歸脾顆粒對飲酒小鼠血醇變化的影響

鄧金明， 吳海英， 余 霜， 鐘若曦

(浙江愛生藥業有限公司，浙江 杭州310018)

中國是個酒文化歷史非常悠久而且十分豐厚的國家。適量飲酒，可陶冶情操，愉悅身心，但過量及長期飲酒易帶來的身體機能的損害，其中以酒精性肝損傷最為常見，包括脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化甚至肝癌［1-2］。歸脾顆粒由十大經典古方歸脾湯經現代工藝制備而來，包含黨參、木香、茯苓、當歸等11 味中藥。在市場隨機回訪中有較多客戶反映歸脾顆粒具有解酒效果，能很好地解決飲酒后問題。本實驗通過動物實驗以作進一步研究。

1 材料

1.1 藥物 歸脾顆粒劑(浙江愛生藥業有限公司，規格3 g/袋，相當于生藥6 g)，用純化水配成0.15 g/mL 的藥液，4 ℃冰箱保存備用，使用時取所需量藥液水浴加熱至37 ℃，搖勻。

1.2 動物 ICR 雄性小鼠120 只，體質量20 ～22 g，購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，合格證編號2008001634464。

1.3 主要試劑 56%二鍋頭白酒(V/V)，北京順鑫農業股份有限公司牛欄山酒廠。其余試劑均為國產分析純。

1.4 主要儀器 TGL 18C 高速臺式離心機;BCD-241C 華日冰箱;FA2104 型電子分析天平;德國SLEE MEV 冷凍切片機;Lecia TCS SP2 激光共聚焦顯微鏡;GC 2010Plus 型氣相色譜儀等。

2 實驗方法

2.1 分組及灌胃［3-6］實驗小鼠適應性飼養7 d 后，標記，稱定質量，隨機分成4 組(表1)，每組30 只。連續灌胃一個月，其中歸脾顆粒或生理鹽水按0.2 mL/20 g 體質量灌服，酒按0.25 mL/20 g 體質量灌服，記錄相關實驗數據。

表1 組別設置

2.2 檢測［7-9］按表1 組別設置連續灌胃30 d，末次給酒后于30、60、90、120、150、180 min 摘除眼球取血，分離血清測血醇質量濃度。取血斷頸處理后立即取小鼠肝臟大葉片，浸泡于福爾馬林溶液中固定，用作組織病理切片。

3 結果

3.1 一般觀察及死亡率 灌酒后小鼠先表現出興奮狀態，繼而共濟失調，毛發松散，呼吸急促，個別有呼吸衰竭現象。實驗第3 ～4 天防醉對照組普遍出現活動減少，食量下降現象，至第10 天共死亡12 只，造模30 d 共死亡18 只;而歸脾防醉組大部分活躍，至第10 天，共死亡3 只，造模30 d 共死亡8 只;長期保養組均無死亡。說明飲酒易造成小鼠生理機能的衰竭甚至導致死亡，而歸脾顆粒有助于保護小鼠生理機能的修復，減少死亡率，防醉對照組的死亡率明顯高于歸脾防醉組，說明歸脾顆粒有助于小鼠生理機能的修復，減少死亡率，同時延緩小鼠的死亡時間，詳見表2。

表2 小鼠死亡情況統計

3.2 體質量變化［10］實驗第30 天稱量各組小鼠體質量，對比實驗前后各組平均體質量，計算體質量增長率，見表3 及圖1。從體質量增長率比較，歸脾保養組＞保養對照組＞歸脾防醉組＞防醉對照組。

表3 各組實驗前后平均體質量變化及增長率

圖1 各組實驗前后平均體質量變化及增長率

歸脾防醉組與防醉對照組比較，證明歸脾顆粒對酒精的影響，有助于小鼠生理機能的修復，減少酒精的危害;歸脾保養組與保養對照組比較，證明歸脾顆粒對正常小鼠的影響，有助于增加小鼠的食欲，促進消化代謝功能;具體參考表中數據。

3.3 睡眠情況［11］實驗進行第7 天，每組均灌酒后觀察小鼠的活動情況。以小鼠爬行不穩、后腹拖地、毛松散、閉眼不動為醉酒指標，以活動自如、靈活、精神、毛滑順為醒酒指標，記錄小鼠入睡(醉酒)時間和蘇醒(醒酒)時間，計算出睡眠潛伏時間(從灌酒至入睡的時間，min)及睡眠時間(從入睡到蘇醒的時間，min)。

