耳穴放血療法對濕疹患者IL-17和IL-23表達的影響*

龔致平羅周慧謝文全鄭顯鋒操良會楊俊榮唐成林唐念珍

（1.重慶市長壽區(qū)中醫(yī)院，重慶 401220；2.重慶醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，重慶 400016）

耳穴放血療法對濕疹患者IL-17和IL-23表達的影響*

龔致平1羅周慧1謝文全1鄭顯鋒1操良會1楊俊榮1唐成林2△唐念珍2

（1.重慶市長壽區(qū)中醫(yī)院，重慶 401220；2.重慶醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，重慶 400016）

目的研究耳穴放血療法對濕疹患者體內白細胞介素-17（IL-17）和白細胞介素-23（IL-23）表達量的影響，探討耳穴放血療法治療濕疹的機制。方法采用ELISA方法檢測各組患者治療前后IL-17和IL-23表達水平，并對比觀察各組患者治療前后的臨床表現(xiàn)。結果治療后患者體內IL-17和IL-23表達水平明顯低于治療前（P＜0.05）。結論耳穴放血療法能降低濕疹患者體內IL-17和IL-23表達水平，從而減輕其臨床表現(xiàn)。

耳穴放血療法 濕疹 IL-17 IL-23

濕疹是一種表皮及真皮淺層的變態(tài)反應性炎癥性疾病，病因錯綜復雜，常由多種內外因素引起的［1］。患者可出現(xiàn)全身泛發(fā)或局限一處的各種皮損表現(xiàn)，常對稱分布，邊界不清，伴有劇烈瘙癢，嚴重影響患者工作生活。白細胞介素-17（IL-17）和白細胞介素-23（IL-23）在自身免疫性疾病發(fā)病過程中有著重要作用，對炎癥有很強的促進作用，能誘導多種細胞產生炎癥介質，從而引發(fā)局部或全身的炎癥反應［2-3］，IL-23還對Th17細胞的增殖分化過程有很重要的作用［4］。目前西醫(yī)常規(guī)治療濕疹療效不佳，中醫(yī)耳穴放血療法療效明確，無毒副作用。本實驗通過觀察30例濕疹患者治療前后IL-17和IL-23表達水平的變化，探討耳穴放血療法治療濕疹的機制。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 診斷標準參考衛(wèi)生部規(guī)劃教材第7版《皮膚性病學》［5］，并排除年齡小于18周歲或大于50周歲的患者，妊娠或哺乳期婦女，合并有糖尿病、心腦血管、肝、腎、腫瘤等嚴重疾病的患者，精神病患者。皮損面積及嚴重程度指數(shù)評分法（EASI）［6-8］是根據全身不同部位及皮損嚴重程度，結合皮損面積比例進行綜合計算。瘙癢嚴重程度評分參照《中藥新藥臨床研究指導原則》［9］對患者日常工作、生活的影響程度擬定。

1.2 臨床資料 2013年9月至2014年6月在本院皮膚科門診或住院明確診斷為濕疹的患者30例，年齡18～50歲；其中男性13例，女性17例；病程3個月至10年不等，平均（3.82±2.86）年。

1.3 治療方法 耳穴放血每周2次，單側交替進行，兩周為1個療程，共治療兩個療程。耳穴選取耳中、肺、對屏尖。耳中在耳輪腳處，即耳輪1區(qū)；肺在心、氣管區(qū)周圍處，即耳甲14區(qū)；對屏尖在對耳屏游離緣的尖端，即對耳屏1、2、4區(qū)交點。患者取端坐位，醫(yī)者用一只手捏住患者耳部快速反復的搓揉，使其充血；醫(yī)者消毒雙手并戴無菌手套，患者耳部皮膚常規(guī)消毒；用一次性消毒針頭快速點刺耳穴后，用雙手從針孔擠出血液，用無菌棉球擦吸血液，直至不再出血為止，一般出血量2～3 mL為宜，由耳中、肺、對屏尖依次放血。囑患者避免過度勞累，保持良好心態(tài)，禁用熱水和肥皂燙洗皮損處，忌食辛辣刺激和海鮮、牛羊肉等發(fā)物。

