銀杏葉滴丸對腦梗死病人p38活性的調控作用

夏樂敏，費雪潔

銀杏葉滴丸對腦梗死病人p38活性的調控作用

夏樂敏，費雪潔

目的 探討銀杏葉滴丸對腦梗死病人的治療效果及對外周血單個核細胞P38活性的調控作用。方法 將120例腦梗死病人隨機分為兩組各60例，治療組采用銀杏葉滴丸治療，對照組采用基礎治療。比較兩組療效，并測定p38與p-p38的表達。結果 治療組顯效率46.67%，總有效率80.00%，對照組顯效率33.33%，總有效率50.00%，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療組治療后p38、p-p38較治療前顯著下降(P<0.05)，且顯著低于對照組(P<0.05)。結論 銀杏葉滴丸治療腦梗死療效佳，其機制可能與調控p38活性有關。

腦梗死；銀杏葉滴丸；絲裂原活化蛋白激酶 p38；磷酸化絲裂原活化蛋白激酶 p38；外周血單個核細胞

腦梗死是缺血性卒中的總稱，由腦血液供應障礙引起腦部病變。發病機制為血栓形成或栓塞，其癥狀的性質因病變累及的血管不同而異。臨床上銀杏葉滴丸治療腦梗死療效顯著。研究發現，MAPK家族中的p38 MAPK信號通路與腦缺血性疾病有著密切的關系[1]。本研究旨在探討銀杏葉滴丸治療腦梗死病人的療效及對p38活性的調控作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月—2014年9月以腦梗死收住入院的120例病人為研究對象，男63例，女57例。所有病例均符合1995年全國第四屆腦血管病會議制定的診斷標準，并經頭顱CT或磁共振成像(MRI)確診，其中基底神經節梗死40例，多發性腦梗死20例，腦皮質梗死30例，丘腦梗死13例，腦栓塞15例，出血性腦梗死2例。腦梗死病人中醫證型符合中醫氣虛血瘀型中風病診斷標準(由2名以上高年資主治醫師分型)。采取隨機、雙肓法分為治療組與對照組各60例，并按照1995年全國第四次腦血管疾病學術會議上制定的神經功能缺損評分標準[2]評分，治療組神經功能缺損評分為18.51分±10.56分，既往史積分為9.65分±6.27分，伴發病積分為8.57分±6.24分；對照組神經功能缺損評分為16.80分±9.38分，既往史積分為9.56分±6.32分，伴發病積分為8.26分±7.16分。兩組病人一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法 兩組基礎治療都予以口服尼莫地平片，每次20 mg，每日3次。如果病人有感染或(和)腦水腫顱內壓增高征象者，可給予抗生素和20%甘露醇治療，并根據病情選擇降糖、降壓等對癥治療。所有病人均未使用溶栓藥物。治療組除常規治療外，另予以銀杏葉滴丸(浙江萬邦藥業股份有限公司)服用。用法用量：口服，一次5丸，一日用3次，一日3次，1個療程為30 d。兩組病人均要求住院服藥4個月～6個月。住院期間囑咐病人家屬定時給病人翻身、按摩肢體、捶背，保持大便通暢和飲食衛生，待病情相對穩定后，囑病人在醫生的指導下適當進行功能鍛煉。

1.3 蛋白質印跡法檢測外周血單個核細胞p38和p-p38 收集的外周血單個核細胞經磷酸鹽緩沖液洗滌2次后，加入細胞裂解液(150 mmol/L NaCl，20 mmol/L Tris pH7.5，1%Triton X- 100，1 mmol/L EDTA，2.5 mmol/L Na4P2O7，1% Na3VO4，0.5 mg/mL亮抑酸肽，Biosail公司)充分裂解。裂解的產物12000 r/min 離心20 min，并收集上清液。運用BCA法測定總蛋白量。每份樣品中取50 μg 蛋白加入十二烷基磺酸鈉上樣緩沖液(終濃度：1×)混勻，十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(分離膠：10% gel)，電泳條件為80 V 30 min，120 V 2 h。用半干法轉印分離的蛋白到聚偏氟乙烯膜。采用Western blot方法根據試劑盒要求測定p38含量，一抗按1∶300稀釋，二抗按1∶2 000稀釋，經Quantity One圖像分析軟件和CIS Array Analysis陣列分析軟件對圖中印跡區進行定量分析，以目的蛋白及內參蛋白條帶的灰度比值作相對定量來比較各組間靶蛋白表達差異。

