微波消解-原子熒光光譜法測(cè)定蘇合香丸及其藥用組分中的可溶性汞

藺 娟， 王偉萍 ， 王秀霞

(新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，新疆烏魯木齊830004)

蘇合香丸是由蘇合香、朱砂、檀香、木香、乳香、人工麝香等15 味中藥制成的蜜丸，收載于《中國(guó)藥典》2010 年版一部［1］，有溫通開(kāi)竅，行氣止痛之功效，主治中風(fēng)痰厥、猝然暈厥等一系列疑難雜癥［2-4］。汞元素并非是人體所需的微量元素，其化合物中毒機(jī)制是進(jìn)入人體的汞離子與酶蛋白的巰基結(jié)合，使酶失去活性，阻礙了細(xì)胞的呼吸和正常代謝。臨床資料表明，人體中汞蓄積量達(dá)到100 mg 時(shí)即發(fā)生中毒反應(yīng)［5-6］。 《中國(guó)藥典》規(guī)定，汞的限量為0.2 mg/kg，但實(shí)際上，含朱砂的成方制劑中超出該規(guī)定范圍者比比皆是，大劑量或長(zhǎng)期服用HgS 能引起急、慢性中毒，這可能與朱砂含有可溶性汞鹽有關(guān)［7-12］。但是，朱砂作為礦物藥入藥，在短期內(nèi)還不能退出歷史舞臺(tái)［13-15］，因此測(cè)定含朱砂中藥制劑中可溶性汞的含有量更具有實(shí)際意義。目前，蘇合香丸原制備標(biāo)準(zhǔn)中尚未收錄可溶性汞含有量的最大限度指標(biāo)和測(cè)定方法，本實(shí)驗(yàn)采用符合人胃腸道吸收的環(huán)境，以人工胃液為溶媒進(jìn)行提取，原子熒光法進(jìn)行測(cè)定，建立了該制劑及其部分藥用組分中可溶性汞的定量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AFS-820a 雙道原子熒光分光光度計(jì)(北京吉天儀器有限公司);WX-8000 微波消解儀(上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司);METTLER AE200S 電子天平 (瑞士Mettler-Toledo 公司);RC-806 溶出度儀 (天津市天大天發(fā)科技有限公司)。

1.2 試劑 汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，批號(hào)GBW ［E］080124-9042);胃蛋白酶(1 ∶3 000，上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司)。硝酸為優(yōu)級(jí)純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);硼氫化鉀、氫氧化鉀均為優(yōu)級(jí)純(上海山浦化工有限公司);水為超純水(自制)。

1.3 藥品 蘇合香丸(共21 批，均為大蜜丸，規(guī)格2.4 g/丸)、朱砂、訶子、檀香、丁香、沉香、炙香附、炒白術(shù)、炙乳香、安息香、蓽菝、木香(雷允上藥業(yè)有限公司、北京同仁堂有限責(zé)任公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)條件 光電倍增管負(fù)高壓260 V;燈電流15 mA;原子化器高度10 mm;原子化器溫度200 ℃;載氣(Ar)體積流量400 mL/min;屏蔽氣(Ar)體積流量1 000 mL/min;還原劑為0.5%氫氧化鈉和0.75%硼氫化鉀;載流為3%硝酸。

2.2 供試品溶液制備 精密稱取供試品0.5 g(藥材5.0 g)，置于溶出杯中，精密加入人工胃液100 mL，溶出儀 (37 ℃，100 r/min)、離心機(jī) (3 000 r/min)處理10 min。再精密量取3 mL (藥材5 mL)，置于微波消解罐中，在趕酸器上加熱(120℃)至剩余1 mL，加入硝酸10 mL，微波消解，條件為第1 階段110 ℃，維持3 min，壓力10 Pa，功率400 W，消解2 次;第2 階段140 ℃，維持6 min，壓力20 Pa，功率400 W，消解2 次;第3 階段160 ℃，維持3 min，壓力30 Pa，功率400 W，消解2 次;第4 階段180 ℃，維持10 min，壓力40 Pa，功率400 W，消解2 次。消解結(jié)束后，趕酸器加熱(120 ℃)至剩余1 mL，置于25 mL 量瓶中，加入硝酸水溶液 (硝酸1 mL + 超純水9 mL)定容。同時(shí)，制備空白試劑溶液(人工胃液按《中國(guó)藥典》2010 年版附錄中的方法配制，取稀鹽酸16.4 mL，加水800 mL 與胃蛋白酶10 g，搖勻后再加水稀釋成1 000 mL，即得)。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 線性范圍與檢出限 分別吸取汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液(1 μg/mL)0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mL，置于100 mL 量瓶中，定容，得到質(zhì)量濃度分別為1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 μg/L 的溶液，測(cè)定熒光強(qiáng)度，以質(zhì)量濃度(μg/L)為橫坐標(biāo)(C)，相應(yīng)的熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)(I)，得到回歸方程I =789.378 6C - 33.796 7，r = 0.999 8，表明汞在1.0 ～10.0 μg/L 范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。然后，將空白溶液連續(xù)測(cè)定11 次，按照標(biāo)準(zhǔn)差的3 倍計(jì)算出汞的檢出限為0.017 1 μg/L。

