消食十味丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

白翠蘭， 李昭日格圖， 薩仁格日樂(lè)， 王青虎*

(1. 內(nèi)蒙古民族大學(xué) 蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼028000;2. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼028000)

消食十味丸，由黑冰片、白豆蔻、牛膽粉、連翹、蓽撥、石榴、木鱉子(制)、光明鹽、訶子、肉桂等十味藥材組成。蒙醫(yī)臨床上用于治療消化不良、胃脘疼痛、寒性痞癥、噯氣吞酸，對(duì)寒性“協(xié)日”尤為有效［1］，但目前收載本品原丸劑沒(méi)有“薄層鑒別”項(xiàng)及“含量測(cè)定”項(xiàng)。消食十味丸含有沒(méi)食子酸、連翹苷、胡椒堿、肉桂酸等化合物，具有防腐、收斂、胃潰瘍、抗菌、抗炎等作用［2-10］。本實(shí)驗(yàn)采用TLC 法對(duì)消食十味丸中訶子、石榴、連翹和蓽撥進(jìn)行定性鑒別研究，并運(yùn)用HPLC 法同時(shí)測(cè)定其中沒(méi)食子酸、肉桂酸和連翹苷的量，為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

高效液相色譜儀 (包括LC-20AT 輸液泵，SPD-M20A 檢測(cè)器，CBM-20A 工作站，CTO-22A柱溫箱);AUW220D 型電子天平 (日本島津);KQ-600DB 型系列超聲波沖洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。黑冰片、白豆蔻、牛膽粉、連翹、蓽撥、石榴、木鱉子(制)、光明鹽、訶子、肉桂等十味藥材，由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院提供。沒(méi)食子酸對(duì)照品 (批號(hào)0831-9501)，肉桂酸對(duì)照品(批號(hào)621-3655)，連翹苷對(duì)照品(批號(hào)1102354-2010302)和胡椒堿(批號(hào)168701)由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。單寧酸(批號(hào)140155-4)由上海江萊生物科技有限公司提供;乙腈為色譜純(天津市大茂化學(xué)試劑廠);水為超純水;硅膠G(薄層色譜用)由青島海洋化工廠提供;其他所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 蓽撥的鑒別 取本品2.0 g，加10 mL 三氯甲烷，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取蓽撥藥材0.2 g 和缺蓽撥陰性樣品2.0 g，照供試液制備方法操作，即得陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液。吸取樣品供試品溶液、陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮(7 ∶2 ∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以10%硫酸乙醇溶液顯色，置紫外燈365 nm 下觀察，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.2 連翹的鑒別 稱取本品3.0 g、連翹0.5 g和陰性樣品3.0 g，加10 mL 甲醇，超聲處理30 min，濾過(guò)，即得樣品供試液、陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液。吸取樣品供試品溶液、陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以二氯甲烷-甲醇(10 ∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以10%硫酸乙醇溶液顯色，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.3 石榴的鑒別 稱取本品1.0 g、石榴0.2 g和陰性樣品1.0 g，加10 mL 70%乙醇，超聲處理30 min，濾過(guò)，即得樣品供試液、陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液。吸取樣品供試品溶液、陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(6 ∶4 ∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以10% 硫酸乙醇溶液顯色，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.4 訶子的鑒別 稱取本品1.0 g、訶子0.2 g和陰性對(duì)照品1.0 g，加10 mL 95%乙醇，超聲處理30 min，濾過(guò)，即得樣品供試液、陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液。吸取樣品供試品溶液、陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水(9 ∶4 ∶1 ∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以10%硫酸乙醇溶液顯色，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 樣品中成分測(cè)定［11-15］

2.2.1 供試品溶液制備 稱取供試品3.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇30 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足損失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)。精密吸取濾液10.0 mL 于20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。

2.2.2 對(duì)照液的制備 精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，用甲醇配成質(zhì)量濃度為2.00 mg/mL 的對(duì)照品貯備液。另精密稱取肉桂酸和連翹苷對(duì)照品適量，用甲醇配成質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL 的對(duì)照品貯備液。

圖1 消食十味丸薄層色譜圖Fig.1 TLC chromatograms of Xiaoshi Shiwei Pills

2.2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 日本島津Inertsil ODS-SP 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫(0 ～10 min，18% ～35%乙腈;10 ～20 min，35% ～65%乙腈);檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm;體積流量1.0 mL/min。在上述色譜條件下，肉桂酸、沒(méi)食子酸和連翹苷達(dá)到基線分離(R ＞1.5)，理論塔板數(shù)均不低于6 000，見(jiàn)圖2。

圖2 樣品、對(duì)照品、肉桂陰性樣品、連翹陰性樣品、石榴陰性樣品和訶子陰性樣品色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of samples，reference substances，sample without Cinnamomi Cortex，sample without Forsythia suspensa，sample without Punica granatum and sample without Terminalia chebula

2.2.4 線性關(guān)系考察 采用微量注射器精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品貯備液 (50.0、100.0、200.0、400.0 和500.0 μL)，肉桂酸對(duì)照品貯備液(10.0、20.0、30.0、40.0 和50.0 μL)和連翹苷對(duì)照品貯備液(10.0、20.0、30.0、40.0 和50.0 μL)，分別置于100 mL 量瓶中，加甲醇配制成5 個(gè)不同質(zhì)量濃度的系列對(duì)照溶液，0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，分別取上述溶液20 μL，依上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其回歸方程式，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察Tab.1 Calibration curves of reference substances

2.2.5 精密度試驗(yàn) 分別取同一供試品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5 次，測(cè)定峰面積。計(jì)算沒(méi)食子酸，肉桂酸和連翹苷的峰面積RSD，分別為1.2%、1.2%和1.2%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于制備后0、4、6、8、12 h 依法測(cè)定，以峰面積值計(jì)算沒(méi)食子酸，肉桂酸和連翹苷的峰面積RSD，分別為1.5%、1.0%和1.1%，表明供試液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品(內(nèi)蒙古庫(kù)倫藥廠)5 份，按“2.2.1”項(xiàng)制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算沒(méi)食子酸，肉桂酸和連翹苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其RSD 分別1.1%、1.6%和1.3%。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取樣品(內(nèi)蒙古庫(kù)倫藥廠)1.5 g，共6 份，每份中分別精密加入沒(méi)食子酸、肉桂酸和連翹苷貯備液1、0.1 和0.1 mL，按“2.2.1”項(xiàng)制備供試品溶液，測(cè)定、計(jì)算加樣回收率和RSD，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Tab.2 Result of recovery tests (n=6)

2.2.9 樣品測(cè)定 精密吸取不同來(lái)源樣品的供試品溶液各6 份，每份20 μL，進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中沒(méi)食子酸、肉桂酸和連翹苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同樣品定量測(cè)定結(jié)果Tab.3 Quantitative determination result of various samples

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選擇的薄層色譜條件下，連翹、蓽撥和訶子供試品色譜與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)，陰性樣品無(wú)干擾。因石榴和訶子均含有沒(méi)食子酸，故石榴薄層鑒別中陰性樣品有一定的影響。

本實(shí)驗(yàn)用高效液相色譜法測(cè)定了消食十味丸中沒(méi)食子酸、肉桂酸和連翹苷的量，不同來(lái)源該制劑中3 種成分的量變化不大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的方法可靠和準(zhǔn)確，為有效控制消食十味丸的質(zhì)量提供可靠依據(jù)。

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