1.4 標本檢測方法 用一次性采血針抽取患者晨起空腹靜脈血2～3 mL于普通真空采血管內，靜置20 min，離心機3000 r/min，離心10 min，取上層血清，4～6℃凍存待測。應用生物素雙抗體夾心法，嚴格按照IL-17和IL-23 ELISA試劑盒說明書進行操作。稀釋標準品，設空白對照孔，標準品孔加標準品50 μL和鏈霉素-HRP50 μL，待測樣品孔加入樣品40 μL，生物素標記的抗體10 μL，鏈霉素-HRP50 μL。蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育1 h。揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿配置洗滌液，靜置30 s后棄去，重復洗板5次，拍干。然后每孔加入顯色液A、B各50 μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min。每孔再加入終止液50 μL，混勻后即刻用在450 nm波長下測定吸光度（OD值），空白孔調零，通過標準曲線計算血清中IL-17和IL-23含量。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，等級資料采用秩和檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 濕疹患者治療前后主要臨床癥狀比較 見表1。患者治療前后臨床癥狀輕重程度均有變化，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明耳穴放血療法對濕疹臨床癥狀均有改善作用。

表1 濕疹患者治療前后主要臨床癥狀比較（n）

2.2 濕疹患者治療前后IL-17、IL-23水平及EASI評分比較 見表2。患者治療前后IL-17、IL-23水平及EASI評分差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），說明耳穴放血療法對濕疹患者體內IL-17和IL-23表達水平有明顯的抑制作用。

表2 濕疹患者治療前后IL-17、IL-23水平及EASI評分比較（±s）

表2 濕疹患者治療前后IL-17、IL-23水平及EASI評分比較（±s）

與治療前比較，*P＜0.01。

時間 IL-23 EASI評分（分）治療前 201.93±36.04 12.03±5.36治療后 117.57±26.26*5.68±3.17*n IL-17 30 67.44±19.33 30 30.37±18.15*

3 討 論

濕疹可由多種內外因素誘導發(fā)生，通常是在自身免疫力和抵抗力降低的基礎上，感受外來刺激 （如環(huán)境、食物、動物毛發(fā)、化學物質等）而引起的一種遲發(fā)型變態(tài)反應。中醫(yī)認為該病多是由先天稟賦不足，后天過食葷腥而導致風邪內動，又或過食辛辣刺激而導致脾胃功能受損，運化失常，致水飲內停，聚而化濕，致濕邪內蘊，郁積化熱，又兼外感百病之長的風邪，終致風、濕、熱諸邪互搏，侵淫肌表，發(fā)為濕疹［10］。

IL-17是由Th17細胞分泌的，IL-23是由活化的抗原遞呈細胞分泌的，IL-23可以促進Th17細胞的分化增殖［4，11］，更是Th17細胞存活的重要因子［12-13］，它可以誘導Th17細胞的發(fā)育，促進慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展［14-15］。IL-17具有促炎作用，可以誘導趨化因子、促炎細胞因子的表達，引起組織細胞浸潤和組織破壞［16］。它們都是自身免疫性疾病和過敏性疾病發(fā)生發(fā)展過程中的重要影響因子，對免疫炎癥反應具有很強的促進作用，且能夠誘導上皮細胞、成纖維細胞、內皮細胞等細胞產生多種炎癥介質，最終引發(fā)局部或全身泛發(fā)的炎癥反應［2-3］。有研究證實，減少IL-17的產生，可明顯減輕炎癥性疾病的嚴重程度［17-18］。

耳穴放血療法可以加快經絡氣血運行，調節(jié)經絡，達到疏風止癢、活血祛瘀、通絡止痛等功效。西醫(yī)認為，耳穴放血療法可以加速血液的新陳代謝，增加組織血氧供給量，增加機體免疫力［19-20］。耳中主治皮膚瘙癢、蕁麻疹、呃逆、咯血等；對屏尖主治皮膚瘙癢、哮喘、腮腺炎、附睪炎等；肺主治皮膚瘙癢、蕁麻疹、咳喘、痤瘡、鼻炎、戒斷綜合征等［21］。

本實驗采用耳穴放血療法治療濕疹患者30例，結果顯示治療后患者體內的IL-17和IL-23表達水平明顯低于治療前，說明耳穴放血療法能夠明顯降低濕疹患者體內IL-17和IL-23的表達水平，對濕疹患者有很好的治療作用，且其機制是通過降低血清中IL-17和IL-23的表達量來完成的。

［1］ 張學軍.皮膚性病學［M］.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：106-109.

［2］ Harrington LE，Hatton RD，Mangan PR，et al.Interleukin 17-Producing CD4+effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 1ineages［J］.Nat Immunol，2005，6（11）：1123-1132.