從表4 數據結果得知，服用歸脾顆粒對小鼠的睡眠影響。一直服用歸脾顆粒的歸脾防醉組、歸脾保養組平均睡眠潛伏期較2 個對照組防醉對照組、保養對照組短，睡眠時間長，表現為易醉晚醒的現象。推測為服用歸脾顆粒增強了機體胃腸道的運化能力，后給酒，可促進對酒精的吸收，從而表現為易醉的效果。而歸脾顆粒可能有“安神效果”，從而延長了睡眠時間。

表4 睡眠情況

3.4 血醇變化 睡眠情況的數據顯示歸脾組比對照組易醉，分析給酒后各時間點的血醇質量濃度發現歸脾顆粒可以促進小鼠對酒精的吸收和代謝。促進酒精吸收具體表現即為睡眠潛伏期短的易醉，歸脾顆粒促進酒精代謝與安神助眠雙重作用下結果表現為睡眠時間長，血醇質量濃度變化具體情況見圖2。

圖2 血醇質量濃度-時間變化曲線

歸脾防醉組，由于歸脾顆粒的促進吸收和代謝作用，加之此組長期飲酒，推測小鼠胃腸道吸收功能得到鍛煉、提高，使其吸收最快，表現為血醇質量濃度最高。代謝也最快。實驗數據顯示，在1 h 后血醇質量濃度下降到75 mg/100 mL，低于醉酒質量濃度(80 mg/100 mL)，并呈現繼續緩慢下降趨勢。

防醉對照組，由于酒精的長期刺激且沒有歸脾顆粒的保護作用，胃腸道功能可能受到一定程度損傷，導致此組吸收最差，肝功能受影響，代謝也最差。實驗數據顯示，3 h后仍然呈現醉酒狀態 (血醇質量濃度高達87.9 mg/100 mL)。

歸脾保養組，該組顯示其對酒精的代謝能力不如歸脾防醉組，說明歸脾防醉組小鼠因為長期飲酒和服用歸脾顆粒使得體內的乙醇代謝酶得到適應并強化，故能在1 h 就低于醉酒質量濃度，而歸脾保養組達到相同質量濃度需要2 h。

保養對照組，該組為沒有服用歸脾顆粒(可作為空白對照組)，需要3 h 酒醒(以低于血醇質量濃度80 mg/100 mL 為標準)，比歸脾防醉組(1 h)和歸脾保養組(2 h)都慢，雖然血醇峰值與歸脾防醉組相近，但達峰時間延后了1 h。數據顯示，3 h 后血醇質量濃度降低為63.11 mg/100 mL，僅優于防醉對照組。

因此，長期服用歸脾顆粒，可增強胃腸道運化吸收功能，促進肝臟代謝活力，即增強小鼠機體解酒能力。3.5 肝組織病理切片［12-13］各組小鼠肝組織經石蠟切片，HE 染色后在50 倍光學顯微鏡下觀察，結果圖3 所示。從結果可以看出，歸脾防醉組的肝臟結構大致正常，肝細胞未見明顯腫脹;防醉對照組的肝細胞腫脹，肝索排列紊亂，肝竇受壓，可見血管充血和灶性壞死;歸脾保養組的肝臟結構基本正常，清晰可見，肝索排列大致正常;保養對照組的肝臟結構正常，清晰可見，肝索排列大致正常。

因此，服用歸脾顆粒對小鼠肝臟具有較明顯的保護作用，可減少飲酒帶來的損害。

圖3 各組的肝組織病理切片(HE×50)

4 討論

血醇測定實驗表明歸脾顆粒對灌酒小鼠胃腸道吸收及肝臟代謝功能有明顯的提高作用;小鼠睡眠實驗，表明歸脾顆粒可延長睡眠時間和提高質量，具有一定的安神助眠效果，這與戴詩文等［14］開展的對歸脾顆粒劑的藥效學研究中提到歸脾的安神之功效相符。此外，歸脾顆粒還能增加小鼠食欲，從而增加體質量，大幅度降低死亡率。