2.3.2 儀器精密度試驗(yàn) 分別精密量取同一質(zhì)量濃度的汞標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，進(jìn)樣10 次，在“2.1”項(xiàng)條件下稀釋一定倍數(shù)，測(cè)定熒光強(qiáng)度。結(jié)果，RSD 為0.80%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 回收率試驗(yàn) 精密稱取可溶性汞含有量已知的樣品9 份，每份0.5 g，再精密加入1 μg/mL汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定。結(jié)果，平均回收率(n =9)為96.5%，RSD 為1.8%，表明回收率良好，見(jiàn)表1。

表1 可溶性汞回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)Tab.1 Result of recovery tests of soluble mercury (n=9)

3 樣品測(cè)定結(jié)果

3.1 蘇合香丸測(cè)定結(jié)果 不同廠家蘇合香丸中可溶性汞含有量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3.2 藥材測(cè)定結(jié)果 不同廠家蘇合香丸中藥用組分的可溶性汞含有量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 不同廠家蘇合香丸中可溶性汞含有量測(cè)定結(jié)果Tab.2 Result of determination of soluble mercury contents in Suhexiang Pills from different manufacturers

表3 不同廠家蘇合香丸中藥用組分的可溶性汞含有量測(cè)定結(jié)果Tab.3 Result of determination of soluble mercury contents in medicinal constituents of Suhexiang Pills from different manufacturers

4 討論

本實(shí)驗(yàn)采用原子熒光光度法測(cè)定蘇合香丸及其藥用組分中可溶性汞的含有量，該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、靈敏度高，可對(duì)該成分進(jìn)行有效控制。

從廠家A 和B 蘇合香丸中可溶性汞的含有量來(lái)看，前者在0.657 ～14.55 μg/丸之間，平均8.519 5 μg/丸，而后者在1.60 ～16.63 μg/丸之間，平均9.91 μg/丸，即廠家A 蘇合香丸中的汞含有量低于廠家B。

從不同廠家蘇合香丸中藥用組分的可溶性汞含有量來(lái)看，朱砂最高。除朱砂外，廠家A 所使用藥用組分中可溶性汞的含有量在0.030 ～0.099 μg/g之間，平均0.062 μg/g，而廠家B 在0.026 ～0.211 μg/g 之間，平均0.131 μg/g。查閱《中國(guó)藥典》2010 年版一部后發(fā)現(xiàn)，在組成蘇合香丸的15 味飲片中，除冰片有重金屬含有量的規(guī)定外，其他飲片均無(wú)此規(guī)定。因此，參照一般飲片千萬(wàn)分之二的限度，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)只有廠家B 的檀香超出了限度，其他均在限度內(nèi)，表明大部分藥用組分中汞的含有量較低，符合生產(chǎn)要求。

目前，蘇合香丸的服用量為每日1 ～2 次，每次1 丸，即每人一天最多服用2 丸。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蘇合香丸的最大含汞量為16.63 μg/丸，如果一天服用2 丸，則體內(nèi)蓄積汞的含有量為33.26 μg，符合WHO 的汞限量標(biāo)準(zhǔn)，即體質(zhì)量60 kg 的成人每日最大攝入量為42 μg。但即使如此，部分批次樣品中汞的含有量并不低，所以有必要對(duì)蘇合香丸中的可溶性汞進(jìn)行質(zhì)量控制，從而保證該藥品的安全性。

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