1.4 療效評定標準 依據1995年全國第4屆腦血管病學術會議通過的標準[3]。基本痊愈：美國國立衛生院卒中量表評分(NIHSS)評分減少91%～100%；顯效：NIHSS評分減少46%～90%；有效：NIHSS評分減少19%～45%；無效：NIHSS評分減少不到18%甚至增加，或病例死亡。于治療前或療程結束后即行神經功能缺損評分。

2 結 果

2.1 兩組臨床療效比較 治療組顯效率46.67%，總有效率80.00%，對照組顯效率33.33%，總有效率50.00%，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組臨床療效比較

2.2 兩組治療前后NIHSS評分比較 治療組治療后NIHSS評分較治療前顯著下降(P<0.05)；治療組治療后NIHSS評分顯著高于對照組(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組治療前后NIHSS評分比較(±s) 分

2.3 兩組治療前后p38和p-p38變化 治療組治療后p38相對表達量(p-38/GAPDH)、p-p38相對表達量(p-p38/GAPDH)較治療前顯著下降(P<0.05)；治療組治療后的p38、p-p38顯著低于對照組(P<0.05)。詳見表3、見圖1。

表3 兩組治療前后p38和p-p38變化(±s)

圖1 蛋白質印跡檢測外周血單個核細胞p38和p-p38結果

3 討 論

腦梗死是因為腦動脈粥樣硬化，引起血管內膜損傷使腦動脈管腔狹窄，進而因多種因素使局部血栓形成，導致動脈狹窄加重或完全閉塞，使得腦組織缺血、缺氧、壞死，導致神經功能障礙的一種腦血管病，是一類神經內科的多發病和常見病。

p38是1993年由Brewster等[4]首次發現，有360個氨基酸組成的相對分子質量為38 000的蛋白。1994年，Han等[5]從小鼠的肝臟cDNA文庫中篩選出編碼p38 MAPK的基因，成功證實了Brewster等的研究。Han等后來又發現了P38常見的4個異構體：p38α、p38β、p38γ、p38δ。p38不同的異構體有選擇表達在不同組織之中：p38α主要表達于白細胞與骨髓；p38β高表達在大腦和心臟；p38γ表達在骨骼肌；p38δ則富集于肺、胰腺、腎、小腸和睪丸。序列分析研究顯示，p38四種不同的異構體的同源性超過了60%[6]。p38可以由細胞外多種刺激，包括熱休克、射線、紫外線、促炎癥因子、滲透壓應激、某些促細胞分裂劑而被最終激活。缺血、缺氧后，腦損傷可通過一系列信號途徑轉導至細胞核，啟動相關基因表達，引起神經元凋亡。研究表明，缺血、缺氧后腦損傷可激活p38 MAPK信號途徑，在大鼠局灶性腦缺血再灌注模型中，p38 MAPK持續活化可誘導神經細胞的凋亡[7，8]。目前，P38 MAPK如何調控細胞凋亡尚不完全清楚，其機制非常復雜[9-13]。

中醫認為，腦梗死屬于“中風”范疇，發病與痰、瘀、虛、火、風等因素有關。血瘀是導致本病的關鍵環節，因此，治療上以活血化瘀為大法。祖國醫學認為，活血能使瘀除腦通新血得生。銀杏葉滴丸主要成分為銀杏葉提取物，有防止血栓形成和抗血小板聚集及對腦部血液循環及腦細胞代謝，有較好的改善及促進作用[14]。本研究發現，銀杏葉滴丸對氣虛血瘀型腦梗死有良好療效，且能降低p38活性表達。臨床上運用銀杏葉滴丸治療腦梗死治愈率高，其機制可能與調控p38活性有關。

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(本文編輯 郭懷印)

1.上海中醫藥大學附屬曙光醫院寶山分院(上海 201999)；2.上海中醫藥大學附屬曙光醫院

費雪潔，E-mail：roby_0_0_2000@163.com

R743 R289.5

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10．3969/j．issn．1672-1349．2015．16．028

1672-1349(2015)16-1893-03

2015-06-08)