［3］ Korn T，Bettelli E，Gao W，et al.IL-21 initiates an alternative pathway to induce proinflammatory T（H）17 cells［J］.Nature，2007，448（7152）：484-487.

［4］ Abbas AK.The control of T cell activation vs.tolerance［J］. Autoimmun Rev，2003，2（3）：115-118.

［5］ 張學軍.皮膚性病學［M］.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：106-109.

［6］ 趙辨.濕疼面積及嚴重度指數(shù)評分法［J］.中華皮膚科雜志，2004，37（1）：3.

［7］ Hanifin JM，T hurston M，Omoto M，et al.The eczema area and severity index（EASI）：assessment of reliability in atopicdermatitis.EASI Evaluator Group［J］.Exp Dermatol，2001，10（1）：11-18.

［8］ Berth J.Six area，six sign atopic dermatitis（SASSAD）severity score：a simple system for monitoring disease activityinatopic dermatitis［J］.Br J Dermatol，1996，135（Suppl 48）：25-30.

［9］ 中華人民共和國衛(wèi)生部.中藥新藥臨床研究指導原則［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2002：295-298.

［10］徐文汶.耳穴聯(lián)合中藥治療濕疹 （濕熱證）臨床觀察［D］.成都：成都中醫(yī)藥大學，2012.

［11］Malek TR.The main function of IL-2 is to promote the development of T regulatory cells［J］.J Leukoe Biol，2003，74（6）：961-965.

［12］Yen DJ，Cheung H，Scheerens F，et al.IL-23 is essential for T cell-mediated colitis and promotes inflammation via IL-17 and IL-6［J］.J Clin Invest，2006，116（5）：1310-1316.

［13］Khader SA，Pearl JE，Sakamoto K，et al.IL-23 compensates for the absence of IL-12 p70 and is essential for the IL-17 response during tuberculosis but is dispensable for protection and antigen-specific IFN-gamma responses if IL-12 p70 is available［J］.J Immunol，2005，175（2）：788-795.

［14］Aggarwal S，Ghilardi N，Xie MH，et al.Interleukin-23 promotes a distinct CD4 T cell activation state characterized by the production of interleukin-17［J］.J Biol Chem，2003，278（3）：1910-1914.

［15］Vaknin-Dembinsky A，Balashov K，Weiner HL.IL-23 is increased in dendritic cells in multiple sclerosis and down-regulation of IL-23 by antisense oligos increases dendritic cell IL-10 production［J］.J Immunol，2006，176（12）：7768-7774.

［16］Kolls JK，Linden A.Interleukin-17 family members and inflammation［J］.Immunity，2004，21（4）：467-476.

［17］Nakae S，Nambu A，Sudo K，et al.Suppression of immune induction of Collagen-induced arthritis in IL-17-deficient mice［J］.J Immunol，2003，171（11）：6173-6177.

［18］Banham AH.Cell-surface IL-17 receptor expression facilitates the purification of FOXP3（+）regulatory T cells［J］. Trends Immunol，2006，27（12）：541-544.

［19］董雪松.耳穴割治法在急性濕疹治療中的臨床觀察［D］.長春：長春中醫(yī)藥大學，2012.

［20］蔡力妍，吳節(jié).耳尖放血療法臨床應用策略［J］.光明中醫(yī)，2013，28（9）：1987-1989.

［21］陸壽康.刺法灸法學［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2008：125-129.

Effect of Ear Bloodletting Therapy on the Expression of IL-17 and IL-23 in Patients with Eczema

GONG Zhiping，LUO Zhouhui，XIE Wenquan，et al. Traditional Chinese Medicine Hospital of Changshou District，Chongqing City，Chongqing 401220，China

Objective:To study the effect of ear bloodletting therapy on the expression of IL-17 and IL-23 in patients with eczema，and investigate the therapeutic mechanism of ear bloodletting therapy in patients with eczema.Methods:The expression levels of IL-17 and IL-23 in patients of each group were detected with ELISA method before and after treatment，and a contrast observation of the clinical manifestation between patients of each group was made before and after treatment.Results:After the treatment，the expression levels of IL-17 and IL-23 in patients were significantly lower than that before treatment（P＜0.05）.Conclusion:Ear bloodletting therapy can reduce the expression level of IL-17 and IL-23 in patients with eczema，so as to ease the clinical manifestations.

Ear bloodletting therapy；Eczema；IL-17；IL-23

R758.23

A

1004-745X（2015）07-1249-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.07.047

2015-02-15）

重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科技項目（20120216）

△通信作者（電子郵箱：CYTCL996@163.com）