高效液相色譜法測定桃兒七中槲皮素及山柰酚

羅興平， 楊玲霞， 陳明晶， 周海靜

（1.西北民族大學(xué)化工學(xué)院，甘肅蘭州730000；2.甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅蘭州730070；3.甘南州人民醫(yī)院，甘肅甘南747000）

高效液相色譜法測定桃兒七中槲皮素及山柰酚

羅興平1， 楊玲霞2， 陳明晶3， 周海靜1

（1.西北民族大學(xué)化工學(xué)院，甘肅蘭州730000；2.甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅蘭州730070；3.甘南州人民醫(yī)院，甘肅甘南747000）

目的測定桃兒七中槲皮素及山柰酚的量。方法采用高效液相色譜法。色譜柱為Kromasil C18柱 （4.0 mm× 250 mm，5.0μm）；甲醇-0.1%磷酸溶液 （50：50）為流動(dòng)相，體積流量1.0 mL/min；檢測波長360 nm。結(jié)果槲皮素、山柰酚分別在0.037 2～0.744μg和0.019 4～0.388μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，平均回收率分別為97.8%（RSD為1.1%）和98.6% （RSD為1.4%）結(jié)論該法準(zhǔn)確、靈敏，可用于桃兒七中槲皮素及山柰酚的定量測定。

桃兒七；槲皮素；山柰酚；HPLC

桃兒七為小檗科桃兒七屬植物Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying的干燥根及根莖，別名雞素臺(tái)，系藏族人民的常用中草藥。其味苦、辛，性溫，有小毒，具有祛風(fēng)除濕、活血調(diào)經(jīng)、祛痰止咳的功效，主要用于治療血瘀經(jīng)閉、難產(chǎn)、死胎、胎盤不下等病癥。桃兒七生長緩慢，對環(huán)境的要求苛刻，分布范圍狹窄，是我國珍稀藥用植物，1992年被 《中國植物紅皮書》收錄，為國家二類保護(hù)植物。桃兒七主要化學(xué)成分為木脂素類及黃酮類，其中黃酮類化合物主要為槲皮素和山柰酚，具有很好的抗氧化、抗菌、祛痰及鎮(zhèn)咳作用，為臨床治療氣管炎的有效成分［1-3］。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法同時(shí)測定了桃兒七中槲皮素和山柰酚的量，可有效控制桃兒七的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2010A高效液相色譜儀（日本島津公司）；梅特勒XS205DU電子天平 （瑞士Mettler toledo公司）；B3200S-T型超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司）；MILLIQ超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 試藥 槲皮素對照品 （中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)100081-200406）；山柰酚對照品 （中國食品藥品檢棕研究院，批號(hào)110861-2004050）；桃兒七藥材 （分別購自甘南州舟曲縣人民醫(yī)院、甘南州人民醫(yī)院、甘南藏族自治州藥材公司及藥店），由甘肅省食品藥品檢驗(yàn)所朱俊儒主任藥師鑒定為桃兒七Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying。甲醇為色譜純（美國Fisher公司）；其余試劑均為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) Kromasil C18色譜柱（4.0 mm×250 mm，5.0μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液 （50：50）；檢測波長為360 nm，體積流量1.0 m L/min；在此色譜條件下，槲皮素和山柰酚均與樣品中其他組分色譜峰基線分離，見圖1。理論塔板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算為8 580，按山柰酚計(jì)算為7 412。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram s

2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取槲皮素和山柰酚對照品適量，加甲醇制成每1 mL中各含0.372 mg和0.194 mg的溶液，作為對照品貯備溶液，精密吸取對照品貯備溶液10 m L，置于100 m L量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（槲皮素為37.2μg/mL，山柰酚為19.4 μg/mL）。

