 . 2 0 7△0 . 3 0 7 ± 0 . 0 5 9△0 . 3 8 1 ± 0 . 0 9 3△0 . 3 5 9 ± 0 . 0 5 8 0 . 4 5 1 ± 0 . 0 6 8 0 . 3 1 3 ± 0 . 0 5 6△0 . 3 2 2 ± 0 . 0 7 4△模型組 1 0 0 . 8 6 6 ± 0 . 1 8 5△0 . 2 8 4 ± 0 . 0 3 1△0 . 3 6 9 ± 0 . 0 4 9△

表3 不同組別小鼠血清IgA含量組間比較（ng，±s）

表3 不同組別小鼠血清IgA含量組間比較（ng，±s）

與正常組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05。

組別 n正常組 1 0參苓白術散組 1 0體質量（g）1 . 2 1 6 ± 0 . 4 1 3 1 . 8 2 0 ± 0 . 3 0 6△▲匹多莫得顆粒組 1 0 1 . 2 1 6 ± 0 . 5 8 7△▲模型組 1 0 1 . 0 6 6 ± 0 . 2 2 3

2.3 參苓白術散對脾虛證RRTI小鼠血清IgA的影響見表3。實驗研究顯示血清IgA參苓白術散組與正常組、模型組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；與匹多莫德顆粒組相當（P＞0.05）。參苓白術散可以提高脾氣虛小鼠血清IgA水平。

3 討 論

培土生金法是以中醫五行學說、臟腑學說及肺主氣理論為基礎形成的一種治療方法。即通過調補脾胃，強健后天之本，益其生化之源，使氣血得充，以治肺氣不足的一種治療措施。脾被稱為后天之本，脾氣充實，運化功能健全，則正氣充足，不易受到邪氣的侵襲；脾氣虛不能實表護衛可致機體防御能力下降。研究表明中醫學的“脾”包涵著豐富的免疫學內容，而脾虛證與免疫器官、非特異性免疫、體液免疫、細胞免疫以及免疫遺傳學等方面異常改變均有顯著相關性［2］。脾臟是體內外周的主要免疫器官，在維持機體正常免疫功能方面發揮作用。脾臟內含大量由骨髓干細胞發育而來的B細胞和大量T細胞、巨噬細胞，是各種免疫細胞居住、增殖并進行免疫應答及產生免疫效應物質，合成巨噬細胞增強激素的主要場所［3］。

T、B淋巴細胞參與機體的特異性免疫，在抗原刺激下，T細胞轉化為致敏淋巴細胞，通過釋放淋巴因子，參與細胞免疫過程；B細胞轉化為漿細胞，合成免疫球蛋白，參與體液免疫過程。NK細胞活性代表機體的天然防御功能，其對靶細胞的作用范圍遠大于殺傷性T細胞，能殺傷某些病毒感染細胞，而對正常未感染細胞無殺傷作用。IL-2是T細胞亞群的生長因子，與IL-4可促進活化B細胞的增殖，IFN-γ為廣譜抗病毒，可增強NK細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞的活力。

本研究根據中醫學發病學理論，采用苦寒瀉下法復制脾虛證RRTI小鼠模型。參苓白術散作為培土生金法的代表方劑，通過培補脾土以增強肺氣，提高免疫力。本研究表明參苓白術散可提高脾虛證RRTI小鼠血清IgA；在該方的治療后，脾虛證RRTI小鼠脾細胞IL-2、IL-4、IFN-γ顯著增高。結果提示，培土生金法可通過提高血清IgA、脾細胞IL-2、IL-4、IFN-γ，增強T、B、NK細胞反應，從而提高機體免疫功能的作用。

［1］ 中華醫學會兒科學分會呼吸學組，中華兒科雜志編輯委員會.反復呼吸道感染的臨床概念和處理原則［J］.中華兒科雜志，2008，46（2）：108-109.

［2］ 修宗昌，余紹源，黃穗平.脾虛免疫學機制研究的回顧與思考［J］.中國中醫藥信息雜志，2003，10（4）：10-13.

［3］ 段永強，成映霞，程容，等.脾虛證進程中小鼠特異性/非特異性免疫功能變化及中藥的干預作用［J］.中國老年學雜志，2011，31（15）：2874-2876.

R285.5

A

1004-745X（2015）02-0281-02

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.02.034

2014-09-18）