由王緒平等［15］進行的歸脾顆粒劑對肝灌流液中酶AST、ALT 的影響實驗，測定肝灌流液中天門冬氨酸氨基轉換酶(AST)和丙氨酸氨基轉換酶(ALT)，兩者是肝細胞內的主要功能酶，在肝組織損傷及壞死時，酶從細胞內漏出入血，故檢測小鼠血中ALT 和AST 活性的高低可判斷其肝細胞損傷的程度［16］，結果提示歸脾顆粒劑對肝臟無毒性影響，這為歸脾顆粒劑的臨床合理用藥提供了實驗依據。結合本實驗的肝組織病例切片，進一步證實了歸脾顆粒劑對肝臟無毒性，且具有一定的修復作用。

本實驗主要通過血醇-時間變化曲線、體質量及病理切片等因素一定程度上說明歸脾顆粒對機體有較明顯的正作用，而對于機體修復的程度，特別是胃腸道及肝臟具有保護及修復作用，還有待進一步實驗論證。具體可對胃腸道生化指標作進一步研究，以確證歸脾顆粒對胃腸道也有保護作用，增加其運化吸收能力。如胃黏膜中內皮素(ET)、一氧化氮合成酶(NOS)、生長抑素(SS)和血管活性腸肽(VIP)，內皮素(ET)和一氧化氮(NO)考察。對肝臟功能可進行天門冬氨酸氨基轉換酶(AST)和丙氨酸氨基轉換酶(ALT)的測定。以上指標的測定將是歸脾顆粒對機能功能器官是否有明顯的保護作用的有力佐證。

［1］ 李會蓮. 酒精性肝病研究［J］. 中國醫藥指南，2011，9(2):50-51.

［2］ 殷曉軒. 辨病專方與辨證施治對酒精性肝損傷病證相合模型的療效對比［D］. 濟南:山東中醫藥大學，2011.

［3］ 周一平. 用Excel 軟件進行藥物毒理實驗的隨機分組［J］.藥學進展，2005，29(9):425-427.

［4］ 喬 寧，劉斯佳，周毅娟，等. 橙子對醉酒小鼠的解酒作用［J］. 徐州醫學院學報，2009，29(7):442-443.

［5］ 項 偉，夏延斌，余望貽，等. 幾種調控酒精代謝物質解酒效果的比較研究［J］. 食品科學，2007，28(2):317-321.

［6］ 苑 函. 動物醉酒實驗模型的研究［D］. 北京:中國農業大學，2005.

［7］ 項 偉. 常用調控酒精代謝物質及其制品解酒效果的動物試驗研究［D］. 長沙:湖南農業大學，2006.

［8］ 馬倩倩. ADH 高產醋酸桿菌AbI-9-3 菌株選育，提取工藝，穩定性及解酒藥效學研究［D］. 上海:上海師范大學，2009.

［9］ 李世杰，鄭 雯，馮其光. 血液中乙醇濃度檢測方法［J］.預防醫學情報雜志，2007，23(1):124-126.

［10］ 新 昕. 歸脾湯對抑郁模型小鼠結腸組織中SP 和VIP 表達的影響［D］. 沈陽:遼寧中醫藥大學，2011.

［11］ 鄧敏貞，黎同明. 歸脾湯對失眠小鼠鎮靜催眠及記憶鞏固性障礙的影響［J］. 中醫學報，2012，27(4):438-440.

［12］ 王金萍，曾 明. 可舒膠囊對小鼠酒精性肝損傷的影響［J］. 中國實驗方劑學雜志，2004，10(6):64-65.

［13］ 付 田，蒲 薔，譚 健，等. 梔子京尼平苷對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用［J］. 中藥藥理與臨床，2007，23(3):25-27.

［14］ 戴詩文，張偉敏，王緒平，等. 歸脾顆粒劑的藥效學研究［J］. 中藥新藥與臨床藥理，1999，10(3):175-176.

［15］ 王緒平，鄭筱祥，歸脾顆粒劑對肝灌流液中酶AST、ALT的影響［J］. 中成藥，2004，26(11):917-918.

［16］ 彭 勃，苗明三，王穎芳. 橄欖解酒飲對大小鼠急性酒精性肝損傷的影響［J］. 上海中醫藥雜志，2003，37(10):48-51.