2.3 供試品溶液制備 取本品細(xì)粉約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取對照品溶液1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μL，按上述條件分別注入色譜儀測定，記錄峰面積，以槲皮素、山柰酚峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸計(jì)算，計(jì)算得：槲皮素的回歸方程為 A= 3 158 929C+17 398，r=0.999 9，槲皮素在0.037 2～0.744μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；山柰酚的回歸方程為A=3 609 803C-7 992，r=1.000 0，山柰酚在0.019 4～0.388μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10μL，分別計(jì)算得槲皮素峰面積的RSD為1.8%、山柰酚峰面積的RSD為1.3%。表明儀器的精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批桃兒七藥材（甘南州人民醫(yī)院）5份，按供試品溶液的制備方法制備，依法測定，結(jié)果槲皮素的RSD為1.7%，山柰酚的RSD為2.3%，表明本法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 稱取本品適量，按供試品制備方法制備供試液，按上述色譜條件，分別在0、2、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣10μL，測定槲皮素和山柰酚的峰面積，結(jié)果槲皮素峰面積的 RSD為2.3%，山柰酚峰面積的RSD為1.7%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含有量的桃兒七樣品 （甘南州人民醫(yī)院，槲皮素和山柰酚分別為0.51 mg/g和0.32 mg/g）6份，精密稱定，分別精密加入對照品溶液適量，按 “2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1和表2。

表1 槲皮素的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests for quercetin

表2 山柰酚的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of recovery tests for kaem p ferol

2.9 樣品測定 取桃兒七藥材，按 “2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，依法測定，計(jì)算，結(jié)果見表3。

3 討論

桃兒七主要化學(xué)成分為木脂素類及黃酮類，其中木脂素類成分 （如鬼臼毒素等）因具有抗癌活性而研究較多，有關(guān)質(zhì)量分析的研究也集中在此處［4-9］，但對黃酮類成分則少有報(bào)道。研究表明，該類成分主要為槲皮素、山柰酚及其苷類［1-3］，具有祛痰、平喘、降血脂、降血壓、增加冠脈血流量等功效，與以桃兒七為主要成分的藏藥，如紅花如意丸，平喘抗炎膠囊等臨床作用一致，因此制定桃兒七中黃酮類化合物的定量測定方法很有必要。

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在本實(shí)驗(yàn)色譜條件下，保留時(shí)間6.5 min左右處有一色譜峰，與金絲桃苷色譜峰位置相同，經(jīng)過紫外光譜比對及更換流動(dòng)相系統(tǒng)等手段確認(rèn)，該峰不是金絲桃苷，其歸屬有待進(jìn)一步研究。

［1］劉海軍，徐 艷，蘇國慶，等.桃兒七的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2004，35（1）：99-100.

［2］張東佳，漆燕玲.藥用植物桃兒七的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（18）：10802-10803.

［3］區(qū) 智，屈 燕.桃兒七國內(nèi)外研究進(jìn)展［J］.北方園藝，2013，（18）：183-185.

［4］劉世巍，丁建海.HPLC法測定桃兒七中鬼臼毒素的含量［J］.寧夏師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，33（6）：48-49.

［5］孫彥君，李占林，陳 虹，等.桃兒七化學(xué)成分研究［J］.中藥材，2012，35（10）：1607-1609.

［6］黃 坤，蔣 偉，趙紀(jì)峰，等.瀕危藥用植物桃兒七中鬼臼毒素和總木脂素含量測定［J］.中國中藥雜志，2012，37（10）：1360-1365.

［7］熊文勇，魏朔南，岳 明.HPLC分析桃兒七中鬼臼毒素的含量［J］.中成藥，2010，32（5）：875-878.

［8］秦 楊，桂明玉，于力娜，等.RP-HPLC法測定桃兒七中木脂素成分的含量［J］.藥物分析雜志，2009，29（9）：1490-1492.

［9］熊文勇，魏朔南，岳 明.桃兒七HPLC指紋圖譜研究［J］.中成藥，2010，32（11）：1850-1854.

Quantitative determ ination of quercetin and kaemp ferol from Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying by HPLC

LUO Xing-ping1， YANG Ling-xia2， CHEN Ming-jing3， ZHOU Hai-jing1

（1.Northwest University for Nationalities，Institute of Chemical Engineering，Lanzhou 730000，China；2.Gansu Provincial Institute for Drug Control，Lanzhou 730070，China；3.The People's Hospital of Gannan Prefecture，Gannan 747000，China）

Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying；quercetin；kaempferol；HPLC

表3 樣品測定結(jié)果（n=2）Tab.3 Results of content determ ination of samples（n=2）

R284.1

A

1001-1528（2015）04-0818-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.027

2014-05-22

中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目 （zyz2011058）；國家民委科研項(xiàng)目 （12XB11）；西北民族大學(xué)科研創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)計(jì)劃資助

羅興平（1968—），男，博士，教授，從事中藥分析和中藥化學(xué)研究。Tel：（0931）4512053，E-mail：aluo009@sina.com