HPLC法測定不同產(chǎn)地穿山龍中薯蕷皂苷的含量

郭紅霞，李 娟，宋 飛，寮渭萍，尚 斌（.陜西稻田診斷試劑有限公司，西安 7007；.咸陽市西郊給水工程籌建處，咸陽 7000；.秦嶺鮮都生態(tài)農(nóng)業(yè)股份有限公司，西安 7008；.陜西省干細(xì)胞技術(shù)有限公司，西安 7000；.西安力邦制藥有限公司，西安 7007）

HPLC法測定不同產(chǎn)地穿山龍中薯蕷皂苷的含量

郭紅霞1，李 娟2，宋 飛3，寮渭萍4，尚 斌5（1.陜西稻田診斷試劑有限公司，西安 710075；2.咸陽市西郊給水工程籌建處，咸陽 712000；3.秦嶺鮮都生態(tài)農(nóng)業(yè)股份有限公司，西安 710018；4.陜西省干細(xì)胞技術(shù)有限公司，西安 710003；5.西安力邦制藥有限公司，西安 710075）

目的 對(duì)不同產(chǎn)地穿山龍藥材中薯蕷皂苷的含量進(jìn)行比較。方法 采用HPLC法對(duì)不同產(chǎn)地穿山龍藥材中的薯蕷皂苷進(jìn)行了檢測。結(jié)果 不同地域穿山龍藥材中薯蕷皂苷的含量有明顯差異，伊春、蘭州、陜南所產(chǎn)含量較高，其中伊春產(chǎn)穿山龍藥材含量最高，為19.7mg·g－1。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可以作為穿山龍藥材的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法；穿山龍；薯蕷皂苷；含量比較

穿山龍別名穿地龍、川龍薯蕷等，屬于薯蕷科、薯蕷屬，為多年生草本植物，以根莖入藥，具有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)、止咳平喘之功效［1－2］。其有效成分主要是薯蕷皂苷（dioscin），具有擴(kuò)張冠狀血管、增加營養(yǎng)性血流量、改善冠狀動(dòng)脈供血不足的作用；延緩動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成；亦可降低血壓、三酰甘油、高膽固醇［3－5］（參考文獻(xiàn)中薯蕷皂苷片主要成分為穿山龍藥材中的水溶性總皂苷）。因此，筆者選擇薯蕷皂苷作為其指標(biāo)性成分。

穿山龍藥材的生長區(qū)域分布于東北、華北、西北及河南、湖北、山東、江蘇、安徽、四川等地。有很多研究對(duì)不同產(chǎn)地穿山龍及其同屬藥材黃姜的薯蕷皂苷元進(jìn)行了比較［6－9］，其含量測定多采用質(zhì)量法或?qū)⒋┥烬埶幉闹械氖硎氃碥账獬墒硎氃碥赵傩袦y定，測定薯蕷皂苷元須將藥材酸解、提純、調(diào)節(jié)酸堿度等步驟，操作復(fù)雜且耗時(shí)較長，文獻(xiàn)鮮見不同產(chǎn)地穿山龍薯蕷皂苷的含量比較研究。筆者采用HPLC法對(duì)不同產(chǎn)地穿山龍藥材中薯蕷皂苷含量進(jìn)行測定，并進(jìn)行了比較，為臨床使用和制藥企業(yè)選擇原料產(chǎn)地提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 WATERS 600二元梯度泵＋717自動(dòng)進(jìn)樣器＋2487紫外檢測器＋Empower色譜數(shù)據(jù)處理軟件。

1.2 試藥 薯蕷皂苷對(duì)照品（批號(hào)111707－200501），中國藥品生物制品檢定所；穿山龍藥材樣品取自成都、河南、陜西、山西、黑龍江等種植基地，均為3年以上生穿山龍，共10批。乙腈（色譜純）；水（超純水，臨用前制備）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：C18柱（Diamonsil，150mm ×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（28∶72）；檢測波長：203nm。薯蕷皂苷峰理論板數(shù)應(yīng)不低于3 500。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 取薯蕷皂苷對(duì)照品，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋，制成每1mL含0.3mg的溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品干燥粉末（過四號(hào)篩），精密稱定0.5g，置于具塞錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)為65%乙醇25mL，稱定質(zhì)量，超聲提取（功率120W，頻率40kHz）30min，放涼，再稱定質(zhì)量，用體積分?jǐn)?shù)為65%乙醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取2.2.1項(xiàng)對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10μL，記錄薯蕷皂苷峰面積，其RSD為0.68%（n＝6）。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取6號(hào)樣品6份，精密稱定，分別按供試品制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣量10μL，6號(hào)樣品中薯蕷皂苷的平均含量為14.6mg·g－1，RSD為0.76%（n＝6），表明其重復(fù)性較好。

2.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知薯蕷皂苷含量的6號(hào)穿山龍樣品約0.5g，共9份，精密稱定，每3份為一組，分別加入樣品量的80%，100%和120%的薯蕷皂苷對(duì)照品，并測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果薯蕷皂苷平均回收率為99.21%，RSD為1.45%（n＝9）。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取8號(hào)樣品溶液1份，在常溫下放置8h，每2h測定1次，考察薯蕷皂苷的含量變化，結(jié)果含量的RSD為0.05%，表明供試品在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 樣品測定 薯蕷皂苷對(duì)照品圖譜及8號(hào)穿山龍藥材樣品中薯蕷皂苷含量測定圖譜見圖1，10批樣品測定結(jié)果見表1。

圖1 HPLC圖A.薯蕷皂苷對(duì)照品（0.3mg·L－1）；B.供試品溶液；1.薯蕷皂苷Fig.1 HPLC chromatogramsA.dioscin control reference substance（0.3mg·L－1）；B.sample solution；1.dioscin

表1 穿山龍藥材中薯蕷皂苷含量測定結(jié)果Tab.1 Determination of dioscin in Rhizoma dioscoreae nipponicae

3 小結(jié)與討論

通過對(duì)不同地域穿山龍藥材中薯蕷皂苷的含量比較，結(jié)果表明，各產(chǎn)地穿山龍中薯蕷皂苷含量有明顯差異。《中國藥典》2010年版規(guī)定，穿山龍中薯蕷皂苷的含量不得少于13.0mg·g－1［1］。研究結(jié)果表明，不同產(chǎn)地穿山龍的薯蕷皂苷含量差異較大，有3份樣品含量未達(dá)到《中國藥典》中的規(guī)定。比較幾個(gè)產(chǎn)地穿山龍的薯蕷皂苷含量，得出伊春產(chǎn)（黑龍江）含量最高，安徽產(chǎn)含量偏低。

本文的研究結(jié)果可為穿山龍藥材的臨床使用和制藥企業(yè)選擇原料提供依據(jù)。

［1］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典2010年版［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：250－251.

［2］ 侯娟，何文輝，王明霞，等.薯蕷皂苷的藥理作用［J］.河北醫(yī)藥，2004，26（1）：71.

［3］ 李兵雄，張朕華，唐曉紅，等.薯蕷皂苷片治療慢性腎臟疾病血脂異常的臨床研究［J］.中國醫(yī)藥指南，2011，9（18）：192－194.

［4］ 楊瑞豐，潘偉，張戈，等.薯蕷皂甙調(diào)節(jié)血脂異常的療效觀察［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2005，3（1）：14－15.

［5］ 狄曉萍，狄維鵬.薯蕷皂苷片治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病療效觀察［J］.醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2011，24（23）：2809－2810.

［6］ 李克明，董瑩，張永文，等.RP－HPLC法測定穿山龍中薯蕷皂苷的含量［J］.藥物分析雜志，2004，24（6）：640－641.

［7］ 昝麗霞，孫文基，張湛睿.黃姜的生態(tài)分布及化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.西北藥學(xué)雜志，2005，20（3）：138－139.

［8］ 徐雄良，張志榮，柯尊紅，等.RP－HPLC法測定穿山龍中薯蕷皂苷元的含量［J］.中國中藥雜志，2003，28（9）：885－887.

［9］ 柳全文.穿山龍的成分、藥理及臨床應(yīng)用研究概況［J］.山東中醫(yī)雜志，1998，17（1）：29－31.

Determination of dioscin in Rhizoma dioscoreae nipponicae from different areas by HPLC

GUO Hongxia1，LI Juan2，SONG Fei3，LIAO Weiping4，SHANG Bin5（1.Shaanxi Dauteen Diagnostic Reagent Limited Company，Xi′an 710075，China；2.the Western Suburbs of Xianyang City Water Supply Project Preparatory Department，Xianyang 712000，China；3.Qinling Mountains Fresh Ecological Agricultural Share Limited Company，Xi′an 710018，China；4.Shaanxi Stem Cell Technology Limited Company，Xi′an 710003，China；5.Xi′an Libang Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710075，China）

Objective To compare the contents of dioscin in Rhizoma dioscoreae nipponicae from different areas.Method HPLC method was used to detect dioscin.Results The results show that the contents of dioscin in Dioscorea nipponica Makino from different areas were quite different.Among the cities of Yichun，Lanzhou，and the southern Shaanxi，the highest content sample was from Yichun（19.7mg·g－1）.Conclusion The method is simple，accurate，and reproducible，and can be used as the quality control method of Rhizoma dioscoreae nipponicae.

HPLC；Rhizoma dioscoreae nipponicae；dioscin；comparison of content

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.006

R282

A

1004－2407（2015）02－0126－03

2014－07－01）